Name: 「プラグアンドプレイ」両親媒性ポリマー、有機染料及びアップコンバーティングナノ粒子を含む水分散性Nanoassembliesを作成する方法を (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-11-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 51 s
Description: 学ぶアップコンバーティングナノ粒子の合成と有機染料によるカプセル化により、水に分散可能なナノアセンブリを作成する方法。この簡便なプラグアンドプレイ法は、ナノテクノロジーと光化学の研究に応用可能です。

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この研究は、カナダの自然科学工学研究評議会（NSERC)、カナダ研究講座プログラム、サイモンフレーザー大学の支援を受けました。この作業は、Canada Foundation for Innovation(CFI)、British Columbia Knowledge Development Fund(BCKDF)、Simon Fraser Universityが支援する4D LABSの共有施設を利用しました。

NaYF 4 / Ybの3+ / ER 3+アップコンバーティングナノ粒子（UCNP）の1合成<ol><li>以下のように装置を設定します。 <ol><li>定期的な撹拌プレート上で250ミリリットル加熱マントルを置き、熱電対の上にマントを差し込みます。 </li><li>適切なクランプで加熱マントル上に磁気撹拌棒を備えた250mlの丸底フラスコを置きます。 </li><li>丸底フラスコの左首に空気アダプタを取り付け、プラスチック管とのシュレンクラインにこの空気アダプタを接続してください。 </li><li>丸底フラスコの右首にガラスアダプタを取り付け、ガラスアダプタ上に温度計アダプターを固定します。温度計アダプタを介してフラスコに温度プローブを挿入し、熱電対にこれを接続します。 </li><li>丸底フラスコの中央の首に蒸留ヘッドを取り付けます。蒸留ヘッドの上にストッパーを配置します。真空に続いて、凝縮器に頭を接続distillatイオンアダプタと50 mlの丸底フラスコ。プラスチック管を通してバブラーに真空蒸留アダプターを接続します。 </li></ol></li><li>エルビウムの酢酸イットリウム、酢酸1.17グラム（3.9ミリモル）、イッテルビウム、酢酸の0.439グラムおよび0.0727グラム（0.1ミリモル）を計量し、丸底フラスコ反応に置きます。 </li><li>メスシリンダーを使用してフラスコにオレイン酸30 ml及びオクタデセンの75ミリリットルを追加します。 </li><li>何のオレイン酸およびオクタデセンを反応フラスコの側面に貼り付けられていないことを確認するために、5mlのメタノールを使用して丸底フラスコ反応の側面を洗い流します。 </li><li>ダブルマニホールドシュレンクラインに反応フラスコを接続し、窒素ラインに接続された反応フラスコを維持するために、対応するバルブを回します。 </li><li> 、熱電対の電源を入れ、80℃に温度を設定し、徐々にこの温度にシステムを加熱します。 80℃で、すべての出発物質が溶解した後、加熱マントルを除去し、反応を可能に30℃に冷却します。 </li><li>温度が30℃に達したとき、蒸留ヘッドを脱いで左首の中から首に空気アダプタを切り替えるとストッパーで左首を閉鎖。ゆっくりと真空ラインに窒素ラインからシュレンクライン上でバルブを回して反応フラスコに真空をご紹介します。低沸点成分の全ては、この時点での反応から引き出されます。 </li><li>溶液をバブリングを停止したときに、5℃/分の速度で115℃まで温度を上げ。 </li><li>温度が115°Cに達すると、加熱マントルを除去し、50℃まで反応を冷却、その後、15分間この温度を保ちます。その後、すぐに中央の首と左ヘッドへの空気アダプタに蒸留ヘッドを再び取り付けることにより、元のフォームに設定切り替えます。 </li><li>水酸化ナトリウム0.74グラム（12.5ミリモル）を秤量し、冷却プロセス中にNH 4 Fの0.50グラム（20.0ミリモル）、及びそれらを溶解します超音波処理によるメタノール50mlインチ</li><li>超音波処理の後、丸底フラスコ反応への溶液を注ぎ、メタノール5mlでフラスコの側面を洗い流します。 </li><li> 50℃で30分間攪拌したソリューションを残します。 </li><li>メタノールを蒸留するために75℃に温度を上げます。 </li><li>必要なときに蒸留の間に、収集フラスコを空にします。蒸留の終了後、できるだけ早く、窒素保護下で300℃まで反応を加熱します。 </li><li>温度が300°Cに達すると、1時間この温度を維持します。必要に応じて、温度を維持するためにアルミホイルでセットアップを覆います。その後、熱源を取り外し、反応物を室温まで冷却させます。 </li><li>それを室温に冷却した後、50 mlの3遠心分離チューブ（50 mlチューブに、各チューブあたりおよそ35 mlの溶液）、及びトップアップチューブに均等に溶液を分割し、無水エタノールを用いてスケール。遠心全てのT彼は15分間3400×gでチューブ。遠心分離した後、UCNPsは白い沈殿物として、チューブの側で観察されるはずです。 </li><li>上清を捨て、ヘキサン（各チューブあたりヘキサン7.5 ml）にUCNPsペレットを再分散し、50ミリリットルの規模にエタノールでチューブをトップアップ。 15分間3400×gで再び遠心分離管。 </li><li>遠心分離が完了した後、上清を廃棄し、さらに使用するための CHCl 3 30mlに再分散固体UCNPs。 </li></ol>有機色素分子とアップコンバーティングナノ粒子を含む水分散性Nanoassemblies 2.組立<ol><li>磁気撹拌棒を備えたシンチレーションバイアルにの CHCl 3 3ml中のポリ（スチレン- ALT -無水マレイン酸）を25mg（0.0147ミリモル）（PSMA）を溶解します。この量は、複数の試験の後に最適化された量です。 </li><li>アップコンバート250μlの（47 mg / mlの）を追加するシンチにクロロホルムストック溶液をナノ粒子llationバイアル。 </li><li>バイアルに蓋をし、磁気撹拌プレート上に置き、そして2時間室温で溶液を攪拌。 </li><li>ポリエーテルアミン2070 160mgの（0.0773ミリモル）を計量し、し、CHCl 3 1ml中にそれを溶解させます。次に、ピペットを用いて、一度にシンチレーションバイアルにこの溶液を加えます。解決策は、PSMA上の無水物基と2070アミンポリエーテルの反応を示す淡黄色に変わります。 </li><li>室温で溶液を一晩攪拌し続けます。 </li><li> 1時間、得られた溶液を攪拌し、その後、有機色素分子の適切な量を測定一度にシンチレーションバイアル内に分注します。 <ol><li>サンプルTPP-NP（nanoassemblyポリマーシェル、テトラフェニルポルフィリンとアップコンバートナノ粒子を含む）については、直接シンチレーションバイアルにテトラフェニルポルフィリン1mgを追加します。 nanoassemblyポリマーシェル、ジアリールエテン分子とアップコンバートのナノ粒子を含む試料DAE-UCNP（についてs）は、それぞれジアリールエテン分子の量は、2×10 -7モルです。反応溶液中に2ジアリールエテン分子を追加します。 2ジアリ​​ールエテン分子のためのボリュームがある：DAE-1O（1.8ミリモル）、111μLおよびDAE-2O（1.6ミリモル）、125μlの。 </li></ol></li><li>乳白色の懸濁液が形成されるまで、バイアルを超音波処理後、シンチレーションバイアルに、0.001M NaOH水溶液（11≈のpH）の3ミリリットルを追加し、ロータリーエバポレーターを用いて減圧下での CHCl 3溶媒を除去します。 </li><li>ロータリーエバポレーターでバックバイアルを置き、懸濁液は透明な溶液になったまで慎重に残りの CHCl 3 を削除します。 </li><li>その後、25分間20,600×gで解決策を遠心、2 1.5ミリリットルの円錐遠心チューブにシンチレーションバイアルからの溶液を移します。 </li><li>上清を捨て、その後、2つのチューブ（チューブあたり1.5ミリリットル）に、脱イオンH 2 Oの3ミリリットルの合計を追加し、ペレットを再分散するためにチューブを超音波処理脱イオンH 2 O中</li><li> 25分間20,600×gで再び2つのチューブを遠心。 </li><li>上清を捨て、その後、2つのチューブ（チューブあたり1.5ミリリットル）に、脱イオンH 2 Oの3ミリリットルの合計を追加します。脱イオンH 2 O中にペレットを再分散するためにチューブを超音波処理</li><li>更なる試験のための最終的なサンプルを得るために、0.2μmのシリンジフィルターを通して水のナノ粒子分散サンプルをフィルタリングします。 </li></ol>

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</ol>

著者らは開示するものは何もない。

このプロトコルに従って合成されたナノ粒子は、約22.5 nmの中心20から25ナノメートルのサイズ分布を有する。26,27それらはα-NaYF 4ホスト格子構造を有する球状粒子として分類することができます。このプロトコルで2つの重要なステップがあります。 UCNP合成では、粒子サイズの狭い分布を確実にするために、可能な限り正確な加熱温度および時間を維持することが重要です。反応の開始時にランタニドイオンの添加と一緒にNaOH及びNH 4 Fの同時添加は、十分に分散サイズと良好な形態のナノ粒子を得られませんでした。 NaOHおよびNH 4 Fを添加した後、温度を完全に高沸点の溶媒混合物からメタノールを全て留去し、その後300℃まで温度を上昇させるための時間が十分に長い期間にわたって75℃に保持されていることを確認蒸留は、サイズOを制御する後できるだけ速くCFナノ粒子。24 水分散nanoassembliesを行う場合、それは時々UCNPs（ステップ2.2）、有機分子（ステップ2...

今日バイオイメージング剤の新しいタイプを開発する緊急の必要性が依然として存在します。多くの新規蛍光プローブが十分に文書化されている。1-6ただし 、画像の解像度の大幅な改善が課題である。7つの実用的な方法は、直接「光」の発光状態と「暗い」急冷状態との間の蛍光プローブを変調することです。 8-12この特定の方法は、誘導放出の枯渇（STED）顕微鏡13及び確率的光学再構築顕微鏡（STORM）などの技術を開発するために適用されている。14 蛍光を調節するための別のアプローチは、蛍光プローブと一緒に夫婦光応答性発色団である。15,16は、異性体の一方のみが、効率的なエネルギー移動アクセプターとして機能することができる2つの異性体間光応答発色団の切り替え、目からの蛍光の消光の制御を可能にしますフェルスター共鳴エネルギー移動（FRET）、および他の機構を介して電子プローブ。結果は、発光状態と異なる波長の光に光応答性発色団の暴露によって交互に行うことができる急冷状態の作成です。 光応答ジアリールエテン発色団は、可逆的に無色の開環異性体およびUVおよび可視光の照射により着色された閉環体との間で切り替えることができます。17〜19の熱2つの異性体の安定性と閉環体メイクの調整可能な吸収スペクトルジアリールエテン非常に良好な候補を制御FRETアクセプターとして。20-23ランタニドドープNaYF 4アップコンバージョンナノ粒子は、バイオイメージングのために有用である。24これらのナノ粒子は、近赤外光を吸収し、可視スペクトルのいくつかの領域の光を放出します。光応答ジアリールエテン発色団とナノ粒子を組み合わせることで蛍光変調の例としては、事前にされていますviously我々のグループによって報告された。25-27しかしながら 、各実施例に記載されたシステムは、より多様なシステムの開発を複雑にナノ粒子の表面にジアリールエテンを取り付けるために追加の合成修飾を必要としました。 本明細書において、我々は、自己組織化戦略を使用して水分散性有機色素分子と光応答アップコンバートナノ粒子を調製するための単純な「プラグ・アンド・プレイ」方式を示します。ポリマーの選択。 2070アミンポリ（スチレン- ALT -無水マレイン酸）とポリエーテルは、疎水性および親水性環境の両方を提供します。ポリマーの親水性領域は、水溶解性を維持するために重要であるのに対し、ポリマーヘルプの疎水性セクションでは、一緒に通常は水に不溶性の有機分子とアップコンバートナノ粒子を保持します。私たちは、第1の熱核法でアップコンバートナノ粒子の合成を実証します。そこで、ホを証明します有機分子とアップコンバートナノ粒子wのポリマーシェルの疎水性領域内にカプセル化されており、単純に便利なワークアップ手順に続いてアップコンバートナノ粒子、ポリマーと異なる有機色素分子の溶液を、共同攪拌して水性媒体中で安定したまま。また、外光照射を使用してアセンブリの蛍光発光を変調する方法を示します。私たちは、水分散性nanoassembliesが拡大していきますするには、この「プラグアンドプレイ」メソッドを使用しての範囲を期待しています。

<table><tbody><tr><td>酢酸イットリウム</td><td>Σ</td><td>326046</td><td>イットリウム(III)酢酸水和物</td></tr><tr><td>酢酸イッテルビウム</td><td>Σ</td><td>544973</td><td>イッテルビウム(III)酢酸水和物</td></tr> 酢<tr><td>酸エルビウム</td><td>Σ</td><td>325570</td><td>酢酸エルビウム(III)水和物</td></tr><tr><td>オレイン酸</td><td>Σ75096</td><td></td><td>分析標準液</td></tr><tr><td>オクタデセン</td><td>Σ</td><td>O806</td><td>テクニカルグレード</td></tr><tr><td>NaOH</td><td>シグマ</td><td>S5881</td><td>試薬グレード</td></tr><tr><td>NH4F</td><td>シグマ</td><td>216011</td><td>ACS 試薬</td></tr><tr><td>ポリ(スチレン共マレイン酸無水物)</td> <td>シグマ</td><td>442399</td><td>平均 Mn = 1700</td></tr><tr><td>ジェファミン 2070</td><td>ハンツマン</td><td>M-2070</td><td></td></tr><tr><td>バリアン キャリー 300</td><td>アジレント</td><td></td><td></td></tr><tr><td>JDSU NIR レーザー</td><td>JSDU</td><td>L4-9897510-100M</td><td>980 nm ダイオード レーザー</td></tr></tbody></table>

「プラグアンドプレイ」両親媒性ポリマー、有機染料及びアップコンバーティングナノ粒子を含む水分散性nanoassembliesを作成する方法を

A 'Plug and Play' Method to Create Water-dispersible Nanoassemblies Containing an Amphiphilic Polymer, Organic Dyes and Upconverting Nanoparticles

このプロトコルでは、まずランタニドをドープしたアップコンバーティングナノ粒子(UCNP)を合成する手順を記述します。次に、両親媒性ポリマーをその場で生成する方法を示し、調製したUCNPとさまざまな有機色素分子(ポルフィリンおよびジアリールレテン)をポリマーシェルを使用してカプセル化し、安定した水分散性ナノアセンブリを形成するプロトコルについて説明します。UCNPとジアリールエテン有機色素の両方を含むナノアセンブリサンプルは、興味深い光化学的および光物理学的特性を持っています。365 nmのUV照射により、ジアリールエテン基は視覚的な色の変化を受けます。試料に別の特定の波長の可視光を照射すると、色が薄くなり、試料は初期の無色状態に戻ります。また、980nmの近赤外光を照射すると、UCNPから可視光を放出します。サンプルの発光強度は、UV光と可視光を交互に照射することで調整できます。蛍光の変調は、サンプルの観察可能な劣化なしに、多くのサイクルで実行できます。この汎用性の高いカプセル化手順により、疎水性分子やナノ粒子を有機溶媒から水性媒体に移すことができます。このポリマーは、有機分子が水中での光化学的挙動を保存するのを助けるために、脂質様の微小環境を維持するのに役立ちます。したがって、この方法は、水分散性光応答性システムを準備するのに理想的です。近赤外光を使用してアップコンバーティングナノ粒子を活性化すると、より有害な紫外線の代わりに、より低エネルギーの光を使用して光反応を活性化することができます。

吸収スペクトルおよび発光スペクトルは、サンプルDAE-UCNPのために収集しました。吸収スペクトルは、閉じたジアリールエテン発色団とアップコンバートナノ粒子間のスペクトルの重複を比較するために使用されています。サンプル（TPP-UCNP両方DAE-UCNP）の写真は、水性相中の両親媒性ポリマーシェル内に配置された有機色素分子およびアップコンバートナノ粒子の成功したカプセル化を実証するために含まれていました。光化学および蛍光の変調はまた異なる光源とサンプルの照明によって示されました。 クロロホルム中ポルフィリンまたはUCNPsのアリコートを振った後でも積極的に水に添加されている場合、両方が有機層に（ 図2、A、B、DおよびE）のままなぜ&#39;のような溶解のよ ​​うな「化学理論は説明しています。しかし、「プラグアンドプレイ」を使用してカプセル化方式ポルフィリン及びUCNPsが生成されるの両方を含む（ 図1）、水分散性nanoassembly（TPP-UCNP）。それは、非水溶性の有機化合物であり、それは光線力学療...

有機色素分子とオレイン酸でコーティングされたアップコンバーティングナノ粒子は水溶性ではありません。このプロトコルは、有機色素分子の移動と、粒子を最初の疎水性溶媒から水へのアップコンバートを可能にする「プラグアンドプレイ」方法を説明しています。

「プラグアンドプレイ」両親媒性ポリマー、有機染料及びアップコンバーティングナノ粒子を含む水分散性Nanoassembliesを作成する方法を

In this protocol, we first describe a procedure to synthesize lanthanide doped upconverting nanoparticles (UCNPs). We then demonstrate how to generate ...

このプロトコルの全体的な目的は、アップコンバージョンナノ粒子の合成方法と、それらを有機色素分子でカプセル化して水分散性のナノアセンブリを調製する方法を実演することです。この手法は、ナノ粒子を有機溶媒から水性環境へどのように移行させるか、また水中でどのように光反応性を維持するかといった、ナノテクノロジーおよび光化学分野における疑問を解決できます。当社の独自の「log and play」法の主な利点は、その簡便さと汎用性にあります。このカプセル化の手順は、さまざまなナノ粒子および有機デバイスの組み合わせに適用可能です。アップコンバージョンナノ粒子と光活性分子を組み合わせることで、UV光による活性化を必要とするより広範な薬剤へのアプローチが可能になります。さらに、この手法は、発光ナノ粒子と有機染料分子間のエネルギー転移に関する知見を得る手段となります。一般的に、ナノ粒子のカプセル化には、特に相転移ステップにおいて細心の注意が必要です。例えば、添加順序や試薬比率を誤ると、容易に粒子の凝集を招く可能性があります。カプセル化技術には困難なステップがいくつか含まれているため、本手法を視覚的に提示することは極めて重要です。したがって、正確なタイミング、材料の量、および温度管理が必要です。まず、250 mLのヒーティングマントルを一般的な攪拌プレートの上に設置し、マントルを熱電対に接続します。マグネチックスターラーバーを入れた250 mLの丸底フラスコをヒーティングマントル上に設置してください。適切にクランプし、丸底フラスコの左側のネックにエアアダプターを取り付け、このエアアダプターをプラスチックチューブでシュレック管に接続します。次に、丸底フラスコの右側のネックにガラスアダプターを取り付け、そのガラスアダプターに温度計アダプターを固定します。温度計アダプターを通して温度プローブをフラスコ内に挿入し、これを熱電対に接続します。 round bottom flaskの中頸に蒸留ヘッドを取り付け、蒸留ヘッドの上部にストッパーをはめる。ヘッドにコンデンサーを接続し、続いて真空蒸留アダプターと50 milliliterのround bottom flaskを接続する。その後、プラスチックチューブを用いて真空蒸留アダプターをバブラーに接続する。次に、1.17 gのatrium acetate、0.439 gのitum acetate、および0.0727 gのerbium acetateを250 mLの丸底フラスコに入れます。さらに、30 mLのoleic acidと75 mLのesseneをフラスコに加えます。メスシリンダーを用いて、フラスコをダブルマニホールド・シュレンクラインに接続し、対応するバルブを回してフラスコを窒素ラインに接続したままにします。熱電対の電源を入れ、温度を80

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学ぶアップコンバーティングナノ粒子の合成と有機染料によるカプセル化により、水に分散可能なナノアセンブリを作成する方法。この簡便なプラグアンドプレイ法は、ナノテクノロジーと光化学の研究に応用可能です。

「プラグアンドプレイ」両親媒性ポリマー、有機染料及びアップコンバーティングナノ粒子を含む水分散性Nanoassembliesを作成する方法を

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