Simple Bulk Readout of Digital Nucleic Acid Quantification Assays

Leanna S. Morinishi; Paul Blainey

doi:10.3791/52925

JoVE Journal
Biology

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JoVE Journal Biology

Simple Bulk Readout of Digital Nucleic Acid Quantification Assays

デジタル核酸定量アッセイの簡単な一括読み出し

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06:55 min

September 24, 2015

DOI: 10.3791/52925-v

Leanna S. Morinishi¹, Paul Blainey²

¹Broad Institute, ²Department of Biological Engineering,Massachusetts Institute of Technology

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

私たちは、単純化された(アナログ)読み出しで核酸を定量するためのエンドポイントデジタルアッセイについて説明します。液滴ベースのデジタルアッセイのバルク蛍光は、特殊な装置ではなく標準的なqPCR装置を使用して測定し、顕微鏡で結果を確認します。

この手順の全体的な目標は、従来のリアルタイムPCR装置を使用してデジタル液滴アッセイの読み出しを簡素化し、アッセイのバルク蛍光を測定することです。これは、まず、目的のサンプル、2つの標準試料の増幅反応を調製し、それぞれを数千ナノリットルサイズの反応器に分配するための液滴を形成することによって達成されます。2番目のステップは、液滴をインキュベートして、各液滴内の核酸を増幅することです。

次に、各サンプルまたは標準のバルク蛍光を標準のQPCまたはサーモサイクラーで測定します。最後のステップは、標準サンプルから生成された標準曲線を使用して、対象サンプル中の蛍光液滴の割合を予測することです。この分析法の性能を検証するために、蛍光顕微鏡法を使用して、バルク蛍光アッセイの定量性能を独立して評価することができます。

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