Name: 別の雑草種の堅牢な除草剤抵抗性試験のためのプロトコル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-02T11:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 52 s
Description: 学ぶ堅牢な除草剤抵抗性試験プロトコル。種子休眠打破、硝酸カリウムを用いた発芽促進、移植法により、多様な雑草種の抵抗性レベルを正確に評価する柔軟な手法を習得できます。

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この研究は、イタリアの国立研究評議会(CNR)によって支援されました。著者らは、種子サンプルを収集してくれたGIREのメンバーに感謝し、英語を改訂してくれたAlison Garsideに感謝しています。

1.種子採取と保管<ol><li>不利な気候条件や低品質の除草剤処理に起因するものではない不当な貧弱な除草剤の性能のための耕地、 すなわち、監視します。 </li><li>一度に一つの種からの種子のサンプルを収集し、一意のコードを割り当てます。成熟した種子は、通常、除草剤処理（複数可）を生き残った植物から作物の収穫前に収集されます。ときに成熟した種子は母植物により流されているかどうかを観察するためのタイムリーなモニター。 </li><li>種、収集日、GPS座標、市町村、農業者の名前、フィールドのサイズ、蔓延レベル、作物、除草剤（複数可）シーズン中に使用すると、フィールドの歴史的な記録の割り当てられた固有のコード、名前を示す各サンプルのフォームに記入。 </li><li>フィールドの侵入を代表するものであり、少なくとも30ランダムに選択された植物からの種子を収集します。種子サンプルは、少なくとも5,000成熟種子が含まれていることを確認してください。絶対異系交雑雑草種のための（ 例えば、ライグラス属やアマランサス属 ）、5,000 11周りの種子の総数を維持し、10〜15に植物の数を減らします。 </li><li>別の除草剤抵抗性生物型が選択されているように雑草のパッチが大面積（ヘクタール以上）に散在している場合は、フィールドをサブサンプル。 </li><li>割り当てられた固有のコードで標識された密閉されていない紙袋で種子を保管してください。 </li><li>水分を蒸発させるが、二次休眠の誘導を回避するために高温に（ すなわち、太陽の下で車の中でそれらを残さない）、または極端な温度変動に種子が公開されていません。 </li><li> （籾殻、デ船体の種子などを削除）し、乾燥室で、周囲温度で保管してくださいきれいな。第1の抵抗のテストを行った後、真空封止されたプラスチック袋であることが好ましく、4℃で暗い部屋で長時間の種を保存します。このようにして、種子はかなり長い時間のために彼らの生存能力を維持します。 </li></ol>注：種子の休眠は、農業生態系に適応し、永続化するために雑草を可能にする、柔軟で効率的なメカニズムを提供します。休眠を打破し、種子の発芽を可能にするために、異なるプロトコルは雑草種、 すなわち、休眠16の種類に応じて使用する必要があります。 休眠を削除するには、3つの主な方法があります。 <ol><li>春化 注：同時発芽と実生発生を取得するには、数日から一週間の範囲の種子春化の期間は、多くの種からの生理的休眠を除去する必要がある：例えば、アオゲイトウ 、 シロザ 、 ライグラス属、カラスムギ、タデタデ属、Phalarisは 17-19を paradoxa。最大15日間の長い期間がSchoenoplectus mucronatusのために30日までヒナゲシ 、 タマガヤツリとAmmaniaのcoccineaのために必要とされています<suP&gt; 20。 <ol><li>プラスチック皿にいくつかの脱イオン水を入れてください。ろ紙の二つの層をカットし、水に浸し、余分なを削除します。紙の上で空気乾燥させた種子を置きます。時間の必要な期間、4℃で冷蔵庫にプラスチック皿を転送します。 </li></ol></li><li>乱切 注：一部の雑草種は、機械的休眠、 すなわち種皮特性に他のものより発芽に対してより難治であり、21を発芽さ硫酸を用いて化学乱切の使用を必要とします。 <ol><li>濃硫酸（95から98パーセント）を入れたビーカーを準備します。一杯の水ビーカーを準備します。不織布の袋に種子を入れてください。 </li><li>濃硫酸に、それぞれ、20分または5分間例えば、ノビエ。またはソルガムhalepense種子を浸します。 </li><li>ピンセットを用いて、ビーカーから封筒を取り出し、水を完全にビーカーに入れます。開きます封筒、小ザルに種子を入れ、流水でそれらを徹底的にすすぎます。 </li></ol>バリアント：A.オオバコ·アクアティカは、異なるプロトコルを必要とする22、23 <ol><li>クロロホルムで2分間の種子を浸します。脱イオン水で種子をすすぎ、吸収紙でそれらを乾燥させます。 5分間、80％硫酸中で種子をダンク。 </li><li>小ザルに種子を入れ、十分に流水でそれらをすすぎます。 </li></ol></li><li>収穫後の種子成熟 注：他の雑草種の種子は関係なく、休眠を打破するために使用される方法の、成熟した後、数ヶ月のために全く発芽しないでください。 <ol><li> RTおよび低湿度で少なくとも3〜4ヶ月の期間のための種子を保存した後、休眠打破（ 例えば、オリザサティバのVAR。sylvaticaまたはP. rhoeas）については、上記のプロトコルに従ってください。 </li></ol></li></ol> 3.種子発芽<ol><li> PLASで発芽する種子を置き、0.6％を含むチック皿0.1％の硝酸カリウムと（M / V）、寒天（KNO 3）を添加しました。 <ol><li>脱イオン水を用いて0.6％+ 0.1％のKNO 3の寒天の溶液を調製します。電子レンジで寒天を溶解します。 </li><li>プラスチック皿に寒天溶液を注ぎます。基板を冷却した後、種子に入れます。 </li></ol>バリアント：土壌をプラスチック皿に基質としても使用することができます。この方法は、 ノビエのために特に効率的です。、S. halepenseとライグラス属 。 </li><li>各雑草種の最適条件に応じて、光と温度条件で約一週間発芽キャビネットにプラスチック製の皿を置きます。ほとんどの冬の種について、温度範囲は15/25℃の夜/日と15〜30マイクロモルのM -2秒-1の光合成光量子束密度（PPFD）を提供するネオン管で12時間の光周期です。多くの夏の種については、温度範囲は15/30℃の夜/日です。 バリアント：S例えばS.などOME種、 halepense、熱処理を必要としています。したがって乱切後、Sの種子45℃で4時間のサイクルと20時間24℃で発芽キャビネットで3日間、その後通常の状態で三日：halepenseは、以下の条件に供されます。 </li></ol> 4.苗の移植と成長<ol><li>移植標準ポッティングミックスを充填したプラスチック製のトレイ（325 X 265 X 95ミリメートル）に十五から二十苗（60％シルト質壌土、15％の砂、15％agriperliteと10％の泥炭 - 体積）。 注：移植は、代わりに直接播種、除草剤処理の性能を最適化するために重要な前提条件である、同じ成長段階における植物の均一なスタンドを得ることができます。 </li><li>数プログレッシブトレイ番号を複製、人口コード、除草剤が試験されている&lt;：固有の識別のためのすべての情報を含むバーコードと、各トレイを識別します。/ LI&gt; <li>フィールド容量またはその付近に基板を維持するために必要に応じて加熱された温室効果、水、植物に入れトレイ。 注：成長温度は雑草種に依存して変化します。多くの場合、テストは秋/冬/春の間に行われているので、光は約150マイクロモルのM -2秒-1および12時間の光周期24、19のPPFDを提供400 Wのメタルハライドランプを使用して補充される。夏の雑草種でC 4光合成サイクルは、通常、より高い光強度を必要とするため、試験は後期の春夏または補充した光強度で行われ、約400マイクロモルのM -2秒-1 14時間の光周期です。 </li><li>水稲に寄生いくつかの雑草種のための異なるプロトコルを使用して、 例えば、A。オオバコ·アクアティカ、S. mucronatusとC. 22で説明したようにdifformis。 <ol><li> 24ラウンドの細胞（55ミリメートルの直径、深64ミリメートル）FILとポリスチレントレイに苗を移植60％シルト質壌土、30％の砂と（体積比）の10％ピートと導きました。 </li><li> 12センチメートルでトレイ深いプラスチック容器を水で満たし、彼らが（ 図1）をフローティング防止するために、ネジ止めのステンレス鋼棒によりダウンbattenedを設定します。 </li><li>土壌表面のレベル以下の1〜2センチメートルで容器内の水位を維持し、藻類の増殖を回避するために、（水の10〜12 Lを含む）の各コンテナに硫酸銅1.5gを追加します。 </li></ol></li></ol> 5.の除草剤処理<ol><li>発芽前除草剤との処置： <ol><li>第3章で説明したように発芽キャビネット内の約3日後に、上述の基板を含むプラスチックトレイに発芽種子を移植し、土壌の層（約1cm）でカバー。これは、苗は、除草剤の効果ではなく、過度の埋没深さに起因して出現しないことを確実にするために重要なステップです。 </li><li>フィールドCAPAに基板を取ります水の入った皿の上に、下部にいくつかの穴を有するトレイを配置することで都市。 </li><li>発芽前除草剤25でトレイを治療、移植後のある日。 </li><li>受け皿から毛細管現象により上方および下方の両方から、必要に応じて水を添加しての基板または近接場の容量にしてください。この手順では、良好な治療効果のために（ すなわち、発芽種子がどこにあるか）適切な深さでの除草剤の耐久性に有利に働きます。 </li></ol></li><li>発芽後の除草剤との処置： <ol><li>彼らは2-3葉期に達したときに植物をスプレー（ すなわち、成長段階拡張BBCH成長スケール26の12〜13）。 </li><li>治療後の日から開始し、 ノビエのために、例えば （雑草種や季節の水の要件に応じて灌漑システムを設定します。それが3分間水を提供して1日4回、定期的な間隔で午前9時から9に午後）。水はDISであります自動スプリンクラー灌漑システムを使用してtributed。 バリアント：グリホサートは、植物ステージBBCH 14-21で適用されます。 </li></ol></li><li>除草剤の準備と配布。 注：（前および発芽後）すべての除草剤は、2つの用量で推奨界面活性剤と市販の製剤として適用される推奨フィールド用量（1×）および3回（3回）こと。 <ol><li>必要に応じて、ラベルの指示に従って、バルク中の界面活性剤溶液を調製。最終濃度は、通常、最終的な体積（ 例えば、0.3％）の百分率として、または体積が単位面積（ 例えば、1ヘクタールL -1）毎に分散されるように表現されます。 </li><li>有効成分の右の濃度を維持するために除草剤（溶質）溶液の溶媒として、界面活性剤溶液を使用してください。最初の最も濃縮除草剤溶液を調製する（3回）。場合、界面活性剤溶液中（または脱イオン水に溶解される商品の数量を計算します界面活性剤は、以下の式を使用して）必要はありません。 線量ハーブ = [（投与量フィールド x線量最大 ）×V フィン ] / V·デル ここで、用量ハーブ =除草剤の量（ml）を、用量フィールド =除草フィールド用量（HAミリリットル-1）、用量maxは =最大用量送達、V フィンは =溶液（L）の最終体積は、V デルはによって送出量を=ベンチ噴霧器（Lヘクタール-1）。 </li><li>希釈（2：1、v / v）の除草剤溶液は、低濃度一方（1×）を調製するために3倍。この手順では、除草剤を計量するか、ピペッティング時にミスを作るチャンスを減少させます。体積が単位面積（Lハ-1）ごとに配信するように除草剤溶液濃度が表現されます。 </li><li>低い除草剤用量（1×）での処理のシーケンスを開始します。このように、同じ除草剤との2つの処置の間に噴霧キャビネットを洗浄する必要はありません。 </li><li>除草剤solutioを配布nは215キロパスカルの圧力で、300 Lヘクタール-1（±1％）を配信精密ベンチ噴霧器を使用して、および0.75メートル秒の速度-1、3フラットファン（拡張範囲）油圧ノズルを装備したブームに。 </li><li>除草剤は、漂白剤を1％を使用して変更されたときに二回噴霧キャビネットを洗浄（v / v）で、次いですすぎます。 バリアント：グリホサート、200 Lヘクタール-1 27の噴霧量で塗布されます。 注：特に注意は非常に生物学的な除草剤は、例えば、スルホニル尿素のスルホメツロンやフラザスルフロンは、使用された場合に支払われなければなりません。後者の場合、アンモニアと、ワン漂白溶液で洗浄し、別の操作を行い（2.5％v / v）を、水で注意深くリンスしました。 </li></ol></li></ol> 6.データの収集および分析<ol><li>自動的に各トレイを識別するバーコードリーダーを介して、治療だけでなく、ビジュアル推定バイオマス（VEB）を生き残った植物の数を記録します。植物はお尻です彼らは関係なく、色やその他の外観のアクティブな成長を示していない場合は死んでいるようessed。 <ol><li>試験された除草剤に応じて3週間または4週間の治療（WAT）の後に評価をする（ 例えば、ACCアーゼ阻害剤のための3つのWATおよびALS阻害剤またはグリホサートのための4つのWAT）。 </li><li> すなわち感受性集団（Sを確認してください）すべての実験では、決してまたはめったに除草剤で処理されなかったサイトで収集した人口を含めることにより、一般的な治療の有効性を評価します。 </li><li>処理された植物の数の割合としてExpressの植物の生存は、（2つの複製の平均値）だけ除草剤処理の前にカウントし、平均値あたりの標準誤差（SE）を計算します。 </li><li> VEBは、同じ人口25の処理され、処理されていないチェック、28との間の植物バイオマスを視覚的に比較して得られる。スコアを、除草剤の影響を受けていない植物のための10の範囲（処理されていない検査と比較して）0にいつ植物が明らかに死んでいる、各処理されたトレイに与えられます。 </li></ol></li><li> S生存者よりも多くの除草剤用量1X、Rで5％〜20％の範囲であったときに、植物の5％未満が、除草剤用量1X、SRを生き延びた二つ除草剤用量で処理から得られた結果に基づいて、4つのカテゴリへの帰属集団生存者は除草剤の用量1倍で20％以上と除草剤の投与量の3倍17で10％以上である場合には、植物の20％が除草剤の用量1XとRRを生き延びました。 </li></ol>

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<li>Zelaya, I. A., Anderson, J. A. H., Owen, M. D. K., Landes, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+spectrophotometric+and+HPLC+methods+for+shikimic+acid+determination+in+plants%3A+Models+in+glyphosate-resistant+and-susceptible+crops%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Agric.+Food+Chem%22%5BJournal%5D)">Evaluation of spectrophotometric and HPLC methods for shikimic acid determination in plants: Models in glyphosate-resistant and-susceptible crops.</a> J. Agric. Food Chem. 59 (6), 2202-2212 (2011).</li>
</ol>

著者らは、競合する金銭的利益はないと宣言している。

1）種子が成熟した除草剤処理（複数可）を生き残った植物から収集する必要がありますプロトコル内のいくつかのステップは、集団における除草剤耐性の成功を評価するために重要です。マザー工場の種子の成熟は、後に種子の発芽における困難を回避することが重要です。 2）種子の適切な保管が発芽を妨げるカビの増殖を回避することをお勧めします。除草剤パッケージのラベルに報告したように3）苗は、右の成長段階で扱われるべきです。処理されるべき植物がほぼ同じ成長段階に達したように、注意が必要です。植物は、活性成分の正確な濃度は、したがって、検証できないミスを回避して噴霧されるように、4）除草剤溶液を調製し、正確に処理されるべきです。 5）各除草剤処理した後、それを完全に回避するために、溶液を調製するために使用される噴霧キャビネットとガラス製品を清掃することをお勧めします高度に生物学的に活性な除草剤が関与している、特に以下の除草剤処理で汚染。 本明細書に提示されるプロトコルは、容易に種と関心の除草剤に応じて必要な修正を加えた雑草種の広い範囲に適合させることができます。具体的には、種子の休眠と発芽のために破壊す...

<html>除草剤はグローバル植物保護市場1の最大50％を占め、雑草防除対策を最も広く使用されています。彼らは労働集約的で時間のかかる土壌栽培慣行を回避するには、比較的安価なツールであり、最終的に費用対効果の高い、安全かつ収益性の高い食糧生産2をもたらします。しかし、一緒に除草剤の使用上の過度の依存を持つ多くの雑草種に大きな生物季節と遺伝的変異の存在は、しばしば除草剤抵抗性雑草集団の選択をもたらします。非常に特定の代謝ターゲット3-5と選択性除草剤の導入が飛躍的に年間で抵抗症例数が増加しています。現在までに、世界中の240雑草種（140双子葉植物と単子葉植物は100）アクション（SOA）4の異なる除草剤サイトに対する抵抗性を進化させてきました。これは、持続可能な作物生産のための雑草管理と一般的に多くのための主要な関心事です。 頻繁に温室で行う信頼性試験、に基づいてe_content &quot;&gt;抵抗の早期検出は、除草剤抵抗性雑草を管理するための重要なステップである。別のアプローチがよう、目的、精度、時間と利用可能なリソースの要求レベルに応じて開発されていますよく6-12を考え雑草種とし ​​て。しかし、新しい雑草バイオタイプの抵抗状態の確認が（必要とされる場合、すなわち、に属する1つまたは複数の除草剤に耐える能力を含むいくつかの生理学的特性を共有する個人のグループ、通常、それらを制御することになる用量で使用される特定の基）、強固な全植物バイオアッセイは、制御された環境4、11で実行される必要があります。 バイオタイプはただ1つの除草剤に耐性めったにあります。各生物型は、従って、一定の抵抗パターンを特徴とする、除草剤、SOAの、すなわち、数と種類は、それは、与えられた抵抗によってに耐性であります各除草剤13のレベル。クロスまたは複数の抵抗5のパターンの早期かつ信頼性の高い決意、14は、圃場抵抗性管理のために重要です。 それは、その除草剤抵抗性は自然寛容とは何の関係もない言及する価値があるいくつかの除草剤、 例えば、ACCアーゼ阻害除草剤、単子葉植物種対2,4-D対双子葉植物種、 スギナarvense対に向けていくつかの雑草種の展示グリホサート。 本稿では、除草剤（複数可）によって制御不良が報告されていた分野でサンプリング推定される除草剤抵抗性生物型をテストするための堅牢なアプローチを提示します。関連する雑草種に関連する標準的なプロトコルに関連する変異体が提示されています。唯一の除草剤の投与量15を使用して全植物バイオアッセイのいずれかに基づいて、代替技術/プロトコル経由での利点、または8が高いreliabに関連しているペトリ皿に種子を処理しますilityとための実験における2つの除草剤の投与量を含めることの抵抗レベルを推定する可能性。しかし、ルーチン抵抗試験のため、同一の方法がそのようにコストを削減し、唯一の除草剤用量で適用することができます。 同様に、抵抗状態の確認を可能にするように、得られた情報は、両方の研究は、以下の工程を最適化し、および/または音響抵抗管理戦略を考案するために使用することができます。

<table><tbody><tr><td>紙袋</td><td>Celcar SAS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>プラスチック皿</td><td>ISI plast S.p.A.</td><td>SO600</td><td>透明プラスチック</td></tr><tr><td>硫酸 95-98%</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>320501</td><td></td></tr><tr><td>不織布</td><td>Carretta Tessitura</td><td>Art.TNT17</td><td>重量 17 g m-2</sup</td></tr><tr><td>>クロロホルム >99.5%)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>C2432</td><td></td></tr><tr><td>寒天</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A1296</td><td></td></tr><tr><td>硝酸カリウム >99.0%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8394</td><td></td></tr><tr><td>プラスチック容器</td><td>Giganplast</td><td>1875/M</td><td>600 x 400 x 110 mm</td></tr><tr><td>プラスチックトレイ</td><td>Piber plast</td><td>G1210A</td><td>325 x 265 x 95 mm</td></tr><tr><td>ポリスチレントレイ</td><td>Plastisavio</td><td>S24</td><td>537 x 328 x 72 mm、24 ラウンドセル (6x4)</td></tr><tr><td>硫酸銅</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>451657</td><td></td></tr><tr><td>Agriperlite</td><td>Blu Agroingross sas</td><td></td><td></td>AGRI100</tr><tr><td>Peat</td><td>Blu Agroingross sas</td><td>TORBA250</td><td></td></tr><tr><td>発芽キャビネット</td><td>KW</td><td>W87R</td><td></td></tr><tr><td>ノズル</td><td>Teejet</td><td>XR11002-VK, TP11001-VH</td><td>2番目のタイプのノズルはグリホサートにのみ使用されます</td></tr><tr><td>バーコードジェネレーター</td><td>東芝TEC</td><td>SX4</td><td></td></tr><tr><td>バーコード付きラベル</td><td>フェルガ</td><td>TT20200</td><td>スティックイン角が丸いラベル</td></tr><tr><td>バーコードリーダー</td><td>Cipherlab</td><td>8300-L</td><td>ポータブルデータ端末</td></tr><tr><td>ベンチ噴霧器</td><td></td><td></td><td>家</td></tr><tr>で建て<td colspan="4">結果に含まれる除草剤:</td></tr><tr><td>市販品</td><td>有効成分</td><td>Company</td><td>コメント</td></tr><tr><td>Altorex</td><td>imazamox</td><td>BASF</td><td></td></tr><tr><td>Azimut</td><td>florasulam</td><td>Dow AgroSciences</td><td></td></tr><tr><td>Biopower</td><td></td><td>Bayer Crop Science</td><td>Surfact to be used with Hussar WG</td></tr><tr><td>Dash</td><td></td><td>BASF</td><td>Surfact to be used with Altorex</td></tr><tr><td>Granstar</td><td>tribenuron-methyl</td><td>Dupont</td><td></td></tr><tr><td>ガリバー</td><td>azimsulfuron</td><td>デュポン</td><td></td></tr><tr><td>Hussar WG</td><td>ヨードスルフロン</td><td>バイエル クロップサイエンス</td><td></td></tr><tr><td>ノミニー</td><td>bispyribac-NA</td><td>バイエル クロップサイエンス</td><td></td></tr><tr><td>ラウンドアップ</td><td>グリホサート</td><td>モンサント</td><td></td></tr><tr><td>トレンド</td><td></td><td>デュポン</td><td>サーファクト グランスターとガリバー</td></tr><tr><td>バイパー</td><td>penoxsulam</td><td>ダウ アグロサイエンシズ</td><td></td></tr><tr><td>ウィードン LV4</td><td>2,4-D</td><td>イサグロ</td><td></td></tr></tbody></table>

別の雑草種の堅牢な除草剤抵抗性試験のためのプロトコル

Protocols for Robust Herbicide Resistance Testing in Different Weed Species

全植物レベルで推定される除草剤耐性雑草の個体数をテストするための堅牢なプロトコルは、耐性の状態を確認するために不可欠です。提示されたプロトコルは、温室で実施される全植物バイオアッセイに基づいており、適切な変異体を通じて広範囲の雑草種および除草剤に容易に適応させることができます。野外除草剤処理を生き残った植物からの種子サンプルは、使用されるまで低温で乾燥して収集および保管されます。発芽方法は、雑草の種類や種子の休眠タイプによって異なります。同様の成長段階にある苗木は、植物が除草剤処理に適した成長段階に達するまで、適切な条件下で温室に移植および維持されます。検証不可能なミスを避けるために、除草剤溶液を調製するには精度が必要です。また、散布量や散布速度など、その他の重要なステップも評価されます。このプロトコルの利点は、1つの除草剤用量を使用した全植物バイオアッセイに基づく他のプロトコルと比較して、より高い信頼性と耐性レベルを推測する可能性に関連しています。より迅速で安価なin vivoまたはin vitro診断スクリーニング検査(ペトリ皿バイオアッセイ、分光光度試験)が提案されていますが、それらは定性的な情報しか提供せず、その広範な使用は、一部の種が必要とする可能性のある面倒なセットアップによって妨げられています。日常的な耐性試験では、提案された全植物バイオアッセイは除草剤の1回分で適用できるため、コストを削減できます。

推定上の耐性集団の抵抗状態を評価するためには、除草剤の有効性を確認するためにアッセイにおける感受性の検査を含むことが基本です。 P.で行ったスクリーニング試験の結果rhoeas集団は、小麦畑に寄生雑草は、感受性の検査（09から36）のと疑わ耐性1（10-91）上の4つの発芽後除草剤の有効性が示されている図2に報告されています。人口09から36は、完全に唯一の植物は、フロラスラム及びトリベヌロン-メチル（ 図2）は、試験した他の二つのALS除草剤の投与量1×生存したヨードスルフロン阻害剤ALSによって制御しました。その代わりに、人口10から91の植物の約60％がヨードスルフロンおよびトリベヌロン - メチルの両方の除草剤の投与量を生き残り、約50％がフロラスラムの1倍用量を生き延びました。これらの結果は、人口10から91は、ヨードスルフロンおよびトリベヌロン - メチルおよび耐性に（RR）は非常に耐性があることを確認します（R）は、フロラスラムします。別の応答は、2,4-D、広くコムギ双子葉雑草を制御するために使用される別のSOA（ <...

雑草集団における除草剤耐性を確認するための堅牢で柔軟なアプローチが提示されます。このプロトコルにより、除草剤耐性レベルを推測し、わずかな適応で幅広い雑草種や除草剤に適用することができます。

Robust protocols to test putative herbicide resistant weed populations at whole plant level are essential to confirm the resistance status. The presented ...

本手順の目的は、広範囲の雑草種および除草剤における除草剤耐性を試験・確認し、その耐性レベルを推定することである。これはまず、除草剤処理を生き抜いた植物から採取した種子の休眠を打破し、一斉に発芽および苗の出芽を促すことで達成される。数日から1週間以上の種子春化期間が必要となる。第2ステップでは、硝酸カリウムを含むアガー培地をプラスチック製シャーレに注ぎます。その後、Vernの種子を凝固したアガー上に配置し、各雑草種の最適条件に設定した発芽キャビネットにシャーレを移します。次に、15〜20本の苗を、標準的な培養土を満たしたプラスチック製トレーに移植します。各トレイに一意の識別情報をすべて含むバーコードを割り当て、苗が2〜3葉期に達するまで加温温室に置きます。最終ステップは、精密ベンチスプレーヤーを用いた除草剤処理です。すべての除草剤は、推奨される界面活性剤を含む市販製剤として、推奨圃場用量の2倍および3倍の2つの用量で散布します。処理の3〜4週間後に最終評価を行います。バーコードリーダーを用いて、実験単位あたりの生存株数と視覚的に推定したバイオマスを記録します。その後、データをコンピュータにダウンロードし、除草剤耐性の状態を判定するために解析します。in vivoまたはin vitroの診断スクリーニング試験に対する本法の主な利点は、その堅牢性と柔軟性にあります。言い換えれば、本法は信頼性が高く、わずかな調整で幅広い種に容易に適応させることが可能です。この手法は、除草剤耐性雑草群の研究および管理における、耐性のパターンやレベルなどの重要な疑問を解消するのに役立ちます。また、用量反応試験などのさらなる実験ステップを適切に計画することを可能にします。一般的に、除草剤耐性試験に不慣れな研究者は、考慮し、かつ特定の実験条件に適応させるべき多くの手順や側面があるため、困難に直面することがあります。まず、1種ずつ種子のサンプルを採取し、固有のコードを割り当てます。籾殻を取り除き、脱粒させることで種子を洗浄します。割り当てた固有のコードを記載したフォームに、サンプルごとの情報を記入してください。種の名称、採集日、GPS座標、市区町村、農家名、圃場面積、被害レベル、作物、シーズン中に使用した除草剤、および圃場の履歴記録を記載してください。種子は、割り当てられた固有コードを記載した密封されていない紙袋に入れて保管します。水分を蒸発させますが、種子を高温や極端な温度変化にさらさないようにしてください。二次休眠の誘導を避けるため、洗浄した種子を暗室の4 °Cで保存し、春化させます。プラスチック製ディッシュに脱イオン水を入れます。フィルターペーパーを2枚のディスク状と1枚のストリップ状に切り分けます。このストリップは、毛細管現象によって水と2枚のディスクの間にブリッジを形成させます。フ

protocols-for-robust-herbicide-resistance-testing-different-weed

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環境

この原稿は、殺虫剤感受性を調査し、節足動物害虫に連絡することを抵抗し、全身の農薬を検出するために使用される手法を示し、説明します。...

モニタリングの殺虫剤抵抗性のためのバイオアッセイ

このビデオでは、草食性に宿主植物の抵抗性のメカニズムを説明し、のアワフキムシ抵抗に抗生作用と耐性の相対的な寄与を推定するのない選択式テストを示しています...

特徴付ける草食動物の耐性機構：上Spittlebugs Brachiaria属。例として

我々は、葉緑体trnL-Fスペーサー領域内の標的DNA配列の違いがの品種を区別することが、様々な特異的PCRプライマーを採用して費用対効果の迅速な分子タイピングプロトコルを提供...

の野生型と観賞用品種を区別するPCRベースのジェノタイピング法チガヤ</em

前または臨床的発症次 -   - 標的治療に対する薬剤耐性は広範囲に及び抵抗のメカニズムを同定することが必要である代替臨床管理戦略を導くために重要です。ここでは、これらのメカニズムの発見を促進するためにシークエンシングを用いたin vitro での薬剤耐性株のカップルの導出にプロトコルを提示します。...

の実装<em&gt;インビトロ</em&gt;薬剤耐性アッセイ：臨床的に関連性のメカニズムを暴くための可能性を最大化

この原稿は、除草剤の代謝率が双子葉植物の雑草から切り出された葉で効果的に定量化され、それによって変動性を減らし、全植物アッセイで一般的に観察される除草剤の取り込みまたは転座の可能性のある交絡効果を取り除く方法を説明しています。...

摘出葉のアッセイで双子葉雑草除草剤代謝の速度を測定します

芝草システムでのTransferableの残留農薬の実験は、ヒトリスク・エクスポージャーの評価の不可欠なコンポーネントです。譲渡残基を測定するための実験的アプローチは、対象と芝草システムダイナミクスの人間の相互作用に調整する必要があります。三譲渡残留農薬プロトコルが提示され、3芝草システム間で適合性が議論されています。...

芝草システムズに譲渡残留農薬を定量化するためのプロトコル

ここでは、レニフォーム線虫耐性に対する綿のゲノムタイプの迅速な非破壊スクリーニングのためのプロトコルが提示される。このプロトコルは、線虫に感染した綿の苗の根を視覚的に調べて感染反応を決定することを含む。各植物からの栄養芽は、種子生産のための植物を回復するために伝播されます。...

レニフォーム線虫抵抗に対する綿のジェノタイプのスクリーニング

Allelopathyは、トリミングシステムにおける有用な補足雑草制御戦略として約束を示しています。所望の植物標本の全能的電位を決定するために、階段ステップスクリーニング法が提供される。...

ウィーディライスのアロパシーポテンシャルにアクセスするための繰り返し可能な階段ステップアッセイ(オリザサティバssp.

ここでは、苗木における Phytophthora nicotianae...

フィトフトラ・ニコチアナエ耐性に対するタバコ遺伝子型のスクリーニング

グリホサートベースの製品(GBP)は、世界中で最も一般的な広域スペクトル除草剤です。本稿では、GBPがマイクロバイオームに与える影響を定量化するための一般的なガイドラインを、フィールド実験からバイオインフォマティクス解析まで紹介します。...

グリホサートベースの製品がマイクロバイオームに及ぼす潜在的な影響の定量化

ここでは、用量増加アプローチを用いた化学抵抗性細胞の生成プロトコルを提示し、その後、エピジェネティック修飾因子を標的としたCRISPR/Cas9ベースのスクリーニングを実施し、獲得化学抵抗性の調節因子を特定するために焦点を絞ったsgRNAライブラリーを用います。また、化学抵抗性細胞モデルに合わせた複数の最適化ポイントも提供し、耐性機構を調査する研究者にとって堅牢な枠組みを提供します。...

化学抵抗性細胞に対するエピゲノム全域のCRISPR-Cas9ベースのノックアウトスクリーニング

学ぶ堅牢な除草剤抵抗性試験プロトコル。種子休眠打破、硝酸カリウムを用いた発芽促進、移植法により、多様な雑草種の抵抗性レベルを正確に評価する柔軟な手法を習得できます。

別の雑草種の堅牢な除草剤抵抗性試験のためのプロトコル

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