別の雑草種の堅牢な除草剤抵抗性試験のためのプロトコル

この手順の全体的な目標は、さまざまな雑草種や除草剤の除草剤耐性をテストおよび確認し、除草剤耐性レベルを推測することです。これは、除草剤処理を生き延びた植物から採取した種子の休眠状態を最初に破り、発芽と実生の出現を同時に得ることによって達成されます。数日から1週間以上に猛威を振るう種子の春化の期間が必要です。

2番目のステップは、硝酸カリウムを含むオーガーメディウムをプラスチック皿に注ぐことです。次に、バーンの種子を固化したオーガーに置き、皿を各雑草種に最適な条件で発芽キャビネットに移します。次に、15〜20本の苗木を、標準的なポッティングミックスで満たされたプラスチックトレイに移植します。

各トレイには、一意の識別のためのすべての情報を含むバーコードが割り当てられ、苗木が2〜3枚の葉の段階に達するまで、トレイは加熱された温室に置かれます。最後のステップは、精密ベンチ噴霧器を使用した除草剤処理であり、すべての除草剤は、推奨される界面活性剤を含む市販の製剤として、推奨されるフィールド用量の2回投与で適用され、治療の3〜4週間後に最終評価が行われます。バーコードリーダーを使用して、生存した植物の数と実験単位あたりの視覚的推定バイオマスを記録します。

その後、データをコンピューターにダウンロードして分析し、除草剤耐性の状態を判断します。この方法がin vivoまたはin vitroの診断スクリーニング検査と比較した場合の主な利点は、その堅牢性と柔軟性に関連しています。言い換えれば、この方法は信頼性が高く、わずかな適応によって幅広い種に容易に適応させることができます。

この方法は、耐性のパターンやレベルなど、CROフィールドにおける除草剤耐性雑草集団の研究と管理に関連する重要な質問に答えるのに役立ちます。また、応答実験などのさらなる実験ステップを適切に計画することもできます。一般的に、除草剤耐性試験に不慣れな研究者は、特定の実験条件を考慮し、適応させる必要がある多くのステップと側面のために苦労するでしょう。

まず、一度に1つの種から種子サンプルを収集し、一意のコードを割り当てます。籾殻を取り除き、種子を運搬して種子をきれいにします。各サンプルのフォームに、割り当てられた一意のコードを入力します。

種の名前、収集日、GPS座標、市区町村、農家の名前、畑の大きさ、季節に使用された作物の除草剤、畑の歴史的記録。種子は、割り当てられた一意のコードでラベル付けされた密封されていない紙袋に保管します。水分を蒸発させますが、種子を高温や極端な温度変動にさらさないでください。

二次休眠の誘発を避けるため。きれいにした種子は、春化を防ぐために摂氏4度で暗い部屋に保管します。プラスチック皿に脱イオン水を入れます。

2つのディスクと濾紙のストリップをカットし、毛細管を介して水と2つのディスクの間に橋を形成します。濾紙を水に浸し、プラスチック皿に入れます。次に、風乾した種子を紙の上に置きます。

プラスチック皿を必要な時間、摂氏4度に移します(種によって異なります)。次に、脱イオン水を使用して0.1%の硝酸カリウムを含む0.6%のオーガー溶液を調製し、オーガーを電子レンジに溶かし、オーガー溶液をプラスチック皿に注ぎます。基質が冷えたら、発芽するバーンシードを固化したオーガーに置きます。

プラスチック製の皿を発芽キャビネットに入れます 春化の持続時間だけでなく、光と温度の条件は雑草の種類によって異なります。直接縫製の代わりに移植すると、除草剤治療の性能を最適化するための重要な前提条件である同じ成長段階で植物の均一なスタンドを得ることができます。これは、60%シルトローム、土壌、15%の砂、15%のアグリパーライトの標準的な培養土で満たされたプラスチックトレイに15〜20本の苗木を移植します。 そして10%泥炭。各トレイをバーコードで識別し、その情報には、試験対象の固有識別ポピュレーションコード除草剤、複製数、プログレッシブトレイ番号のすべての情報が含まれます。

トレイを加熱された温室に置き、必要に応じて植物に水をやって、基質をフィールド容量またはそれに近い状態に保ちます。成長温度は、発芽後除草剤の雑草種によって異なります。スプレープラントは、2〜3枚の葉の段階に達すると、ラベルの指示に従って界面活性剤溶液を大量に調製し、最終濃度は通常、最終体積のパーセンテージとして表されますか、それとも単位面積ごとに分布する体積ですか?

界面活性剤溶液に溶解する市販製品の量を計算します。この式を使用して、除草剤の投与量は、推奨されるフィールド投与量に最大試験用量を掛け、溶液の最終容量をベンチ噴霧器によって供給される容量で割ることによって計算されます。最も濃縮された除草剤溶液を準備する まず、除草剤溶液を3倍に希釈して、濃度の低い溶液を調製します。

この手順により、除草剤の計量やピペッティング時にミスを犯す可能性が低くなります。除草剤溶液。濃度は、単位面積あたりの分布する体積として表されます。

除草剤の投与量を減らして治療のシーケンスを開始します。このように、同じ除草剤で2つの処理の間に噴霧キャビネットを洗浄する必要はありません。精密ベンチ噴霧器を使用して除草剤溶液を分配し、3つのフラットファン油圧ノズルを備えたブームを使用して、215キロパスカルの圧力と毎秒0.75メートルの速度でヘクタールあたり300リットルを供給します。

除草剤を交換するときは、1%漂白剤を使用してスプレーキャビネットを2回洗浄し、すすぎます。評価は、除草剤の試験記録、処理を生き残った植物の数、およびバーコードリーダーを使用して視覚的に推定されたバイオマスまたはVEBに応じて、処理の3〜4週間後に行います。植物は、色やその他の外観に関係なく、活発な成長を示さない場合、死んでいると評価されます。

VEBは、同じ集団の処理済みと未処理のチェックとの間の植物バイオマスの視覚的比較を通じて取得されます。除草剤の影響を受けていない植物の10から、植物が明らかに死んでいる場合はゼロまでのスコアが、処理された各トレイに与えられます。除草剤で一度もまたはめったに処理されなかった場所で収集された集団など、すべての実験に感受性の高い集団を含めることにより、一般的な治療効果を評価します。

除草剤処理の直前にカウントされた処理された植物の数に対する植物の生存率を表し、標準誤差を計算します。パーメ値は、除草剤の投与量が5%未満の植物が生き残った場合に影響を受けやすい2つの除草剤用量の処理から得られた結果に基づいて、集団を4つのカテゴリーに分類します。生存者が除草剤の投与量で5%から20%の範囲であった場合、1 x わずかに耐性があります。

草剤の投与量で20%以上の植物が生き残った場合、1 x耐性。生存者が除草剤の投与量が20%以上、除草剤の投与量が1倍以上、除草剤の投与量が10%を超える場合、1倍と非常に耐性があります。4つのiopa集団に対するパノラムによる除草剤処理の3つのx代表的な結果が示されています。

感受性チェックは完全に制御されましたが、個体数1410は、生き残った植物の20%未満がわずかに耐性があると分類されました。個体数1411は3回×線量で制御されましたが、1××線量での植物の生存率は20%以上となり、それが私たちの地位に起因するとされました。最後に、個体群1412は、推奨される野外線量の1倍または3倍で制御されなかったため、高耐性のカテゴリーに割り当てられました。

トリエンロンメチルで処理された植物のポップまたはリハス植物におけるバイオマスの視覚的推定に関する2番目の例をここに示します。未処理のコントロールにはスコア 10 が割り当てられますが、植物が完全に制御されたトレイの VEB は 0 です。トレイには中間スコア5が割り当てられます。

総植物バイオマスを有することは、植物が除草剤処理の影響を受けなかったため、非常に耐性を有する未処理のコントロールに匹敵するバイオマスを有する植物トレイの半分であり、VEBは10である。この手順を試みる際には、成熟したときに収集され、その後復元されるべきであった雑草種子の品質が、この手順に従う実験の成功に強い影響を与えることを覚えておくことが重要です。抵抗のレベルに関連する追加の質問に正確に答えるために、それらの応答byasのような他の方法を実行することができます。

このビデオを見れば、除草剤耐性試験へのアプローチ方法と、さまざまな雑草種にさまざまなステップを適応させる方法について十分に理解できるはずです。特に、シードCYブレーキングとシード発芽。除草剤や濃酸の取り扱いは非常に危険である可能性があり、この手順を実行する際には、マスク、手袋、その他の個人用保護具を常に着用するなどの予防措置を講じる必要があることを忘れないでください。