Name: T細胞は、樹状細胞からTransinfectionによって細菌をキャプチャ (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 39 s
Description: 学ぶ細菌のCD4+T細胞トランスインフェクション定量法。マウス細胞モデルを用いて、樹状細胞からの細菌キャプチャと殺菌効率を評価する免疫学的プロトコルです。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

この作業は、スペイン科学イノベーション省からの助成金BFU2011-29450、BFU2008-04342/BMC、およびConsejo Superior de Investigaciones Cientìficas（CSIC）からのPIES201020I046によって支援されました。

注意：実験手順は、大学自治・デ・マドリッドの研究倫理委員会によって承認され、スペイン語、欧州のガイドラインに従って動物福祉と健康の大学自治・デ・マドリードヘッドの監督の下で行われました。マウスは、特定病原体不在（SPF）は、ハウジングで飼育され、それらは、二酸化炭素（CO 2）吸入法を用いて、訓練を受けた有資格者により安楽死させました。 1.マウスの骨髄由来DC分化および感染注： 図1は、この最初のステップをまとめたものです。すべての手順は、メディア、楽器、ピペットチップ及び培養皿だけ滅菌を使用して、この時点からフード内で行われるべきです。 <ol><li>マウス骨髄由来DCの分化<ol><li> 1 C57 / BL6 マウス 22から脛骨と大腿骨を解剖し、RPMI培地10mlでプラスチックの皿に移します。 </lI&gt; <li>滅菌はさみで、各骨端をカットし、特徴的な赤の鮮やかな色をしている骨髄を、公開しています。 </li><li>滅菌ペトリに無菌注射器を用いて0.5％ウシ血清アルブミン（BSA）および5mMエチレンジアミン四酢酸（EDTA）（PBS / BSA / EDTA緩衝液）を含有するリン酸緩衝生理食塩水（PBS）10mlで骨の内部に吹き込みます皿。 </li><li>冷却遠心機（4℃）で600×gでチューブ中の細胞懸濁液と遠心分離機を収集します。 </li><li>塩化アンモニウム-カリウム（ACK）溶解緩衝液（0.15 M NH 4 Clを 、10mMのKHCO 3および0.1mM EDTA）を1mlで細胞を再懸濁し、赤血球を除去するために室温で30秒間インキュベートします。 </li><li>塊は、濾過により除去されたので、同じ速度（600×gで）で遠心分離する前に、骨片および細胞塊を除去するために、セルストレーナー（70ミクロン）を介して、10％ウシ胎児血清（FBS）を含むRPMI 1640培地10mlを加え、濾過します。 </li><li>細胞をカウントし、AND RPMI 10％FBS（50μMのβ-メルカプトエタノールを含有し、1mMピルビン酸ナトリウム）、5×10 5細胞/ mlに調整し、20 ngの/ mlの組換えマウス顆粒球-マクロファージコロニー刺激因子（RM-GM-CSF）を追加最終濃度として。 </li><li> CO 2インキュベーター中で、滅菌、微生物学的品質、15 cmでペトリ皿、培養にこの懸濁液を加える（37℃、5％CO 2）。 </li><li> 3日ごとに、20 ng / mlでRM-GM-CSFを含有する新鮮な培地で、細胞密度を5×10 5細胞/ mlで、非接着細胞およびPBS中の5mM EDTAで剥離した細胞を再懸濁両方をスピンダウン。 </li></ol></li><li> DCおよび抗原負荷の成熟<ol><li> 9日目に、20 ngの/ mlのRM-GM-CSFを含有する培地中濃度の5×10 5細胞/ mlで細胞を再懸濁。その後、細胞に高MHC-IIの発現を可能にし、24時間非組織培養処理滅菌15センチメートルペトリ皿にインキュベートすることを20ng /リポポリサッカライド（LPS）のミリリットルを追加します。 </li><li> 1の後LPS刺激の日は、フローサイトメトリーによってDCの分化を確認するために、マウスのCD11c、MHCIIおよびGR-1に対する抗体で、いくつかのDC細胞を染色します。 DCのフローサイトメトリー分析の例を図3A及び 3Bに示されています。 <ol><li>サンプルあたり50μlのPBS / BSA / EDTA緩衝液中の最終濃度2.5μgの/ mlの抗マウスCD16 / CD32モノクローナル抗体を用いたDC（5×10 5細胞 /サンプル）をインキュベートします。それぞれPBS / BSA / EDTA緩衝液で500：100：1：200および1その後、1で異なる蛍光色素とコンジュゲートMHCII（IA / IE）、のCD11cおよびGR-1に対する抗体の50μlを添加します。 </li><li>最後に、PBS / BSA / EDTAバッファーでDCを洗浄し、製造業者のプロトコールに従って、フローサイトメトリーによって分析します。 注：細胞が十分に分化している場合は、細胞が抗原負荷の準備ができています。 </li></ol></li><li>ウォッシュ（抗生物質を含まない）RPMI、10％FBSを含む樹状細胞および10μg/ mlのOTII OVAp（OVA 323-339でそれらをインキュベート; ISQA37ºCで最小1時間、5×10 6のDCあたりRMPI 10％FBS培地1ml中のプラスチックチューブにVHAAHAEINEAGR）。陰性対照として、OVApとインキュベートすることなく、DCを残します。 </li></ol></li><li> DCの感染<ol><li> CO 2インキュベーター（37℃、5％CO 2）で1時間10細菌（DCあたり10細菌）の感染多重度（MOI）での樹状細胞に感染します。 </li><li>ウォッシュDC細胞は、細胞外細菌の大部分を洗浄するためにRMPI、10％FBSおよび450×gで遠心分離にPBSおよび1倍で3倍。最後に、20×10 6細胞/ mlで（抗生物質を含まない）RMPI 10％FBS培地中で細胞を再懸濁し。 </li></ol></li></ol> OTIIトランスジェニックマウスからのCD4 + Tリンパ球の2の単離注： 図1は、この第二段階をまとめたものです。リンパ節は、リンパ節におけるCD4 +リンパ球の割合ので、CD4 + T細胞を単離する代わりに脾臓を使用すべきですS（〜50％）、脾臓（〜25％）よりも大きいので、精製はより有効であろう。 <ol><li>リンパ節の単一細胞懸濁液を作製<ol><li> OTIIトランスジェニックマウスから23ノード鼠径部、腋窩、上腕、子宮頸部および腸間膜リンパを削除し、RPMI、10％FBS培地10mlでプラスチックの皿に移します。 </li><li> 2つや消し顕微鏡スライドを使用して無菌フード下のリンパ節を挽きます。 1顕微鏡スライドのつや消し側のリンパ節を置き、臓器がグラウンドされるまで、第2のスライドのつや消し側でこすります。 </li><li> PBS / BSA / EDTA緩衝液中の単一細胞懸濁液を洗​​ってください。 </li><li>セルストレーナー（70μm）は、結合組織を除去し、PBS / BSA / EDTA緩衝液で洗浄するためにかかわらず、細胞をフィルタリングします。 </li><li> ACK溶解緩衝液1ml中に細胞を再懸濁し、赤血球を除去するために室温で1分間インキュベートします。 </li></ol></li><li> CD4 + T細胞の単離<ol><li>ステップ2.1.3カウントのように再び洗浄し細胞を、PBS / BSA / EDTA緩衝液中の100×10 6細胞/ mlで再懸濁します。 CD4 + T細胞の後の負の選択のために氷上で30分間、250：CD8、IgM抗体、B220、CD19、MHCクラスII（I-AB）、のCD11b、CD11cの1でDX5に対するビオチン化抗体を追加します。 </li><li> PBS / BSA / EDTA緩衝液中で細胞を洗浄し、氷上で15分間、製造業者のプロトコールで推奨濃度でストレプトアビジンマイクロビーズを用いた細胞（100×10 6細胞/ ml）をインキュベートします。 </li><li> PBS / BSA / EDTA緩衝液中で細胞を洗浄し、CD4 + T細胞の単離の前に細胞ストレーナー（30ミクロン）かかわらず、それらをフィルタリングします。 </li><li>製造業者のプロトコルに従って、磁気細胞分離機を用いて陰性選択によってCD4 + T細胞を単離します。 </li><li>細胞をカウントし、（抗生物質を含まない）RPMI、10％FBS培地に4×10 6細胞/ mlに調整します。 </li><li>流れにより純度を確認して修正し、氷単離したCD4 + T細胞 （3×10 5細胞 ）を続けますサイトメーター24を説明します。 CD4 + T細胞の精製の ​​一例は、図3Cに示されています。 </li></ol></li></ol>ゲンタマイシン保護アッセイ3. T細胞Transinfection測定注： 図2は、プロトコルのこの第三の工程をまとめたものです。 <ol><li> T細胞Transinfection <ol><li> CO 2インキュベーター（37℃、5％における免疫シナプス形成を可能にするために30分間（DCを1時間感染させ、自由な細菌を除去するために洗浄した）感染したDC細胞（1）を有する単離されたCD4 + T細胞をインキュベートCO 2）。 </li><li>追加単離されたCD4 + T細胞（2×10 6細胞）を、24ウェル培養プレートに感染したDC（2×10 6細胞 ）を0.1mlの0.5 mlです。陰性対照として、30分間、10細菌のMOIで直接0.5 mlのCD4 + T細胞に感染します。 </li><li>使用したT細胞から感染したDCを分離する追加のコントロールを含めますDC-Tの物理的接触を妨げる（孔径3ミクロンを有する）ポリカーボネートトランスウェル障壁。ウェル（24ウェルプレート）の下の区画に0.1トランスウェル内部のDC mlのCD4 + T細胞の0.5ミリリットルを追加します。 </li><li>最後に、RMPI培地で完全に全てのサンプルにおいて同等のボリュームを作成する各ウェルの0.6ミリリットルがあるまで。 </li><li>免疫シナプス形成の30分後、ゲンタマイシン100μg/ mlを添加し、CO 2インキュベーター中で細胞を収集する前に1時間インキュベート（37℃、5％CO 2）。 </li></ol></li><li>再分離CD4 + T細胞の<ol><li>非接着細胞を収集し、PBS / BSA / EDTA緩衝液で再懸濁します。 DCの大部分は、プラスチック培養皿に付着したままです。ボルテックスチューブを静かに細胞分解を確実にします。ゲンタマイシンがうまく働いていることを示すためのコントロールとして細胞上清500μlのを保管してください。 </li><li>ステップ2.2と一緒にDCおよびT細胞を含む試料からCD4 + T細胞を再単離します、が、DCのほとんどがプレートに付着している必要があります。氷の上にコントロールサンプルを保管してください。アカウントに2％未満の汚染との唯一の実験を行ってください。 transinfection後のCD4 + T細胞の精製の ​​一例が図3Dに示されています。 </li></ol></li><li>溶解性T細胞および細菌中寒天プレート上でそれらをシード。 <ol><li> PBSで2回洗浄CD4 + T細胞。 </li><li>細胞をカウントし、PBS中で2×10 6細胞/ mlで再懸濁。 </li><li> T細胞からの細胞内細菌を放出する、1×10 6細胞/ mlで、それらを溶解するT細胞を500μlの0.1％トリトンX-100の500μLを加えます。 </li><li>溶解した細胞の3連続小数の希釈を行い、細菌培地寒天プレート上で各希釈液50μlをシード。 4の部分に板を分割し、各部分に溶解した細胞の異なる希釈をシード。代表的な結果を図4に示します 。 <ol><li>対照として、またプレートゲンタマイシンがうまく働いていることを確認するために、寒天のコンジュゲートの細胞上清を保管していました。また、追加の対照として、感染したDCをプレート。ケースでは、低DCの汚染は（&lt;2％）、低直流汚染に対応するコロニー形成単位（CFUの）を引く起こります。 </li></ol></li></ol></li></ol>フローサイトメトリーによるT細胞Transinfection 4.定量注： 図2は、この手順をまとめたものです。 <ol><li> T細胞Transinfection <ol><li>ステップ1.3のようにのBMDCに感染するが、この場合には、GFP発現する細菌を使用しています。 </li><li>製造業者のプロトコルに従って、37℃で30分間、細胞トラッカークロロメチルアミノクマリン（CMAC）と（ステップ2.2でリンパ節から単離された）ステインCD4 + T細胞ºC。 </li><li>二回（抗生物質を含まない）RMPI 10％のFBSで標識されたCD4 + T細胞を洗浄します。 </li><li>感染した樹状細胞をインキュベートし、標識CD4 +と（細菌と1時間のインキュベーション後）30分間のT細胞は、ステップ3.1.1で説明するすべてのコントロールを含む37ºCで免疫シナプスの形成を可能にします。 </li></ol></li><li>感染CD4 + T細胞の染色<ol><li> DC-T免疫シナプス形成の30分後、細胞を回収し、PBS / BSA / EDTAでそれらを洗浄。 </li><li> PBS / BSA / EDTA緩衝液、静かにチューブをボルテックスすることにより独立した凝集細胞で2回洗浄した後。 </li><li>室温で15分間、3％PFAを含むPBSを0.2ml /チューブでサンプルを修正しました。その後、PBSでそれらを洗ってください。 </li><li>樹状細胞のFc受容体をブロックするために、氷上で15分間、PBS / BSA / EDTAを50μl/サンプル中の抗マウスCD16 / CD32モノクローナル抗体（2.5μgの/ ml）でインキュベートします。 </li><li>細胞外細菌を染色し、氷上で30分間50μL/ PBS / BSA / EDTAのサンプル中の抗細菌抗体（最終濃度として10 / mlの）ウサギを追加します。 </li><li> PBS / BSAは/ EDTAで細胞を洗浄し、フィコエリトリン（PE）とコンジュゲートしたマウスのCD11cに対する抗体およびSEでインキュベート氷上で30分間、PBS / BSA / EDTAを100μl/サンプル中の200：1でアレクサフルーア647のような他の蛍光色素と結合したウサギに対するcondary抗体。 </li><li>細胞を洗浄し、フローサイトメトリーによってサンプルを分析。ただ一つのサンプルを補償し、設定25フローサイトメトリーを調整するために実験で使用した各蛍光色素で標識の非蛍光細菌などネガティブコントロールとサンプルを使用してtransinfected T細胞のサンプルを含めることを忘れないでください。代表的な分析は、 図5に示されています。 注：細菌は、GFPを発現しない細胞内および細胞外細菌を区別するために、細胞外細菌をラベル、修正し、5分間PBS中の0.5％トリトンX-100を含む試料を透過した場合。その後、異なる蛍光色素で総細菌（細胞内+外）を染色します。 </li></ol></li></ol>

<ol><li>Medzhitov, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recognition+of+microorganisms+and+activation+of+the+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Recognition of microorganisms and activation of the immune response.</a> Nature. 449 (7164), 819-826 (2007).</li>
<li>Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., Walter, P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAlberts%2C+B+%22Molecular+biology+of+the+cell%22">Molecular biology of the cell</a>. , Garland Science. New York. (1989).</li>
<li>Pancer, Z., Cooper, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+evolution+of+adaptive+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">The evolution of adaptive immunity.</a> Annual Review of Immunology. 24, 497-518 (2006).</li>
<li>Rhoades, R. A., Bell, D. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRhoades%2C+RA+%22Medical+Phisiology%22">Medical Phisiology</a>. , Lippincott Williams & Wilkins. (2012).</li>
<li>Cossart, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+Invasion%3A+The+Paradigms+of+Enteroinvasive+Pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Bacterial Invasion: The Paradigms of Enteroinvasive Pathogens.</a> Science. 304 (5668), 242-248 (2004).</li>
<li>Kaufmann, S. H., Schaible, U. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen+presentation+and+recognition+in+bacterial+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Antigen presentation and recognition in bacterial infections.</a> Current Opinion in Immunology. 17 (1), 79-87 (2005).</li>
<li>Pizarro-Cerdá, J., Cossart, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+Adhesion+and+Entry+into+Host+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Bacterial Adhesion and Entry into Host Cells.</a> Cell. 124 (4), 715-727 (2006).</li>
<li>Dustin, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-cell+activation+through+immunological+synapses+and+kinapses%5BTitle%5D)+AND+%22Immunological+Reviews%22%5BJournal%5D)">T-cell activation through immunological synapses and kinapses.</a> Immunological Reviews. 221, 77-89 (2008).</li>
<li>Calabia-Linares, C., Robles-Valero, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endosomal+clathrin+drives+actin+accumulation+at+the+immunological+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">Endosomal clathrin drives actin accumulation at the immunological synapse.</a> Journal of Cell Science. 124 (5), 820-830 (2011).</li>
<li>Westcott, M. M., Henry, C. J., Cook, A. S., Grant, K. W., Hiltbold, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+susceptibility+of+bone+marrow-derived+dendritic+cells+and+macrophages+to+productive+infection+with+Listeria+monocytogenes%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Differential susceptibility of bone marrow-derived dendritic cells and macrophages to productive infection with Listeria monocytogenes.</a> Cellular Microbiology. 9 (6), 1397-1411 (2007).</li>
<li>Geijtenbeek, T. B., Kwon, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DC-SIGN%2C+a+dendritic+cell-specific+HIV-1-binding+protein+that+enhances+trans-infection+of+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">DC-SIGN, a dendritic cell-specific HIV-1-binding protein that enhances trans-infection of T cells.</a> Cell. 100 (5), 587-597 (2000).</li>
<li>Izquierdo-Useros, N., Naranjo-Gòmez, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV+and+mature+dendritic+cells%3A+Trojan+exosomes+riding+the+Trojan+horse%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">HIV and mature dendritic cells: Trojan exosomes riding the Trojan horse.</a> PLoS Pathogens. 6 (3), e1000740(2010).</li>
<li>Mittelbrunn, M., Sanchez-Madrid, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intercellular+communication%3A+diverse+structures+for+exchange+of+genetic+information%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Molecular+cell+biology%22%5BJournal%5D)">Intercellular communication: diverse structures for exchange of genetic information.</a> Nature Reviews. Molecular cell biology. 13 (5), 328-335 (2012).</li>
<li>McElroy, D. S., Ashley, T. J., D'Orazio, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphocytes+serve+as+a+reservoir+for+Listeria+monocytogenes+growth+during+infection+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Microbial+Pathogenesis%22%5BJournal%5D)">Lymphocytes serve as a reservoir for Listeria monocytogenes growth during infection of mice.</a> Microbial Pathogenesis. 46 (4), 214-221 (2009).</li>
<li>Salgado-Pabon, W., Celli, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shigella+impairs+T+lymphocyte+dynamics+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Shigella impairs T lymphocyte dynamics in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 110 (12), 4458-4463 (2013).</li>
<li>Cruz Adalia, A., Ramirez-Santiago, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cells+kill+bacteria+captured+by+transinfection+from+dendritic+cells+and+confer+protection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+and+Microbe%22%5BJournal%5D)">T cells kill bacteria captured by transinfection from dendritic cells and confer protection in mice.</a> Cell Host and Microbe. 15 (5), 611-622 (2014).</li>
<li>Barnden, M. J., Allison, J., Heath, W. R., Carbone, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defective+TCR+expression+in+transgenic+mice+constructed+using+cDNA-based+alpha-+and+beta-chain+genes+under+the+control+of+heterologous+regulatory+elements%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology+and+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Defective TCR expression in transgenic mice constructed using cDNA-based alpha- and beta-chain genes under the control of heterologous regulatory elements.</a> Immunology and Cell Biology. 76 (1), 34-40 (1998).</li>
<li>Matheu, M. P., Sen, D., Cahalan, M. D., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+bone+marrow+derived+murine+dendritic+cells+for+use+in+2-photon+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Generation of bone marrow derived murine dendritic cells for use in 2-photon imaging.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (17), (2008).</li>
<li>Inaba, K., Inaba, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+large+numbers+of+dendritic+cells+from+mouse+bone+marrow+cultures+supplemented+with+granulocyte%2Fmacrophage+colony-stimulating+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Generation of large numbers of dendritic cells from mouse bone marrow cultures supplemented with granulocyte/macrophage colony-stimulating factor.</a> Journal of Experimental Medicine. 176 (6), 1693-1702 (1992).</li>
<li>Thöne, F., Schwanhäusser, B., Becker, D., Ballmaier, M., Bumann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FACS-isolation+of+Salmonella-infected+cells+with+defined+bacterial+load+from+mouse+spleen%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microbiological+Methods%22%5BJournal%5D)">FACS-isolation of Salmonella-infected cells with defined bacterial load from mouse spleen.</a> Journal of Microbiological Methods. 71 (3), 220-224 (2007).</li>
<li>Vaudaux, P., Waldvogel, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gentamicin+antibacterial+activity+in+the+presence+of+human+polymorphonuclear+leukocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Gentamicin antibacterial activity in the presence of human polymorphonuclear leukocytes.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 16 (6), 743-749 (1979).</li>
<li>Zhang, X., Goncalves, R., Mosser, D. M., et al. Chapter 14, The isolation and characterization of murine macrophages. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aZhang%2C+X+%22Current+protocols+in+immunology%22">Current protocols in immunology</a>. Coligan, J. E., et al. , Unit 14.1(2008).</li>
<li>Bedoya, S. K., Wilson, T. D., Collins, E. L., Lau, K., Larkin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+th17+differentiation+of+na%C3%AFve+CD4+T+lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Isolation and th17 differentiation of naïve CD4 T lymphocytes.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (79), e50765(2013).</li>
<li>Basu, S., Campbell, H. M., Dittel, B. N., Ray, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+specific+cell+population+by+fluorescence+activated+cell+sorting+%28FACS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Purification of specific cell population by fluorescence activated cell sorting (FACS).</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (41), (2010).</li>
<li>Foucar, K., Chen, I. M., Crago, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organization+and+operation+of+a+flow+cytometric+immunophenotyping+laboratory%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+diagnostic+pathology%22%5BJournal%5D)">Organization and operation of a flow cytometric immunophenotyping laboratory.</a> Seminars in diagnostic pathology. 6 (1), 13-36 (1989).</li>
<li>Itano, A. A., Jenkins, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen+presentation+to+naive+CD4+T+cells+in+the+lymph+node%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Immunology%22%5BJournal%5D)">Antigen presentation to naive CD4 T cells in the lymph node.</a> Nature Immunology. 4 (8), 733-739 (2003).</li>
</ol>

著者らは開示するものは何もない。

T細胞またはTリンパ球は細胞性免疫において中心的な役割を果たし、適応免疫応答26に属している白血球の一種です。 T細胞は 、インビトロで感染されるのに不応性であるが、いくつかの報告は、それらがインビボ14,15 に感染させることができることを示しています。免疫シナプス中のAPCとT細胞の緊密な連絡先は、HIV 11のようないくつかのウイルスを含む生物学的材料13を 、交換するためのプラットフォームとして機能します。最近、教義に反して、T細胞、適応免疫の細胞のパラダイムは、さらに効率的に感染したDC 11,16からtransinfectionによって細菌を捕捉することができることが示されました。ここで我々は彼が感染したBMDCから、in vitroでのT細胞の細菌transinfectionを定量化するためのプロトコルを詳述示します。 T細胞の細菌transinfectionは、抗原...

病原体は、ホストに感染すると、細菌排除のために必要な自然免疫と適応免疫応答の活性化は、通常はあります。自然免疫は、ほとんどの感染を防ぐ防御の最前線です。自然免疫は、微生物の広範なグループの間で保存されている正確な方法要素（病原体関連分子パターン、PAMPS）1に区別します。先天性免疫機構は、食細胞（マクロファージ、好中球、および樹状細胞）、マスト細胞、好酸球、好塩基球、およびナチュラルキラー細胞を含む皮膚、化学障壁（抗菌ペプチド、リゾチーム）と先天的白血球、などの物理的障壁を含みます2。これらの細胞は、コンタクトを介して、または病原体巻き込むと殺害を含んで食作用を介してそれらを攻撃することによってのいずれか、特定して病原体を排除します。このシステムは、pに対する免疫記憶を与える適応免疫とは対照的に、生涯の防衛を許可していませんathogens。適応免疫系は、防衛の2行目で、認識し、複数の微生物および非微生物物質3の特定の抗原に反応することができます。適応免疫系の主要な構成要素は、BおよびT細胞を含むリンパ球です。 B細胞は、病原体または外来性タンパク質に対する抗体を分泌する、体液性応答に関与しています。しかし、T細胞は、サイトカイン分泌または殺す病原体に感染した細胞を4との免疫応答を調節する、細胞性免疫を表します。 主要組織適合複合体（MHC）5-7によって細胞表面に提示される抗原に貪食病原体及びプロセス細菌成分を認識することができ、樹状細胞またはマクロファージ、先天性免疫系の構成成分を含む、抗原提示細胞（APC）。 APCが病原体を貪食した後、彼らは通常、彼らはTと対話流入領域リンパ節への移行します細胞。 Tリンパ球は、そのT細胞レセプターによって特異的ペプチド-MHC複合体を認識することができます。免疫シナプス（IS）は、抗原提示8,9の間に抗原負荷APCとリンパ球との界面に発生します。いくつかの細菌は、食作用を生き残るためには、APCの内部に体系的に普及させることができます。このビューでは、感染したAPCは、細菌の貯水池や細菌の拡散10を容易に 「トロイの木馬」としての役割を果たす。 IS形成の過程で起こりAPCおよびリンパ球の間の密接な接触はまた、膜の一部の交換、遺伝物質およびエキソソームのためのプラットフォームとして機能し、T細胞を感染させるためにいくつかのウイルスのハイジャックすることができます。このプロセスはtransinfection 11-13と呼ばれています。 いくつかの病原性細菌（ リステリア菌 、 サルモネラ菌や赤痢菌）は 、in vivoでのTリンパ球に侵入し、その挙動14-16を変更することができます。我々は持っています最近、Tリンパ球は、抗原提示16の過程で以前に感染した樹状細胞（DC）からtransinfectionによって細菌を捕捉することができることを説明しました。 T細胞の直接感染より（1,000-4,000x）極めてより効果transinfectionによる細菌捕獲。 T細胞はtransinfectionはT細胞によって駆動されるプロセスよりも示す病原体及び非病原体細菌を捕捉します。驚くべきことに、細胞が急速に捕捉された細菌を殺し、プロの食細胞16よりもので、より効率的にやったT（東工大）transinfected。免疫学の定説を破るこれらの結果は、適応免疫の細胞は、先天性免疫のおそらく排他的であった機能を実行することができることを示しています。加えて、我々は、TIT細胞が前炎症性サイトカインを大量に分泌し、 インビボでの細菌感染から保護することが示されました。 ここでは、細菌transinfectionプロセスを研究するために使用される様々なプロトコルを提示マウスモデル。このモデルは、細菌に感染した骨と特異的に相互作用するI-AB 17の文脈においてOVA（OVAp）ペプチド323-339に特異的なTCRを負担OTIIトランスジェニックマウスからのCD4 + T細胞の使用に基づきますmarrow-安定した免疫シナプスを形成OVApでロード由来DC（BMDCを）18,19、。 T細胞transinfectionを可視化し、蛍光顕微鏡を使用して追跡することができます。さらに、フローサイトメトリー、緑色蛍光タンパク質（GFP）16,20を発現する細菌によって放出される蛍光を利用して、感染した細胞を検出するために使用することができます。さらに、T細胞transinfectionより敏感なアプローチ、多数のイベントの測定を可能にゲンタマイシン生存アッセイにより定量することができます。ゲンタマイシンは、真核細胞に浸透することができない抗生物質です。したがって、この抗生物質を使用して、抗生物質添加FRを生き残った細胞内細菌の分化を可能にします21を殺されたオム外のもの。

<table><tbody><tr><td>RPMI</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>SH3025501</td><td></td></tr><tr><td>r-GMCSF</td><td>Peprotech</td><td>315-03</td><td></td></tr><tr><td>LPS</td><td>SIGMA</td><td>L2630-10mg</td><td></td></tr><tr><td>Na ピルビン酸</td><td>サーモサイエンティフィック</td><td>SH3023901</td><td></td></tr><tr><td>2-ME</td><td>Gibco</td><td>31350-010</td><td></td></tr><tr><td>OVAp OTII (323&ndash;339)</td><td>ジェンスクリプト</td><td></td><td></td></tr><tr><td>セルストレーナー 70uM</td><td>BD</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;30 uM シリンジ Filcons 滅菌</td><td>BD</td><td>340598</td><td></td></tr><tr><td>AutoMacs Classic</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-088-887</td><td></td></tr><tr><td>Gentamicin</td><td>Normon</td><td>624601.6</td><td></td></tr><tr><td>Transwell</td><td>Costar</td><td>3415</td><td></td></tr><tr><td>LB</td><td>Pronadisa</td><td>1231</td><td></td></tr><tr><td>寒天</td><td>Pronadisa</td><td>1800</td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド 16%</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CD8 biot</td><td>BD Biosciences</td><td>553029</td><td></td></tr><tr><td>IgM Biot</td><td>ImmunoStep</td><td>Clone RMM-1</td><td></td></tr><tr><td>B220 Biot</td><td>BD Biosciences</td><td>553086</td><td></td></tr><tr><td>CD19 biot</td><td>BD Biosciences</td><td>553784</td><td></td></tr><tr><td>MHC-II Biot (I-A/I-E)</td><td>BDBiosciences</td><td>553622</td><td></td></tr><tr><td>CD11b biot</td><td>Immunostep</td><td>11BB-01mg</td><td></td></tr><tr><td>CD11c biot</td><td>Immunostep</td><td>11CB3-01mg</td><td></td></tr><tr><td>DX5 biot</td><td>BD Biosciences</td><td>553856</td><td></td></tr><tr><td>Gr-1 biot</td><td>BD Biosciences</td><td>553125</td><td></td></tr><tr><td>CD16/CD32</td><td>ImmunoStep</td><td>M16PU-05MG</td><td></td></tr><tr><td>抗サルモネラ</td><td>ABD セロテック</td><td>8209-4006</td><td></td></tr><tr><td>CD11cPE</td><td>BD Biosciences</td><td>553802</td><td></td></tr><tr><td>CD4-APC</td><td>とんぼバイオサイエンス</td><td>20-0041-U100</td><td></td></tr><tr><td>Gr-1 APC</td><td>BD バイオサイエンス</td><td>553129</td><td></td></tr><tr><td>MHC-II (I-A/I-E) FITC</td><td>BD Biosciences</td><td>553623</td><td></td></tr><tr><td>Alexa-Fluor 647 ヤギ抗ウサギ IgG (H+L) 抗体、高度に交差吸着された</td><td>Invitrogen</td><td>A-21245</td><td></td></tr><tr><td>CMAC(7-アミノ-4-クロロメチルクマリン)</td><td>ライフサイエンス</td><td>C2110</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>SIGMA</td><td>A7030-100G</td><td></td></tr><tr><td>ストレプトアビジンマイクロビーズ</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-048-101</td><td></td></tr><tr><td>BD FACSCanto II</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

t細胞は、樹状細胞からtransinfectionによって細菌をキャプチャ

T Cells Capture Bacteria by Transinfection from Dendritic Cells

最近、私たちは、記述されている内容に反して、適応免疫細胞のパラダイムであるCD4+ T細胞が、感染した樹状細胞(DC)から細菌を捕捉する、いわゆるトランスインフェクションと呼ばれるプロセスを示しました。ここでは、抗原提示の過程で発生するトランスインフェクションプロセスの分析について説明します。このプロセスは、オボアルブミンのペプチドに特異的なT細胞受容体(TCR)を持つトランスジェニックOTIIマウスのCD4+ T細胞を用いて明らかにされました。この細胞は、この特定のOVApをロードした感染樹状細胞と安定した免疫複合体を形成することができます。DC-T細胞伝達中の緑色蛍光タンパク質(GFP)発現細菌の動態は、生細胞イメージングによってモニターでき、細菌のトランス感染の定量化はフローサイトメトリーによって行うことができます。さらに、トランス感染は、細胞外細菌を殺すが細胞内細菌を殺さない非透過性のアミノグリコシド系抗生物質であるゲンタマイシンの使用に基づく、より感度の高い方法によって定量化できます。この古典的な方法は、細菌感染の効率を研究するために微生物学で以前に使用されてきました。ここでは、初代細胞の単離からトランス感染の定量化まで、全プロセスのプロトコルについて説明します。

ここで、我々は派生-DCを感染した骨髄からマウスT細胞細菌transinfectionを実行する方法を説明し、どのように2つの異なるアプローチを介した細菌transinfectionを測定する：フローサイトメトリーおよびゲンタマイシン生存アッセイ図1は、細胞を得るための手順をまとめたものです。 DCは、9日間のGM-CSFとの骨髄細胞をインキュベートすることによって生成されます。その後、DCはOVA（OVAp）の特定のペプチドで、後にそれらをロードするために、その膜上MHCIIを高めるために、LPSで成熟しています。対照として、いくつかのDCをOVApがロードされていません。両方のDC（OVAp、ロードされ、無負荷）が10細菌の感染多重度（MOI）で感染させます。一方、CD4 + T細胞は、特定のOVApを認識OTIIトランスジェニックマウスのリンパ節から単離されている。 図2は、適切な陰性対照を含むT細胞transinfectionを実行し、定量化するための手順を示しています。 d...

ここで、プロトコルは、事前に感染した樹状細胞（DC）からtransinfection介して抗原提示の間に発生するCD4 + T細胞による細菌の取り込みを測定するために提示されています。初代細胞、DC、DC / T細胞複合体の形成の感染、および細菌のT細胞トランスフェクションの測定の分離：私たちは、必要なステップを実行する方法を示しています。

T細胞は、樹状細胞からTransinfectionによって細菌をキャプチャ

Recently, we have shown, contrary to what is described, that CD4+ T cells, the paradigm of adaptive immune cells, capture bacteria from infected dendritic ...

本手順の全体的な目的は、マウス細胞モデルを用いて、細菌によるCD4+ T細胞へのトランス感染を定量化することです。生体内（in vivo）では、Listeria monocytogenesやSalmonella enteritidisなどの一部の病原性細菌はTリンパ球に感染し、その挙動を変化させることができます。しかし、試験管内（in vitro）において、T細胞に感染させることは容易ではありません。この観察結果に基づき、ウイルス感染時に起こるのと同様に、抗原提示の過程でT細胞が感染した樹状細胞から細菌を捕捉できるかどうかを検討しました。その結果、T細胞が細菌を捕捉し、その後殺傷することが分かりました。実際、T細胞は専門的な食細胞よりも効率的にこれを行うことが明らかになりました。これらの結果は、適応免疫の細胞が、本来は自然免疫のみに限定されていると考えられていた機能を果たし得ることを示しており、免疫学の中心的教義と矛盾しています。本日は、マウスモデルを用いて細菌のトランスインフェクション（再感染）プロセスを研究するために使用したプロトコルを紹介します。Esteban Veigaと私が、大学院生のGuillermo Ramirez-SantiagoとRaquelle Garcia-Ferreras、および技術者のMonica Torres-Torresanoと共に、この手順を実演します。このビデオで説明するすべての手順は、滅菌済みの培地、器具、ピペットチップ、および培養皿のみを使用し、クリーンベンチ内で行ってください。組織培養処理されていない滅菌済みの15 centimeterペトリ皿に、1匹のマウスから得られた骨髄由来樹状細胞に1 µLの1 mg/mLリポポリサッカライドを添加します。主要組織適合性複合体II（MHC II）の発現を高めるため、細胞を24時間インキュベートします。インキュベーション後、フローサイトメトリーを行い、MHC IIの発現と分化を確認します。ここに示すようにMHC IIの発現が確認されたら、細胞を滅菌済みの50 milliliterポリプロピレンチューブに移します。5 millimolar EDTAを含むPBSを10 milliliters加え、細胞を600 x gで遠心分離します。遠心分離が完了したら、10% FBS含有RPMIで細胞を再懸濁し、再度遠心分離して洗浄を行います。洗浄後、樹状細胞5×10⁶個につき1 mLの10% FBS含有RPMIを加え、ピペッティングして再懸濁します。次に、再懸濁した樹状細胞を、等量ずつ2本のチューブに分注します。1本のチューブに、10 micrograms per milliliterのOT-II OVApを加えます。もう一方のチューブは未処理のままにします。これは抗原ローディングの陰性対照として使用します。樹状細胞のMHC II分子にOVAペプチドをロードさせるため、チューブを少なくとも1時間インキュベートします。その間に、Salmonella enteritidisをPBS溶液で3回洗浄し、感染用の準備を行います。各洗浄の間に1800 x gで遠心分離し、LB培地および分泌された毒素を除去します。次に、細菌をRPMIで再懸濁します。インキュベーション後、感染多重度（MOI）10で各チューブの樹状細胞に感染させ、細胞を1時間インキュベートします。細胞への感染後、PBSで3回、次に10% FBS含有RPMIで1回洗浄します。可溶性OVAp中の細胞外細菌の大部分を除去するため、洗浄ごとに450 x gで遠心分離します。最後の遠心分離後、細胞をRPMI 10%FBSを用いて20 x 10⁶ cells/mLの密度で再懸濁します。24ウェル培養プレートの5つのウェルに、0.5 mLの液量でCD4+ T細胞を2 x 10⁶個ずつ分注します。次に、物理的接触を制御するため、孔径 3 µm のポリカーボネート製トランスウェルバリアを3番目と4番目のウェルに設置します。1番目のウェルに、感染させた過負荷樹状細胞を 0.1 mL 加えます。2番目のウェルに、感染させた非負荷樹状細胞を 0.1 mL 加えます。感染させた負荷済み樹状細胞を0.1 mL、感染させた非負荷樹状細胞を0.1 mL、それぞれ別のウェルに加えます。最後に、陰性対照として、CD4+T細胞が入った5番目のウェルにMOI 10で直接感染させます。その後、RPMIを用いてウェルの全量を0.6 mLに調整します。免疫シナプスを形成させるため、プレートを30分間インキュベートします。インキュベーション後、各ウェルに培地1 mLあたり100 µgのGentamicinを添加し、1時間インキュベートします。Gentamicinはアミノグリコシド系抗生物質であり、真核細胞内に浸透しません。したがって、このステップでは、アミノグリコシドが細胞外の細菌を死滅させますが、細胞内の細菌は死滅しません。インキュベーション後、非接着細胞を15 mLチューブに回収し、10 mLのPBS BSA EDTA緩衝液で再懸濁します。大部分の樹状細胞が付着したままのプラスチック培養プレートは廃棄してください。次に、細胞の凝集を解消するため、チューブを穏やかにボルテックスします。チューブを 600 x g で遠心分離します。その後、任意のチューブから細胞上清を 500 microliters 吸い出し、新しいチューブに分注します。これは、ゲンタマイシン処理が有効であったことを示す対照として使用します。すべてのサンプルを氷上に置きます。この段階では、試験サンプル4本と対照2本の計6本のチューブがあります。ほとんどの樹状細胞はプレートと共に除去されましたが、トランスウェルバリアによって分離されなかったサンプルには、依然として一部が含まれている可能性があります。コンタミネーションを低減するため、磁気細胞分離またはセルソートを用いて、トランスウェルバリアで分離されなかったサンプルからCD4+T細胞を再単離してください。最終的な単離細胞における樹状細胞の割合は2%未満である必要があります。残りのサンプルは氷上に保持します。CD4+T細胞の精製が完了したら、細菌クラスの感染に向けて保存します。これは、コロニー計数またはフローサイトメトリーによって行うことができます。ここでは、コロニー数を計測する方法を説明します。形質導入したCD4+T細胞をPBSで2回洗浄してください。各洗浄の間に600 x gで遠心分離を行います。次に、細胞数をカウントし、PBSを用いて2 × 10⁶ cells/mLの濃度で再懸濁します。500 µLのT細胞に、細胞を溶解させるために0.1% Triton X-100を500 µL加えます。これにより、T細胞内から細胞内細菌が放出されます。溶出した細胞の各サンプルについて、3段階の連続希釈を行います。次に、LB寒天培地プレートを4等分し、希釈していない懸濁液を含む各希釈液50 µLを、プレートの各セクションに塗布します。別のLB寒天培地プレートに、保存した細胞上清を塗布し、Gentamicinの有効性のコントロールとします。次に、別のプレートに、追加のコントロールとして直接感染させたT細胞を播種します。一晩インキュベートしてください。翌日、プレートの各セクションのコロニー数を数え、各サンプルのコロニー形成単位数を算出します。低レベルの樹状細胞混入（2%未満と定義）が発生した場合は、低レベルの樹状細胞混入に相当するコロニー形成単位を差し引きます。T細胞のトランス感染はSalmonella enteritidisを用いて行い、本ビデオで説明したジェンタマイシン生存アッセイによって定量しました。左図に示すように、直接感染させたT細胞を播種したところ、コロニーの増殖は見られず、T細胞が直接的な細菌感染に対して耐性があることが示されました。右図に示すように、トランスインフェクションアッセイの上清をプレートした際、コロニーが観察されなかったことから、ジェンタマイシンが適切に機能したことが示されました。ここでは、トランスウェルバリア存在下で実施したトランスインフェクションアッセイの結果を示します。OVA負荷サンプルおよび非負荷サンプルの両方の未希釈懸濁液において、わずか3つのコロニーのみが観察されています。対照的に、T細胞が感染した樹状細胞と直接接触している場合には、多数のコロニーが観察されます。さらに、OVApをロードした樹状細胞をT細胞と共培養したところ、細菌の取り込みが約5倍に増加しました。以上の結果から、感染した樹状細胞とT細胞の直接接触が細菌の取り込みを促進し、抗原認識時に細胞間転移感染が強化されることが示唆されます。このビデオを視聴することで、海洋性T細胞を用いたトランスインフェクション（細胞間感染）の定量方法について十分に理解できるはずです。ゲンタマイシン生存法によるトランスインフェクションの定量は、感度が非常に高いという利点があります。これにより、たった1個の感染細菌を検出することが可能です。本手順において、精製ステップが極めて重要であることを念頭に置いてください。コロニー数を用いてトランスインフェクション率を決定する場合、純度は非常に高くある必要があります。フローサイトメトリーによる定量では、樹状細胞とT細胞を容易に区別できるため、このような制限はありません。ただし、GFP発現細菌が十分に明るく、外部の蛍光背景に対して感染細胞を検出できる必要があるという制約があります。病原体を扱う操作は非常に危険を伴う可能性があるため、本手順を実施する際は、常に適切な安全上の予防措置を講じることを忘れないでください。

t-cells-capture-bacteria-by-transinfection-from-dendritic-cells

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

それゆえ、それが関与するタンパク質の空間的および時間的挙動を調べることが重要であるシグナリングを理解するために、細胞膜内や細胞内の場所にどちらかのタンパク質の棲み分けが大幅にシグナル伝達の結果に影響を与えることができる1調節機構である。ここではT細胞のシグナル伝達を研究するための全反射顕微鏡ベースのシステムを説明しますが、広く適用可能である。...

TCRとそれに関連するシグナル伝達タンパク質のリアルタイムの同時イメージングのための全反射顕微鏡法

出典: Cruz-Adalia、A.、 et al. T細胞は樹状細胞からのトランス感染により細菌を捕捉する J. Vis.

免疫学的シナプス形成を介したT細胞のin vitro細菌トランス感染

このビデオでは、免疫調節薬理剤を使用して樹状細胞(DC)を寛容性DC(TolDC)に変換する方法を示します。この変換は、CD4+...

樹状細胞とCD4+ T細胞との相互作用に対する免疫調節薬理剤の効果

ここでは、レトロウイルス形質導入およびテトラサイクリンの不存在下でレンチウイルスベクター（LV）の成分を発現できる細胞株を作成するためのコンカテマートランスフェクションを使用する。このLVは、GFPをコードし、樹状細胞上の受容体に特異的な糖タンパク質、SVGmuと偽されています。...

テトラサイクリン調節細胞株は、具体的に樹状細胞を標的とする高力価レンチウイルスベクターを生成

無細胞HIV-1粒子とは異なり、感染したCD4 + T細胞を効果的に形質細胞様樹状細胞（pDC）によって感知されます。この原稿は、I型​​IFNの放出によって評価した末梢血単核細胞（PBMC）または単離されたpDCは、pDCにすることにより先天的センスを評価するためにHIV-1感染T細胞と共培養する方法が記載されています。...

HIV-1感染CD4の生得センシングを評価<sup&gt; +</sup&gt;使用して形質細胞様樹状細胞によるT細胞<em&gt;エクスビボ</em&gt;共培養系。

ここでは、簡単な手動タンパク質沈殿ステップとオンラインカラム抽出を使用して、乾燥血液スポット中の免疫抑制剤タクロリムスを定量するための高速液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析(HPLC-MS/MS)アッセイについて説明します。...

LC-MS / MSを用いて乾燥血液スポット上で免疫抑制タクロリムスの定量化

このプロトコールでは、腸内微生物叢抗原特異的T細胞養子移入大腸炎モデルが記載されている。CD4+ T細胞は、CBir1...

免疫不全マウスへのCBir1 TCRトランスジェニックCD4+ T細胞の養子移入による腸管炎症の誘導

薬理学的薬剤がナイーブ単球由来樹状細胞からin vitro...

ヒトCD14+ 単球から寛容性樹状細胞を作製するための免疫調節剤を試験するための簡便で効率的な方法

このプロトコルは、転写因子PU.1、IRF8、およびBATF3の強制発現を通じて、腫瘍微小環境内のマウスがん細胞を1型樹状細胞にin vivo...

腫瘍細胞の1型従来の樹状細胞様細胞への扱い可能な in vivo 再プログラミング

この記事では、バクテリオファージラムダの感染の蛍光標識されたバージョンを準備する手順を説明します...

細胞運命を以下に<em&gt; E大腸菌の</emラムダファージによる感染後&gt;

学ぶ細菌のCD4+T細胞トランスインフェクション定量法。マウス細胞モデルを用いて、樹状細胞からの細菌キャプチャと殺菌効率を評価する免疫学的プロトコルです。

T細胞は、樹状細胞からTransinfectionによって細菌をキャプチャ

さらに動画を探す