Name: 肝細胞癌転移の「患者様」同所同系マウスモデル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-10-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 6 s
Description: 学ぶ肝細胞癌転移の同所同系マウスモデル構築法。マウス肝細胞を調製し、同系マウスの肝右葉に移植することで、免疫応答を含む転移メカニズムを研究する再現性の高いモデルを確立する方法です。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

記事の校正をしてくださったPascal DuBoisさんに感謝いたします。著者はまた、ニューヨーク市立大学のハンターカレッジの動物施設の職員に感謝したいと思います。この研究は、ハンター大学へのNIH RCMI助成金によって支援されました。

倫理ステートメント すべての動物実験は、ニューヨーク市立大学ハンターカレッジの施設内動物管理使用委員会（IACUC）によって承認されました。 注：8 BALB / cマウスは、この実験手順で使用しました。五BALB / cマウスは、原発腫瘍を産生する5×10 6 BNL 1ME A.7R.1マウス肝細胞癌細胞を移植しました。無移植で三BALB / cマウスを対照として使用しました。 BNL 1ME A.7R.1は、マウス非腫瘍形成性肝細胞株BNL CL.2から化学変換によって得られたマウスの肝細胞癌細胞株です。 BNL 1ME A.7R.1は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ATCC）から入手しました。 1.手術前<ol><li>すべての生存の手術のためのマウスは健康であることを確認してください。マウスは健康であることを確実にするために、皮膚のテンティングによって脱水の兆候を検査します。疾患又はdのいずれかの証拠でマウスを使用しないでくださいこれらの実験でistress。 </li><li>彼らは低体重ではないであることを確認するために、マウスを計量。重量は少なくとも16〜20グラムであることを確認してください。 </li><li>マウスあたりの移植のための5×10 6 BNL 1ME A.7R.1マウスHCC細胞を準備します。 <ol><li> BNL 1ME A.7R.1マウスHCC細胞の70％コンフルエント細胞培養皿 - 10ミリリットルの60％から培地を吸引。 5ミリリットルPBSで2回洗浄します。皿にトリプシンの2 mlを加え、5分間空気および5％CO 2の加湿インキュベーター中、37℃でインキュベートします。 </li><li>その後、ピペット10μlを10倍の倍率で顕微鏡下で細胞計数のためのマニュアル血球計数器に細胞をトリプシン処理。 4大隅の正方形で見つかったセルの合計数をカウントし、細胞の総数によって希釈係数を掛けます。そして、カウント正方形の数で割ると、細胞濃度（1ml当たり細胞）のために10 6を掛け。 </li><li>計算を使用して、無菌マウスあたり5万個の細胞を収集1.5mlの微小管。 1.5mlの微小管にラベルを付けます。 </li></ol></li><li>リン酸緩衝生理食塩水（PBS）100μl中5×10 6 BNL 1ME A.7R.1マウスHCC細胞を再懸濁します。手術で移植まで氷上でこれらの細胞を保管してください。 </li><li>このような麻酔導入と髪が汚染を避けるために、滅菌装置・材料から離れクリッピングなどの手術のためのマウスの準備のために必要な活動を行います。 </li><li>毎分1リットル（約2.1％）の一定濃度の流量で酸素と一緒にイソフルラン気化器を使用して、イソフルランの吸入によってマウスに全身麻酔を誘導します。注：システムは、自立で、精密気化器、酸素供給及びガス/麻酔掃気のために必要な呼吸回路にリンクされているチャコールキャニスタを含んでいます。 </li><li>麻酔は、手術中に痛みを受けてから動物を防ぐために十分であることを確認してください。つま先のピンチを実行し、非responために動物を観察siveness麻酔を確認しました。 </li><li>その時、ノーズコーンにバルブライン、シールボックスに、オープンを切り替えます。 </li><li>すぐにマウスを麻酔されると、乾燥やダメージから予防措置として角膜に眼軟膏の少量を適用します。 </li><li>その後、適切に（メンテナンス麻酔のために）配置され、接続されたノーズコーンと、準備領域に動物を移動します。この準備エリアで脱毛することにより手術のための外科的切開部位を準備します。 </li><li>手術の面積は、他のすべての活動の自由位置にあることを確認してください。 </li><li>作業面は、手術前に頑丈かつ適切に消毒、汚れていないとすっきりであることを確認してください。リネンまたはそれ以上の外科手術用トレイの滅菌ピースを置きます。 </li><li>術野が手術を行う者のみに利用可能であることを確認してください。外科的な部屋は、適切なdisinfeで洗浄し、適切なクリーナーで掃引し、噴霧されていることを確認ctant。 </li><li>空気の流れは、サイトの汚染につながる塵を広げることができるようにそれはまた、ドアや窓から離れて配置されていることを確認してください。 </li><li>滅菌器具で生存手術を行います。どちらのメーカーの推奨またはオートクレーブに応じて消毒剤で楽器を浸します。使用するための準備ができている基本的な無菌の消耗品を使用してください。 </li><li>無菌区域の汚染を防ぐために機能に応じて個別の楽器。 </li><li>動物の肝臓にアクセスするために切開部位の周囲に約1インチ（正中切開）を剃ります。手術部位から離れた動物から毛を削除します。 </li><li>シェービング後、せっけん消毒剤（ベタジン外科的スクラブ）の領域をスクラブし、滅菌PBS溶液で余分な消毒剤を洗い流します。約5分を持続全体スクラブプロセスで、この数回を実行します。削除し、使用する手袋を廃棄しました。 </li><li>その後、このようなsurgicなどの防護服に変更アルガウン、スクラブトップ、およびフェイスマスク。次に、手術用手袋の上に置く前に、適切なスクラブ液で手を消毒します。注意：これは脱落し、潜在的な汚染物質と手術部位の汚染を防止するために必要なステップです。 </li></ol> 2.手術<ol><li>麻酔の全期間を通じて暖かさのための外部熱源を提供します。麻酔は、体温調節の乱れの原因となるため、動物は、いくつかの低体温症が発生する可能性があります。従って、体温を維持します。 </li><li>手術を通して、その背中の上にマウスを置きます。 </li><li>サージカルテープの作品で手術テーブルにフォア手足、後肢およびマウスの尾を修正。 </li><li> xyphisternumにすぐに劣る直線切開を行います。 </li><li>肝臓を露出させ、滅菌自己保持手術用開創器を使用してください。 </li><li>シリンジはゆっくりと慎重に、20G針を有する5×10 6 BNL 1ME A.7R.1を含む100μlのPBSを注入肝臓の右葉にマウスHCC細胞。 </li><li>針を除去した後、原因肝臓の高い血管分布に任意の潜在的な出血を止めるために、少なくとも1分間滅菌綿棒を適用します。 </li><li>外科用クリップを用いて皮膚の閉鎖に続いて吸収性縫合糸で皮下組織を閉じます。その後、ベータダインスクラブで再び傷をきれいにします。注意：これは、手術創の閉鎖を保証します。 </li><li>皮下に生理食塩水を100μlを与えます。 </li></ol> 3.手術後<ol><li>すぐに手術後、マウス条件の世話人を通知するために、手術後のIDカードできれいにケージにマウスを転送します。食料と水を提供します。注：最初の24時間の期間後に手術のためのウェットフードと水を単独で収容された場合は、当社の経験では、ちょうど手術を受けたマウスは最高の運賃になります。 </li><li> 38ºCを超えない熱を発生する熱ランプで動物を暖かく保ちます。 Uマウスが完全に回復するまで、温度を測定する温度計をSE。 </li><li>ハウスの快適性を確保するために、紙の寝具と好ましくはケージ内の動物。 </li><li>最初の回復後、不快感、出血、痛みや苦痛の徴候のために動物を監視します。痛みを和らげるためにブプレノルフィン（0.05 -0.1ミリグラム/キログラム）を与えます。密接に約2時間の活動、行動、外観だけでなく、水や食料の消費量を監視します。歩行した場合、マウスを定期的に通常の住宅のためのバックエリアに動物を移動し、24時間後に手術のために6-12時間間隔で監視し続けます。必要に応じて重量チェックを実行します。 </li><li>しかし、動物が療養問題を抱えている場合、適切な支持療法の行動を取ります。マウスは回復できない場合は、人道的に、CO 2窒息と頸椎脱臼を経由して、マウスを安楽死させます。安楽死のために承認された機関のガイドラインに従ってください。 </li><li>手術後、通常observabあるHCCの臨床的証拠をチェックしますルボディコンディションスコアの大幅な削減など。注：この時点では、原発腫瘍は、おそらく肝臓で開発しており、転移性預金は、おそらく肺に開発しました。 </li><li>この時点で、人道的な安楽死によって実験に関与し（実験及びコントロール）すべてのマウスを生け贄に捧げます。二酸化炭素窒息にマウスを件名：非常にゆっくりと5〜10分かけてチャンバー内に二酸化炭素を放出します。これは、呼吸停止の原因となります。 </li></ol>

<ol><li>Sheng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capture%2C+release+and+culture+of+circulating+tumor+cells+from+pancreatic+cancer+patients+using+an+enhanced+mixing+chip%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">Capture, release and culture of circulating tumor cells from pancreatic cancer patients using an enhanced mixing chip.</a> Lab on a Chip. 14, 89-98 (2014).</li>
<li>Ogunwobi, O. O., Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+and+prognostic+importance+of+epithelial-mesenchymal+transition+in+liver+cancers%3A+insights+from+experimental+models%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Reviews+in+Oncology%2FHematology%22%5BJournal%5D)">Therapeutic and prognostic importance of epithelial-mesenchymal transition in liver cancers: insights from experimental models.</a> Critical Reviews in Oncology/Hematology. 83, 319-328 (2012).</li>
<li>Ogunwobi, O. O., Puszyk, W., Dong, H. J., Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+upregulation+of+HGF+and+c-Met+drives+metastasis+in+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Epigenetic upregulation of HGF and c-Met drives metastasis in hepatocellular carcinoma.</a> PloS One. 8, e63765(2013).</li>
<li>Ogunwobi, O. O., Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatocyte+growth+factor+upregulation+promotes+carcinogenesis+and+epithelial-mesenchymal+transition+in+hepatocellular+carcinoma+via+Akt+and+COX-2+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Hepatocyte growth factor upregulation promotes carcinogenesis and epithelial-mesenchymal transition in hepatocellular carcinoma via Akt and COX-2 pathways.</a> Clinical and Experimental Metastasis. 28, 721-731 (2011).</li>
<li>Fujiwara, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+animal+model+for+in+vivo+study+of+liver+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology+%3A+WJG%22%5BJournal%5D)">A novel animal model for in vivo study of liver cancer metastasis.</a> World Journal of Gastroenterology : WJG. 18, 3875-3882 (2012).</li>
<li>Wirtz, D., Konstantopoulos, K., Searson, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+physics+of+cancer%3A+the+role+of+physical+interactions+and+mechanical+forces+in+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">The physics of cancer: the role of physical interactions and mechanical forces in metastasis.</a> Nature Reviews Cancer. 11, 512-522 (2011).</li>
<li>Heindryckx, F., Colle, I., Van Vlierberghe, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+mouse+models+for+hepatocellular+carcinoma+research%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Experimental+Pathology%22%5BJournal%5D)">Experimental mouse models for hepatocellular carcinoma research.</a> International Journal of Experimental Pathology. 90, 367-386 (2009).</li>
<li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vivo+mouse+model+of+metastatic+human+thyroid+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid+Official+Journal+of+the+American+Thyroid+Association%22%5BJournal%5D)">An in vivo mouse model of metastatic human thyroid cancer.</a> Thyroid Official Journal of the American Thyroid Association. 24, 695-704 (2014).</li>
<li>Menezes, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+engineered+mice+as+experimental+tools+to+dissect+the+critical+events+in+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Genetically engineered mice as experimental tools to dissect the critical events in breast cancer.</a> Advances in Cancer Research. 121, 331-382 (2014).</li>
<li>Ogunwobi, O. O., Wang, T., Zhang, L., Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclooxygenase-2+and+Akt+mediate+multiple+growth-factor-induced+epithelial-mesenchymal+transition+in+human+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Gastroenterology+and+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Cyclooxygenase-2 and Akt mediate multiple growth-factor-induced epithelial-mesenchymal transition in human hepatocellular carcinoma.</a> Journal of Gastroenterology and Hepatology. 27, 566-578 (2012).</li>
<li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hallmarks+of+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The hallmarks of cancer.</a> Cell. 100, 57-70 (2000).</li>
<li>Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissemination+and+growth+of+cancer+cells+in+metastatic+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites.</a> Nature Reviews Cancer. 2, 563-572 (2002).</li>
<li>Kim, M. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+self-seeding+by+circulating+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Tumor self-seeding by circulating cancer cells.</a> Cell. 139, 1315-1326 (2009).</li>
<li>Stolpe, A., Pantel, K., Sleijfer, S., Terstappen, L. W., den Toonder, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+tumor+cell+isolation+and+diagnostics%3A+toward+routine+clinical+use%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Circulating tumor cell isolation and diagnostics: toward routine clinical use.</a> Cancer Research. 71, 5955-5960 (2011).</li>
<li>Saad, F., Pantel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+current+role+of+circulating+tumor+cells+in+the+diagnosis+and+management+of+bone+metastases+in+advanced+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Oncology%22%5BJournal%5D)">The current role of circulating tumor cells in the diagnosis and management of bone metastases in advanced prostate cancer.</a> Future Oncology. 8, 321-331 (2012).</li>
</ol>

著者らは、競合する金銭的利益はないと宣言している。

この記事では、この方法の詳細な説明は、（ 図2）ことが最近OgunwobiとHCC転移の同所性同系マウスモデルの確立に成功の同僚によって報告された与えられている3。この手順のために、腫瘍の取り込み率は、一般的に高いです。我々は以前の100％3の腫瘍取り込み率を観察しました。しかし、テイク率は研究者の能力に応じて可変とすることができます。トレーニングの下に新しい大学院生によって行われた最近の実験では、腫瘍取り込み率は40％と低かったです。ほとんどの実験は4で終了しているが - 3週間 - ボディコンディションスコアの低下に起因する6週間、私たちは、原発腫瘍が2によって確立することができる同一のマウスに同じ細胞の皮下移植の経験から考えています。私たちは通常、成功した実験から1つの腫瘍結節を見ることを期待します。我々は肺転移が4との間に発展することを期待が、そして - 6週間、それはcon​​ceivです肝臓内の腫瘍がかなり早い時期に起こり得ることができます。 良い外科技術と無菌状態は、この生存手術方法の成...

肝細胞癌(HCC)は、予後が悪く、平均余命が短い、最も致命的な癌の一つです。がん関連の死亡のほぼすべては、発生元の臓器から追加の遠隔臓器への疾患の転移性転移によるものです2-6。HCCの進行は複雑なプロセスです。したがって、動物モデルの転移性HCCに自然に見られる腫瘍微小環境をモデル化できることは、ヒトの関連メカニズムを明らかにするための成功した有用な方法であることが証明される可能性があります。7名残念ながら、がんの転移のメカニズムはまだほとんどわかっていません。そのため、HCC3,5などのがんの転移の分子メカニズムを解明するための動物モデルを確立する必要があります。
マウスモデルシステムは、転移性ヒト癌の治療のためのメカニズムを描写し、新しい戦略を評価するための非常に有用なアプローチです5,8。現在存在するさまざまなマウスモデルシステムは、疾患の複雑さを正しく描写するための研究者の努力の証です5,8,9。
Ogunwobiらは最近、HCC3の転移を研究するための新しい同所性同系マウスモデルの確立を実証するために、生存外科的アプローチを使用しました。彼らの研究は、侵攻性および転移性HCCの特徴を再現する「患者様」マウスモデルを確立しました3。さらに、このマウスモデル系は、循環腫瘍細胞の生物学の研究に利用できること、また、がん転移のメカニズムについて新たな知見を得る可能性を秘めていることを実証しました3。
この論文の目的は、HCC転移3のこの「患者様」同所性同系マウスモデルを確立する際に使用された方法論を詳細に説明することです。近交系野生型免疫コンピテント実験用マウス系統BALB/c3の肝臓(起源器官)にBNL 1ME A.7R.1マウスHCC細胞を直接移植する方法について、生存手術を用いて説明する。ヒト腫瘍細胞が免疫不全マウスに移植される他のマウス異種移植腫瘍モデルとは異なり、このシステムは同系であるため、腫瘍転移における免疫系の役割を研究するのに適しています3,5,8。このアプローチは、固形臓器がんの転移メカニズムの研究に広く使用されるようになると思われます。

<table><tbody><tr><td>マイクロ解剖ピンセット&nbsp;</td><td>Roboz</td><td>(RS-5040)</td><td>チップ0.20 x 0.12 mm</td></tr><tr><td>Graefeマイクロ解剖鉗子、鋸歯状湾曲先端</td><td>Roboz</td><td>(RS-5111)</td><td>1 X 2歯、湾曲先端幅0.6 mm</td></tr><tr><td>マイクロ解剖リトラクター-アグリコラ(3 x 3プロング)</td><td>Roboz</td><td>(RS-6501)</td><td>鈍い3 X 3プロング、深さ4 mm、スプレッド25 mm</td></tr><tr><td>マイクロディスセクションリトラクター-ゴールドスタイン(3 x 3プロング)</td><td>Roboz</td><td>(RS-6503)</td><td>鈍い、3 X 3プロング、深さ4 mm、スプレッド19 mm</td></tr><tr><td>Jameson Caliper(腫瘍を測定)</td><td>Roboz</td><td>(RS-6466)</td><td>80 mm / 3インチスケール、クロムメッキ&nbsp;</td></tr><tr><td>マイクロ解剖はさみ、大きなリングはさみ、まっすぐで鋭い</td><td>Roboz</td><td>(RS-5852)</td><td>23 mmブレード、長さ4インチ、フラットシャンクと大きなリングブレード</td></tr><tr><td>付きメス、繊細な解剖手順のための</td><td>Roboz</td><td>(RS-9861-36)</td><td></td></tr><tr><td>メスハンドル&nbsp;</td><td>Roboz</td><td>(RS-9884)</td><td>ソリッド</td></tr><tr><td>リタウアーステッチはさみ</td><td>Roboz</td><td>(RS-7074)</td><td>長さ4.5インチ茶色の</td></tr><tr><td>針ホルダー、簡単に縫合できる</td><td>Roboz</td><td>(RS-7960)</td><td>凸顎、細かい鋸歯状反射7MM</td></tr><tr><td>創傷クリップ反射7クリップアプラ</td><td>イヤーRoboz</td><td>(RS-9262)</td><td>安全で確実な創傷閉鎖の代替方法</td></tr><tr><td>器具トレイと蓋</td><td>Roboz</td><td>RT-1350S</td><td></td></tr><tr><td>ミニクリッパー ブレード着脱</td>式 <td>Roboz</td><td>(RS-5903)</td><td></td></tr><tr><td>Germinator 500 (Germ Terminator) ドライ滅菌器</td><td>Roboz</td><td>DS-400, Ds-401, DS-501</td><td>マイクロ解剖器具の迅速な除染に。&nbsp;機器は15秒以内に除染します。&nbsp;</td></tr><tr><td>マイクロインジェクション針</td><td>VWR</td><td>BD305125</td><td>25G ニードル</td></tr></tbody></table>

肝細胞癌転移の「患者様」同所同系マウスモデル

A "Patient-Like" Orthotopic Syngeneic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma Metastasis

癌関連の死亡の大部分は、原発腫瘍自体ではなく、癌の転移によって引き起こされます。しかし、がんの転移の根本的なメカニズムはまだ不明です。動物モデルは、転移性がんの治療メカニズムを解明し、新しい戦略を評価するために不可欠です。ここでは、固形臓器腫瘍の転移メカニズムを探るための「患者様」同所性同系マウスモデルについて詳しく説明します。近交系野生型免疫コンピテント実験用マウス株BALB/cの肝臓(起源器官)へのBNL 1ME A.7R.1マウス肝細胞癌細胞の生存外科的移植が記載されている。この方法論の成功と再現性は、固形臓器がん転移の生物学的メカニズムを解明する上での広範な使用を推奨しています。

Balb / cマウスの肝臓は、5×10 6 BNL 1ME A.7R.1マウスHCC細胞を移植しました。 HCC開発の臨床的証拠は63日、手術後に観察しました。これにより、マウスを人道的に安楽死させました。剖検を安楽死させたマウスで行いました。肺と肝臓を切除し、慎重な肉眼的検査は肉眼で見える腫瘍を同定するために実施しました。 1マウスでは、表在性腫瘍は腹壁（ 図1A）にはいくつかのファイルが添付された肝臓の表面に観察されました。 2番目のマウスでは、異常に見える肝臓を観察しました。異常が非常に強く表在性腫瘍（ 図1B）のように見えます。予想されるようにコントロールマウスからの肝臓（ 図1D）、肺（ 図1E）によって証明されるように、BNL 1ME A.7R.1 HCC細胞の移植なしで対照群のマウスには、何の腫瘍を発症していません。また、腫瘍を有するマウスからの肺はやや異常に見えた、ディスプレイ出血性壊死のる領域（ 図1C）。以前の経験に基づいて...

癌の転移拡散は、癌関連死の主要な原因です。私たちは、固形臓器腫瘍で転移のメカニズムを研究するための「患者様」同所同系マウスモデル系を確立するための私たちの生存の手術方法の詳細な説明を提供します。

The majority of cancer-related deaths are caused by the metastasis of the cancer rather than the primary tumor itself. Yet, the underlying mechanisms of ...

この手順の全体的な目的は、肝細胞癌における転移メカニズムを研究するための、患者に近い同系正位移植マウスモデルシステムを構築することです。まず、移植用のマウス肝細胞癌細胞を調製します。次に、レシピエントとなる同系動物の腹部を開き、肝臓の右葉に細胞を慎重に注入します。最終的に、本手法の成功と再現性は、肝細胞癌転移の生物学的メカニズムを解明するための広範な利用に推奨されます。マウス異種移植腫瘍モデルのような既存の手法に対する本技術の主な利点は、我々の同系腫瘍モデルシステムにより、腫瘍転移における免疫応答の役割を調査できることです。本手順の実演を担当するのは、当研究室の学部生であるMichelle Naduです。移植のための細胞調製を開始するには、まず、コンフルエンスが60～70%の肝細胞癌細胞の培養物を、5 mLのPBSで2回洗浄します。細胞培養物を2 mLのトリプシンと共に37 °Cでインキュベートします。5分後、細胞数をカウントし、PBSを用いて5 × 10⁵ cells/mLに希釈します。次に、マウス1匹あたり100 µLずつ細胞を滅菌済みの1.5 mLマイクロ遠心チューブに分注し、氷上に置きます。外科処置を開始する前に、足指への刺激により麻酔レベルが適切であることを確認します。体重 16 から 20 g の健康な成体 bsy マウスの目をピンチし、軟膏を塗布した後、動物の腹部正中線周辺の約 1 インチの範囲を剃毛します。次に、ラテックス手袋を着用し、露出した皮膚を石鹸入り消毒剤で数回洗浄し、続いて滅菌 PBS で約 5 分間すすぎます。皮膚の準備が整ったら、手袋を捨て、適切な個人用保護具を着用します。処置中の麻酔による低体温症を防ぐため、外部熱源を供給し、マウスを仰臥位に固定するために四肢と尾にサージカルテープを貼ります。次に、剣状突起の直下を直線的に切開し、滅菌済みの自動開創器を用いて腹部を開きます。肝臓が露出したら、20ゲージの針を装着した1 mLシリンジで細胞を1アリコート分吸引し、肝細胞癌細胞100 µLすべてを肝右葉にゆっくりと慎重に注入します。針を抜いた後、滅菌綿棒で少なくとも1分間圧迫し、止血します。その後、吸収性縫合糸を用いて皮下組織を縫合し、続いて皮膚を閉鎖します。サージカルクリップを用いて、別の消毒液で創部を洗浄し、正常生理食塩水を100 µL皮下投与します。その後、手術直後にマウスを単独で清潔なケージに移し、少なくとも24時間は紙製の敷材を使用します。これらのBSYマウスの肝臓に、前述のように5 × 10⁶個のME.Aマウス肝細胞がん細胞を移植しました。1匹のマウスにおいて、矢印で示されるように、63日後に肝細胞癌の発生に関する臨床的証拠が観察されました。肝臓の表面に浅い腫瘍が認められ、一部が腹壁に付着していました。このマウスの肺は形

a-patient-like-orthotopic-syngeneic-mouse-model-hepatocellular

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

盲腸に皮下腫瘍の一部の盲腸壁や移植に癌の細胞懸濁液の注入：2つのテクニックは、このモデルを確立するために使用することができます。このモデルでは、大腸癌の自然な進行を勉強し、大腸癌に対する新しい治療薬をテストするのに便利です。...

大腸癌の同所性マウスモデル

免疫不全マウスにおけるヒト腫瘍の異種移植は、癌の生物学を研究するための貴重なツールです。ヒト肝細胞癌細胞または腫瘍断片の皮下および肝臓内異種移植片を生成するための特定のプロトコルが記載されている。レシピエントマウスにおいて、部分肝切除により誘発される肝臓再生は、肝移植を容易にするための戦略として提示される。...

免疫不全マウスの皮下および肝内ヒト肝細胞癌異種移植片の生成

肝転移の前臨床マウスモデルは、半脾臓注入技術を介して行う。...

肝転移の前臨床マウスモデル

同所性乳癌原発腫瘍モデルおよび原発腫瘍の外科的除去が記載されている自然転移を生成するために、マウスの寿命を延長します。腫瘍の増殖および進行をモニターし、ルシフェラーゼ蛍光イメージングにより定量化されます。...

自発的乳がん転移の同所性マウスモデル

前立腺癌は、米国で癌関連の死亡原因として2番目に多いものです。同所性がんモデルは、前立腺がんの生物学を理解し、治療レジメンの有効性を評価するための有用なアプローチを提供します。このプロトコルでは、同所性前立腺がんマウスモデルを確立するために必要な詳細な手順について説明します。...

ヒト前立腺癌の前臨床同所性マウスモデル

免疫適格マウスにおける腎細胞癌の同所性モデルの実装では、研究者、同じ動物における原発性腎腫瘍および肺転移の存在によって定義される臨床的に関連するシステムを提供します。このシステムは、前臨床in vivoでの様々なトリートメントをテストするために使用することができます。...

定量的および前臨床治療の縦評価のための転移性腎細胞癌の同系マウスモデル

ここでは、肝細胞癌(HCC)の典型的な免疫特徴を要約した肝癌の臨床的に関連するマウスモデルの開発について述べた。...

肝炎症と線維症の設定に起因する肝細胞癌の腫瘍性肝細胞誘発性オルコトピックマウスモデル

オルソトピックヒト肝転移性ブドウ球色黒色移植マウスモデルは、培養ヒトブドウ色腫細胞株を用いた患者由来腫瘍チャンクおよび針注射技術を用いた外科的オルトトピック移植技術を用いて作成された。...

免疫不全マウスにおける肝直交細胞性ヒトうveal黒色腫異種移植プラットフォームの生成

ここでは、肝動脈結紮の有無にかかわらず同所性肝細胞癌異種移植片を作成し、[18 F]フルオロミソニダゾール([18 F]FMISO)および[18...

肝細胞癌の同所性モデルマウスにおける非侵襲的PET/MRイメージング

膵管腺癌(PDAC)の同系マウス同所性同種移植片は、疾患サブタイプの生物学、表現型、および治療反応を再現します。迅速で再現性のある腫瘍進行により、前臨床試験で広く使用されています。ここでは、これらのモデルを生成するための一般的な方法を示し、同系マウスPDAC培養物を膵臓に注入します。...

膵臓癌モデルへの同系マウス同所性同種移植片

学ぶ肝細胞癌転移の同所同系マウスモデル構築法。マウス肝細胞を調製し、同系マウスの肝右葉に移植することで、免疫応答を含む転移メカニズムを研究する再現性の高いモデルを確立する方法です。

肝細胞癌転移の「患者様」同所同系マウスモデル

さらに動画を探す