Name: L-ロイシンメチルエステルを使用した小脳顆粒細胞培養物からのミクログリアの選択的枯渇 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-07T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 10 s
Description: 学ぶL-ロイシンメチルエステルを用いた小脳顆粒細胞培養物からのミクログリア選択的枯渇法。神経変性疾患におけるミクログリアと神経細胞の相互作用を解明し、神経炎症の役割を理解する上で有用な手法です。

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この研究は、英国のAims2CureとUCL Impact Awardの博士号取得者によるJMPへの支援と、MRCの認知症能力開発博士課程によるJMPへの支援を受けました。

本明細書に記載の全ての実験は、1986年の英国動物（科学的手続）法に基づいて実施しました。 楽器、文化メディア、および料理の作製<ol><li> 2つのステンレス鋼実験室解剖ハサミと2つのステンレス鋼実験用鉗子を準備します。紫外線下で培養フードO / Nですべての機器と場所をオートクレーブ滅菌用（UV）光。 </li><li>最小必須培地（MEM）培地（10％ウシ胎児血清[FBS]、20mMの塩化カリウム、25mMのNaHCO 3を、30mMのD-グルコース、2mMのL-グルタミン、100 U / mlペニシリン、100 500mlのを作ります/ mlのストレプトマイシンおよび6 / mlのアンピシリン）とフィルター滅菌します。ヶ月間4℃で保存してください。 </li><li> 14ミリメートル、数1の厚さのカバースリップを含む24ウェル培養プレートを準備します。先に説明したように3 100 mg / Lのポリ-D-リジン（PDL）でカバースリップおよびコーティングをオートクレーブ。 UV光はO / Nを殺菌します。 </li></ol> CGC培養液の調製<ol><li>処理されたオートクレーブ処理、UV光の「溶液A」（100ミリリットル）、グルコース250mgのを含有する無菌のdH 2 O、ウシ血清アルブミン[BSA]、リン酸緩衝生理食塩水[PBS]（のCa 2+の955 mgの300 mgを準備し、 MG）+自由、および3.8％の1ミリリットルのMgSO 4·7H 2 O </li><li> 5 mg / mlのトリプシン溶液Aの9ミリリットル中に希釈し、1 mlを含む準備「溶液B」（10ミリリットル） </li><li> 「溶液C」1000個のDNアーゼ、大豆トリプシン阻害剤0.5mgの、溶液Aで10mlに希釈した3.8％のMgSO 4·7H 2 Oの100μLを含む（10ml）に準備</li><li>溶液C 3.2 mlを含有する「溶液D &#39;（20ml）を溶液Aで20mlまで希釈し、準備します</li><li> ·7H 2 O EBSS、25mMのNaHCO 3を、3 mMの硫酸マグネシウムを含むBSA /アールの平衡塩溶液（EBSS）溶液を調製し、4％BSA、pH7.4中で、先に説明した3。 </li><li> 、150mMのLMEの最終濃度を得MEM培地5mlに純粋LMEを追加することによってLMEを調製する卓上pHメーターを用いてpH 7.4溶液を返し、フィルタ28ミリポリエーテルスルホン（PES）、0.2μmのシリンジを使用して滅菌フィルター。 </li></ol> 3. CGCSを培養<ol><li>以前に3を説明したように4-7日齢のラットの子から小脳を収集します。氷上で5ミリリットル溶液Aを含むペトリ皿に直ちに置きます。 </li><li>シャーレのふたで小脳と場所組織から余分な溶液を捨てます。 </li><li>少なくとも三つの異なる方向によく燃え上がっかみそりの刃で細かく組織をみじん切りに。 </li><li> 5分間37℃の水浴中で溶液（失われた制限された組織を確保するために溶液でペトリ皿をすすぐ）B及び場所にみじん切り組織を加えます。静か分おきに振ります。 </li><li>トリプシン、手ぶれやセントを中和するために、チューブに溶液D（20ミリリットル）を追加5分間、65×gでrifuge。 </li><li>上清を捨てます。 </li><li>直径を小さくする3燃え上がっガラスピペットで十分に溶液C.トリチュレート4mlの（約10回ずつ）で再懸濁し、懸濁液をできるだけ均一になるまで。 </li><li>ゆっくり、ゆっくりとBSA / EBSSの上にこのホモジネートを数滴を追加します。それはBSA / EBSSを通じてシンクを開始した場合は、より多くを粉砕するおよび/またはもう少し溶液Cを追加ホモジネートは、BSA / EBSSの上の層に座ってする必要があります。振らないでください。 5分間100×gでスピン。 </li><li>上清およびMEM培地1mlでペレットを再懸濁し（ソフト）を取り外します。 </li><li> MEM培地500μlの80万細胞/カバーガラスで血球計数器およびプレートを用いて細胞数を計測します。 6％CO 2で37℃のインキュベーターに入れ。 </li><li>培地を翌日（分取した後24〜36時間）を変更します。細胞周期阻害剤のアラビノフラノシルシチジン（のAraC）の10μMを含むMEM培地の溶液を作ります。 <ol><li>それぞれについてカバーガラスにして、再び細胞とトップまでの古い培地を250μlを追加、通常のMEM培地250μlを添加し、細胞を洗浄するために、これを吸引し、残りの部分を吸引、新鮮な24ウェルプレートに古い培地250μlのを保持のAraC含有培地250μlのと。 注意：細胞は、 インビトロ （DIV） で 6日間使用することができます。 </li></ol></li></ol> 4.を選択ミクログリアを枯渇（6 DIVに出演） <ol><li> 150mMのLMEの最終濃度が得られるようにMEM培地の別々のアリコートを5 mlに純粋なLMEを追加します。 </li><li> pHを7.4に解決策を戻し、フィルターは28ミリメートルのポリエーテルスルホン（PES）、0.2μmのシリンジフィルターを用いて滅菌します。 </li><li>コントロール培養のための通常のMEM培地と共に10分間37°Cの水浴中でMEM培地と場所での50mM（2×LME）の濃度に溶液を希釈。 </li><li> CGC培養から半分（250μl）をMEM培地を除去し、37℃で保持します。 </li><li>細胞を処理します、または対照培養のためのLMEのない予め温めたMEM培地（250μl）を、25 mMとウェル濃度を与える1： すなわち 2×LME（250μl）を含むMEM培地で1希釈しました。 </li><li> 1時間、6％CO 2の加湿雰囲気中、37℃で細胞をインキュベートします。 </li><li>洗浄細胞を2回新鮮予め温めたMEM培地中のLME含有培地を除去し、その後、対応するウェルに保持された培地と新鮮予め温めたMEM培地を等量置き換えます。 </li><li> （37℃で6％CO 2の加湿）インキュベーターに文化を戻し、任意のさらなる処理の前に24時間休ませるままにします。 </li></ol>

<ol><li>Herculano-Houzel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+remarkable%2C+yet+not+extraordinary%2C+human+brain+as+a+scaled-up+primate+brain+and+its+associated+cost%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">The remarkable, yet not extraordinary, human brain as a scaled-up primate brain and its associated cost.</a> PNAS. 26 (109), 10661-10668 (2012).</li>
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<li>Crocker, S. J., Frausto, R. F., Whitton, J. L., Milner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+to+establish+microglia-free+astrocyte+cultures%3A+comparison+of+matrix+metalloproteinase+expression+profiles+in+pure+cultures+of+astrocytes+and+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">A novel method to establish microglia-free astrocyte cultures: comparison of matrix metalloproteinase expression profiles in pure cultures of astrocytes and microglia.</a> Glia. 56 (11), 1187-1198 (2008).</li>
<li>Kumamaru, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liposomal+clodronate+selectively+eliminates+microglia+from+primary+astrocyte+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflamm%22%5BJournal%5D)">Liposomal clodronate selectively eliminates microglia from primary astrocyte cultures.</a> J Neuroinflamm. 9, 116(2012).</li>
</ol>

著者らは、競合する金銭的利益はないと宣言している。

CGCからミクログリアの成功選択的除去を確実にするために最も重要なステップおよび/または混合培養物は、1）滅菌し、健康CGC文化を維持します。 2）フィルタは、LME含有培地を滅菌し、pHを7.4に溶液を戻します。 3）37に保持CGC媒体とLME含有培地を維持 ヒートショックを回避するため°C; 4）細胞をインキュベーターの外に保持される時間を短縮するために迅速に取り組ん。 以前に我々の研究室で最適化された濃度 - 私たちは、CGC培養物からミクログリアを枯渇させるために、25mMのLMEを使用していました。それにもかかわらず、いくつかのミクログリアは、まだいくつかの差別化、非増殖ミクログリアの人口を反映している可能性が信じているLME処理を、以下の培養中に残っています。実際、ハンビーら （2006）50-75 mMのLMEが高密度星状細胞単層13からミクログリアを除去するために必要であったことを発見しました。また、純粋なミクログリアCのことが以前に示されていますultures、10mMのLMEはなく、わずか24時間...

人間の脳は、推定850億のニューロンおよびグリア1を含むさらに850億非神経細胞を含みます。過去100年間の大部分のために神経科学者は、ニューロンのための構造的支持を提供した受動支持細胞より少しであることがグリア細胞を信じて、神経細胞集団に主に焦点を当てている - それ故に「グリア」のギリシャ語の語源は、英語に翻訳します「接着剤」。しかし最近では、それは、神経膠細胞の相互作用がはるかに根本的な神経生物学、神経生理学、および多くの神経変性疾患の発生および進行の基本的な側面になる可能性があることがますます明らかになりました。小脳顆粒細胞（CGCS）、ヒトの脳で最も豊富な均質なニューロン集団は、小脳を支配し、その細胞成分の90％以上を占めています。したがって、これらの細胞は、Tのためのモデル系として、in vitroで広範に使用されています彼は、神経発達、機能、および病理2-6の検討します。 しかし、CGC培養はまだ間違いなくかなりの割合でミクログリア及びその他のグリアが含まれています。その結果、推定される種々の細胞治療への直接神経細胞応答を表示するCGCデータは、実際に発生する可能性がある - 一部または全体で - 文化の中で、隣接するグリアの間接的な二次応答から。これを評価するために、我々は、選択的に、L-ロイシンメチルエステル（LME）の助けを借りてCGCニューロン培養物からミクログリアを除去しました。 LMEは、もともと選択マクロファージ7を破壊するために使用lysomotropic剤であり、以降も選択的神経、アストロサイト、および混合膠細胞培養8,9,10からミクログリアを枯渇させるために使用されてきました。 LMEは、リソソームを破砕した後、アポトーシス13,14を引き起こしており、マクロファージおよびミクログリアによって内在化されます。マクロファージおよびミクログリアは、彼らがparticulaであることを引き起こして、リソソームにおける特徴豊富ですLMEの治療に暴露されるとRLY脆弱。このプロトコルは、CGC、その他のグリア/ニューロンの培養系を利用した実験でミクログリアの貢献を把握するための強力な、まだシンプルで簡単な方法を提供します。

<table><tbody><tr><td>鉗子&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4142</td><td>湾曲した端部は小脳の除去を容易にします&nbsp;</td></tr><tr><td>マイクロ解剖ハサミ</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3146</td><td>まっすぐで鋭い先端がげっ歯類のP4-7解剖を容易にします&nbsp;</td></tr><tr><td>L-ロイシンメチルエステル塩酸塩</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>7517-19-3</td><td></td></tr><tr><td>EBSS溶液&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E7510-500 ml</td><td></td></tr><tr><td>Poly-D-lysine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>27964-99-4</td><td>使用1日前のコートカバースリップ&nbsp;</td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン(BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9418</td><td></td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水(PBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4417</td><td></td></tr><tr><td>DNase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5025</td><td></td></tr><tr><td>大豆トリプシン阻害剤&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T6414</td><td></td></tr><tr><td>マウス抗ED1抗体&nbsp;</td><td>アブカム</td><td>ab31630</td><td></td></tr></tbody></table>

l-ロイシンメチルエステルを使用した小脳顆粒細胞培養物からのミクログリアの選択的枯渇

Selective Depletion of Microglia from Cerebellar Granule Cell Cultures Using L-leucine Methyl Ester

ミクログリアは、中枢神経系の免疫担当細胞に常在し、神経機能の調節と制御、および自然免疫の媒介において多面的な役割を果たしています。初代げっ歯類細胞培養モデルは、ニューロンとグリアの相互作用の理解を大きく前進させましたが、混合培養からミクログリアを特異的に除去する方法が利用されたのはごく最近のことです。そのような技術の1つ(ここで説明)は、マクロファージとミクログリアによって内在化されるリソモトロピック剤であるL-ロイシンメチルエステルの使用であり、リソソームの破壊とその後のアポトーシスを引き起こします13,14。L-ロイシンメチルエステルを用いた実験は、多様な培養条件下でのミクログリアの周辺細胞環境への寄与を明らかにする力を持っています。当研究室で最適化したプロトコールを用いて、P5げっ歯類の小脳顆粒細胞培養からミクログリアを除去する方法について解説します。このアプローチにより、ミクログリアが実験データに及ぼす相対的な影響を評価するだけでなく、脳卒中、アルツハイマー病、パーキンソン病などの神経疾患の培養モデルにおいて、ミクログリアが神経保護的または神経毒性的な役割を果たしているかどうかを判断することができます。

選択的CGCおよび/または混合培養物からミクログリアを排除するために、この技術の能力を正確に識別し、その周囲の細胞からミクログリアを区別するために、研究者のその後の能力に依存しています。 図1に示されるように、これは、例えば、イソレクチンB4として、マイクログリア特異的細胞マーカーを使用して達成することができる。 図2に示すように、星状細胞およびニューロンの密度および形態学に対する観察可能な変化は、各メイン処理群に対して記録されませんでした。培養物は、化合物のミクログリア固有のアクションをサポートし、単独LMEで処理した場合重要なことは、神経細胞またはアストロサイトの形態に有意な変化は観察されなかった。 図3（a）は、一次げっ歯類アストロサイト培養物12からアストロサイトの密度と形態の観察可能な変化を示さないが、ありません汚染ミクログリアの損失が表示されます。 図3Bにおいて、Aのように、変更なしastrocyでTE密度と形態が見られました。しかし、ミクログリア数および反応性の汚染...

ミクログリアは、さまざまな非細胞自律メカニズムによって、培養中のニューロンや他のグリアに影響を与えることができます。ここでは、初代ニューロン培養細胞からミクログリアを選択的に枯渇させるためのプロトコルを紹介します。この方法は、ミクログリアとニューロンの相互作用の役割を解明する可能性を秘めており、神経炎症が特徴的な特徴である神経変性疾患にも影響を及ぼします。

L-ロイシンメチルエステルを使用した小脳顆粒細胞培養物からのミクログリアの選択的枯渇

Microglia, the resident immunocompetent cells of the CNS, play multifaceted roles in modulating and controlling neuronal function, as well as mediating ...

この手順の全体的な目的は、顆粒細胞培養物からミクログリア細胞を選択的に除去することです。まず、cgcsの集団を培養し、37 °C、6% carbon dioxideのインキュベーター内で保存します。次に、MEM培地を用いてLME溶液を作成し、最終濃度を150 millimolar LMEにします。次に、CGC培養液からMEM培地の半分を除去してインキュベーター内で保持し、CGC培養液を同量のMEM培地含有LMEに置換して、37°C、6% carbon dioxideのインキュベーターに1時間置きます。最終ステップとして、あらかじめ加温した新鮮なMEM培地でCGC培養液を2回洗浄します。保持していた培地を等量の新鮮な培地に交換し、さらなる処理を行う前に細胞をインキュベーターに戻して24時間培養します。最終的に、免疫化学および蛍光顕微鏡を用いて、小脳顆粒細胞培養物からミクログリア細胞が特異的に除去されていることを確認します。この手法は、さまざまな条件下でミクログリアがニューロンにどのような影響を与えるか、また、それらの影響がアルツハイマー病やパーキンソン病などの神経変性疾患の理解においてどのような意義を持つかといった、神経生物学分野における重要な疑問への回答に寄与します。一般的に、この手法に不慣れな方は、初代培養に精度と迅速さが求められるため、苦労することがあります。まず、生後4〜7日のラット幼仔から小脳を採取することから始めてください。採取後すぐに、氷上の溶液A 5 mLが入ったペトリ皿に入れてください。次に、小脳から過剰な溶液を除去し、組織をペトリ皿の蓋の上に置きます。続いて、ウェル付きのカミソリ刃を用いて、組織を少なくとも3つの異なる方向から細かく刻みます。その後、刻んだ組織を溶液Bに加えます。37 °Cのウォーターバスに5分間置き、数分おきに緩やかに振盪させます。次に、トリプシンを中和させるために溶液Dを20 millilitersチューブに加え、遠心分離機で60 5Gで5分間振盪遠心します。その後、上清を捨て、4 millilitersの溶液Cで再懸濁します。懸濁液が可能な限り均一になるまで、直径が徐々に小さくなる3本の火炎滅菌したガラスピペットを用いて、サンプルを10回ずつトリチュレーションします。次に、このホモジネートをB-S-A-E-B-S-Sの上にゆっくりと慎重に数滴加えます。もしB-S-A-E-B-S-Sの中に沈み始めた場合は、さらに滴定し、溶液Cを少量追加してください。ホモジネートはB-S-A-E-B-S-Sの上に層となって留まる必要があります。これを100 Gで5分間遠心分離し、振盪させないでください。その後、上清を除去し、ペレットを再懸濁させます。1 mLのMEM培地を用いてヘモサイトメーターで細胞数を計測し、カバーガラス1枚あたり800,000個の細胞を播種します。その後、500 µLのMEM培地を加え、37 °C、6% CO2のインキュベーター内に置きます。次に、10 µMの細胞周期阻害剤RCを含むMEM培地溶液を調製します。各カバーガラスについて、元の培地250 µLを新しい24ウェルプレートに移し、残りを吸引除去します。通常のMEM培地を250 µL加え、細胞を洗浄します。その後、古い培地を250 µL細胞に再度加え、さらにRSE含有培地を250 µL加えて満たします。この手順では、5 mLのMEM培地に純粋なLMEを加え、最終濃度が150 mM LMEになるように調製します。酸塩基溶液を用いて、溶液をpH 7.4に戻します。次に、孔径0.2 µmの28 mm PESシリンジフィルターを用いて、滅菌ろ過を行います。その後、LME溶液をMEM培地で50 mMの濃度に希釈します。次に、コントロール培養用の通常のMEM培地とともに、37 °Cのウォーターバスで10分間静置します。10分後、各CGC培養液からMEM培地を250 µL分採取します。その後、培地を37 °Cで保持します。次に、2倍濃度のLMEを含むMEM培地、またはLMEを含まない予熱済みのMEM培地で細胞を処理します。対照群の培養細胞については、37 °C、6%二酸化炭素含有の加湿雰囲気下で1時間インキュベートします。その後、LME含有培地を除去するため、予熱した新鮮なMEM培地で細胞を2回洗浄します。続いて、残った培養液と同量の新鮮な予熱済みMEM培地を添加します。最後に、さらなる処理を行う前に、培養物を37°C、6%加湿二酸化炭素条件下で24時間インキュベートします。この図は、25～75 mMのLMEで1時間処理した後、洗浄を行ったCGC培養物を用いて実施した実験の代表的な画像を示しています。総細胞数およびアポトーシス形態を示す細胞の定量化にはDPIを用いた免疫化学染色を、ミクログリアの同定および定量化にはISO lectin B fourを用いました。このグラフは、アポトーシス形態を示す細胞の定量結果を示しています。ここに示しているのは、25 mMのLMEで1時間処理したCGC培養物を用いて実施した実験の代表的な画像です。神経細胞密度の変化を特定するためにDAPIおよびanti beta three tubulinを用いて、またアストロサイトの密度と形態の変化を特定するためにanti GFAPを用いて免疫化学染色を行いました。陰性対照画像は、一次抗体を省略して調製したCGC培養細胞を示しています。この手法に習熟すれば、適切に実施することで約2時間で完了させることができます。

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

このビデオは、成体マウスの脳の皮質からミクログリアを分離する技術を示しています。まず、皮質はセグメンテーションと均質化を受けてニューロンや他のグリア細胞を除去し、ミクログリアを維持します。その後、細胞懸濁液を抗ミエリン磁性マイクロビーズと磁界に曝露し、ミクログリアと骨髄細胞をミエリン破片とミエリンを含む細胞から効果的に分離します。...

成体マウス脳の皮質からのミクログリアの分離

このビデオでは、マウスの初代小脳顆粒ニューロンを単離し、培養する技術を紹介しています。細胞を代謝拮抗剤で処理して、増殖するグリア細胞を排除し、小脳顆粒ニューロンの純粋な培養物を産生します。...

マウス初代小脳顆粒ニューロンの単離と培養

このビデオは、初代ラットの神経細胞培養からミクログリアを選択的に除去する技術を示しています。小脳顆粒ニューロンは、増殖するグリア細胞を排除するために代謝拮抗剤で処理されます。さらに、リソソーム標的化剤で処理して、培養物からミクログリアを枯渇させます。...

ラット小脳顆粒ニューロン培養物からのミクログリアの選択的除去

このビデオは、マウスの子犬の小脳から小脳神経前駆細胞の分離と培養を示しています。小脳顆粒ニューロン前駆細胞は、接着差によって単離および精製され、アストロサイトを効果的に除去します。これらの培養された前駆細胞は、その後、小脳顆粒ニューロンに分化します。...

マウス小脳顆粒ニューロン前駆細胞の単離と培養

このビデオは、磁気細胞ソーティングを使用してマウス脳の脱髄病変からミクログリア細胞を抽出するためのプロトコルを示しています。このプロトコルは、ミクログリア細胞を含む病変のある脳組織を解剖し、特定の酵素で組織を処理して単一細胞懸濁液を取得し、ミクログリア受容体特異的磁気ビーズを利用してミクログリア細胞を単離することを含みます。...

磁気活性化細胞選別を用いたマウス脳脱髄病変からのミクログリアの単離

このビデオでは、マウスの一次小脳顆粒ニューロンにおける活性酸素種(ROS)を使用したニューロン損傷モデルの生成について概説しています。高濃度の過酸化水素を添加することにより酸化ストレスを誘発するプロセスを詳しく説明しています。ROS曝露は、DNA鎖の切断とゲノムの不安定性を引き起こします。さらに、細胞タンパク質の酸化はその機能を損ない、脂質過酸化は膜の完全性を損ないます。このカスケードは、シトクロムcの放出とカスパーゼの活性化につながり、ニューロンのアポトーシスを引き起こします。...

マウス小脳顆粒ニューロンにおける活性酸素種誘発性ニューロン死のモデル化

ミクログリア生物学の成功の調査の一つの鍵は、CNS組織からの単離の間にex vivoでミクログリア免疫機能の維持である。蛍光イメージング、免疫細胞、および炎症誘発性刺激リポ多糖（LPS）とパム3 CSK 4（PAM）を用いたELISA次のミクログリアの活性化によって評価されるように、高純度と免疫機能細胞培養で回転振盪結果を経由してミクログリアを分離する。...

マウス新生児から保護免疫表現と機能皮質ミクログリアの分離

このプロトコルは、神経科学および神経薬理学研究のインビトロモデルとして使用される初代ニューロン培養物である培養小脳顆粒ニューロンにおけるフルオレセインジアセテート（FDA）およびヨウ化プロピジウム（PI）二重染色を使用してニューロン生存度を正確に測定する方法を記載する。...

小脳顆粒ニューロン培養におけるFluorescein Diacetate-Propidium Iodide二重染色を用いたニューロン生存率の評価

このプロトコルを記述する簡易分離し培養 6 7 日古い子犬、CGNs の損失のための効率的な伝達と機能の研究、益からプライマリ マウス脳顆粒ニューロン (CGNs) と nmda 刺激による神経毒性、モデリング法低カリウムによって誘導される細胞死、DNA...

神経細胞死とマウス プライマリ小脳顆粒ニューロンの変性をモデリング

成体マウス脳半球の異なる解剖領域からミクログリアを分離するためのプロトコルを提供し、続いて全長転写物の深い単一細胞RNAシーケンシングのための半自動化ライブラリ製剤を提供する。この方法は、健康と疾患におけるミクログリアの機能的不均一性を解明するのに役立ちます。...

ディープシングルセルRNAシーケンシングのための1つの成人マウス脳半球からの領域特異的ミクログリアの分離

ここでは、柱状磁気活性化細胞選別を利用して、脱髄疾患の動物モデルにおける原発性ミクログリアを単離および精製するためのプロトコルを提示する。...

脱髄の動物モデルにおける磁気活性化細胞選別によるマウス原発性ミクログリアの単離

学ぶL-ロイシンメチルエステルを用いた小脳顆粒細胞培養物からのミクログリア選択的枯渇法。神経変性疾患におけるミクログリアと神経細胞の相互作用を解明し、神経炎症の役割を理解する上で有用な手法です。

L-ロイシンメチルエステルを使用した小脳顆粒細胞培養物からのミクログリアの選択的枯渇

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