肝細胞癌転移の「患者様」同所同系マウスモデル

癌の転移拡散は、癌関連死の主要な原因です。私たちは、固形臓器腫瘍で転移のメカニズムを研究するための「患者様」同所同系マウスモデル系を確立するための私たちの生存の手術方法の詳細な説明を提供します。

この手順の全体的な目標は、肝細胞癌の転移のメカニズムを研究するための同所性同系マウスモデルシステムのような患者を確立することです。これは、最初にマウス肝細胞がん細胞を移植するために準備することによって達成されます。第2のステップでは、レシピエントの同系動物の腹部を開き、細胞を肝臓の右葉に注意深く注入します。

最終的に、この方法論の成功と再現性は、肝細胞がん転移の生物学的メカニズムを解明する上での広範な使用を推奨します。この技術がマウス異種移植腫瘍モデルのような既存の技術よりも優れている点は、当社のsyn遺伝子腫瘍モデルシステムにより、腫瘍転移における免疫応答の役割を調査できることです。私と一緒にこの手順を実演するのは、私たちの研究室の学部生であるミシェル・ナドゥです 移植のための細胞を準備するには、肝細胞癌細胞の60〜70%コンフルエント培養物を5ミリリットルのPBSで2回洗浄することから始まります。

細胞培養物を2ミリリットルのトリプシンと摂氏37度でインキュベートします。5分後、細胞を数え、PBSのミリリットルあたり5番目の細胞の10倍で希釈します。次に、細胞の100マイクロリットルアリコートをマウス1匹につき1本の滅菌1.5ミリリットルマイクロ遠心チューブに移し、細胞を氷上に置きます。

外科的処置を開始する前に、つま先で適切な麻酔レベルを確認してください。つまんで、16〜20グラムの健康な大人のbsyマウスの目に軟膏を塗り、動物の腹部の正中線の周りの約1インチの領域で剃ります。次に、ラテックス手袋をはめ、露出した皮膚を石鹸入りの消毒剤スクラブで数回洗い、続いて滅菌PBSを約5分間すすぎます。

皮膚の準備ができたら、手袋を捨て、適切な個人用保護具を着用します。処置中の麻酔薬低体温症を防ぐために外部熱源を提供し、次に動物、手足、尾に外科用テープを貼ってマウスを仰臥位に固定します。次に、xiphos胸骨のすぐ下にまっすぐな切開を行い、腹部を開くために滅菌自己保持外科リトラクターを使用します。

肝臓が見えたら、20ゲージの針を備えた1ミリリットルの注射器に1アリコートの細胞を吸引し、肝臓の右葉に100マイクロリットルの肝細胞癌細胞すべてをゆっくりと慎重に注入します。針を抜いた後、滅菌綿棒を少なくとも1分間塗布して出血を止めます。次に、吸収性縫合糸を使用して皮下組織を閉じ、続いて皮膚を閉鎖します。

サージカルクリップを使用して、別の消毒剤スクラブで傷口をきれいにし、皮下に100マイクロリットルの生理食塩水を投与します。その後、手術直後に、マウスをコンパニオンなしで紙の寝具で清潔なケージに少なくとも24時間移します。これらのBSYマウス肝臓に、10の5倍から10倍の1つのMEを移植しました。先ほど示したマウス肝細胞がん細胞。

肝細胞がんの発症に関する臨床上の証拠は、1匹のマウスの矢印で示されたように、63日後に観察できた。肝臓の表面に表在性腫瘍が認められ、腹壁にいくらか付着していました。このマウスの肺は、異常な形態を示し、出血性壊死の領域も示していました。

2番目のマウスでは、肝臓はひどく異常に見え、異常は予想されたコントロールとして表在性腫瘍に非常によく似ていました。移植されなかったマウスは、肝臓にも肺にも腫瘍を発症しませんでした。この同所性syn遺伝子マウスモデルを習得すれば、転移や肝細胞がんの生物学的メカニズムを解明するための優れたプラットフォームを提供することができます。