マルチ組織ブロック内のスポットの正しい組織毎回

この手順の全体的な目標は、マルチティッシュパラフィンブロックの組織同定を支援するツールを構築することです。これは、まずHistoGelと組織マーキング色素を組み合わせて、鮮やかな色のゲルプラグを形成することで実現されます。2番目のステップは、標準的な組織処理および埋め込み技術に従って、着色されたHistoGelプラグを処理および埋め込むことです。

次に、生検パンチを使用して小さなシリンダーを取り外します。これらは、標本の向きタグまたはスポットです。最後のステップは、スポットをマルチティッシュブロックに埋め込むことであり、スポットの位置と各サンプルは簡単に参照できるように慎重に文書化されています。

最終的に、このスポットは、組織マイクロアレイやマルチ組織ブロックにおける標本の向きと同定のための明確な視覚的手がかりを提供します。縫合糸や非対称コアなどの既存の方法に対するこの手法の主な利点は、スポットが組織を変化させず、最適な分析のためにサンプルの配置に柔軟性を持たせることです。この方法のアイデアを最初に思いついたのは、研究者から複数の動物の組織標本を1つのパラフィンブロックに結合してコストを節約し、分析を簡素化するという依頼を受けたときでした。

混合物が完全に溶解するまで、少なくとも1分間ボルテックスします。次に、9ミリリットルのヒドロキシエチルアロス処理ゲルを15ミリリットルの円錐管にロードし、電子レンジで30%の電力で加熱します。ゲルが完全に溶けるまで、10秒刻みで熱をパルスします。

次に、溶融した処理ゲルと染料BSA溶液を1つの15ミリリットルの円錐管に結合し、ピペットで完全に混合します。次に、溶液をボルテックスし、冷蔵庫に数時間移して固化させます。固まったら、細いヘラで優しく放出することにより、ゲル内の固体拡張液を取り除きます。

プラグを5mmの厚さのセクションにスライスします。丸みを帯びた端は使用しないでください。3〜6切片を組織学カセットに移し、70%エタノールに浸し、70%エタノール溶液を2〜4時間ごとに交換し、プラグが完全に脱水されるまで24時間以上少なくとも3回交換します。

彼らはマーキング染料の一部をエタノール溶液に浸出させます。新鮮なエタノールの変更を最初に使用すると、余分な染料の一部を洗い流すのに役立ち、その結果、色が浸出する可能性が低いクリーンなプラグが得られます。次に、カセットを80%エタノールに移し、次に95%エタノールに各浴で1時間移します。

色素がゲルプラグから漏れることがあり、他の組織や自動ティッシュプロセッサーの液体試薬に影響を与える可能性があります。そのため、手動による脱水症状を強くお勧めします。ただし、自動処理も同様に効果的です。

100%エタノールで3回、それぞれ1時間ずつ洗浄して脱水を完了します。各浴槽で1時間、atic炭化水素またはキシレンに3回浸して、サンプルを清澄化します。次に、1時間のバスを3回使用してセクションに潜入します。

溶融パラフィンで。通常通り加工切片を埋め込み、ブロックが室温になったら、真皮パンチ針でスポットコアを作製します。1つのブロックで22mmのコア、またはさらに1.5mmのコアを作ることができます。

まず、一緒に埋め込む個々の組織片の望ましい位置と同一性、およびスポットの位置を示す図を作成することから始めます。手元に置いておくコピーを準備します。検体オリエンテーションタグをうまく使用するには、すべての生物試料の位置とスポットに対する位置を正確に詳述した、明確でわかりやすい生物試料マップが必要です。

ティッシュペーパーを加工した後、埋め込みステーションに並べます。組織配向図によると、正しい配向は絶対に重要です。また、スポットコアがブロックに埋め込まれるすべての組織片よりも背が高いことも重要です。

ティッシュの整理が完了したら、スポットを埋め込みます。パラフィンが固まるまで、各スポットを鉗子で直立させて、パラフィンが倒れないようにします。1分か2分で十分です。

手動TMAキットの場合は、TMA型に溶かしたパラフィンを充填します。金型が冷却されている間、アレイのマージンに同様の方法でスポットを取り付けます。次に、スポットでセクションをセクション化して染色します。

標準的なアプローチを使用して、ここでは5ミクロンのセクションが作成されます。スライドにセクションを置くには、摂氏40度のウォーターバスに浮かべてから、正に帯電したスライドガラスに移します。スライドに取り付けたら、摂氏60度で少なくとも20分間乾燥させます。

スライドは、手動または自動染色システムで染色できるようになりました。ルーチンのh染色およびd染色では、特殊な染色または免疫組織化学スポットが丸い鮮やかな色として現れました。パラフィンブロックとすべてのパラフィンセクション。

スポットにより、異なる個人や治療グループからの類似した外観の組織を含むマルチ組織ブロックで、簡単に配向し、組織を同定することができました。組織で使用する場合、マイクロアレイスポットは、すべてのコアを貴重な組織サンプルに利用することができ、組織マイクロアレイコアに隣接するスポットを簡単に選択することができました。この手順を試行する際には、生体試料とブロック内のスポットを正確かつ明確に文書化することが、その成功裏の使用に不可欠であることを覚えておくことが重要です。

このビデオを見れば、マルチティッシュパラフィンブロックの組織同定補助剤として標本オリエンテーションタグを簡単に作成し、使用する方法を十分に理解できるはずです。