振動圧力潅流装置内のラット肝臓の脱細胞化のための手順

次の実験の全体的な目標は、ラット肝灌流脱細胞化の均質性を最適化する上での灌流根の役割を評価することです。これは、最初にカニューレ、新たに分離されたラット肝臓の門脈および肝動脈をカニューレすることによって達成される。第2のステップとして、肝臓は門脈または肝動脈の選択的灌流のための灌流装置に接続されます。

次に、呼吸中に発生する腹腔内圧力変化を模倣するために、振動する圧力変化が灌流チャンバーに適用されます。肝臓の微小灌流を最適化すると、最終的には、振動圧力条件下で肝臓動脈を介して灌流された肝臓は、巨視的観察と組織学的および生化学的分析によって評価されるように、より均質で迅速な脱細胞化を示します。門脈灌流脱細胞化のような既存の方法に対するこの技術の主な利点は、振動圧力条件を使用した動脈灌流がより均質な脱細胞化結果をもたらすことです。

ただし、この方法は、より短い時間で、減速技術についての洞察を提供できます。また、res solarization experiments、口腔外灌流セットアップ、臓器モデルなどの他のシステムにも適用できます。一般的に、この方法に不慣れな人は、赤肝臓の採取と動脈カニューレ挿入が複雑になる可能性があるため、苦労します。

肝臓を採取する前に、末梢G 20静脈カテーテルの1.5センチメートルの端に斜めの切り込みを入れます。カテーテルを3方向ストップコックに接続し、リンガー溶液で満たされた10ミリリットルのシリンジを使用してシステムを空気抜きします。次に、蝶カニューレの針を5ミリメートルの長さに切断し、瞬間接着剤を使用して5センチのチューブを針に固定します。

大きい方のチューブに2cmの長さのチューブを挿入し、このチューブも瞬間接着剤で固定します。この構造の上に別のチューブを滑り込ませ、所定の位置に接着してアバットメントを作成します。次に、リンガー溶液で満たされた5ミリリットルの注射器を使用して、新しく構築された動脈カニューレを収穫のために肝臓を修復します。

まず、湿潤原因包帯を使用して、麻酔をかけた成体ラットクランの内側と左の肝葉を横隔膜のドームの下に保持します。このとき、肝十二指腸靭帯と上部肝葉も露出させます。次に、2つのマイクロ鉗子とスプリングハサミを使用して、上部大網葉に付着した靭帯を慎重に解剖し、葉が可動するまでします。

次に、内側葉と左葉を所定の位置に保持します。濡れた綿棒を使用して、GREの湿布の下の葉と動物の左側にある胃を動かします。クランプでお腹を固定し、小さな勢いを解剖します。

次に、下部肝葉またはオトガイ肝葉を可動になるまで解剖し、バックハウスクランプを使用して葉を空洞に戻して十二指腸を保持し、十二指腸を左に動かしてヘルパ十二指腸靭帯を露出させます。総胆管を囲む。次に、脂肪組織と膵臓組織から胆管を解剖し、胆管分岐部から管を1.5センチメートル切断します。

周囲の脂肪組織からサル静脈を解剖し、胃十二指腸静脈を露出させます。次に、胃十二指腸静脈を6つのゼロ縫合糸で2回結紮し、静脈を2つの結び目に分割します。腹腔幹と総肝動脈を周囲の組織から解剖し、すべての動脈枝が明らかになるまで解剖します。

すべての動脈を解剖した後、右腎臓と右外側肝葉の間の下大静脈を囲み、後腹膜腔から静脈を解剖します。腹腔体幹をたどって大動脈を露出させます。次に、後腹膜脂肪組織を解剖し、腹腔幹の上の大動脈を囲みます。

次に、1ミリリットルの生理食塩水に1000単位のヘパリンを下大静脈に注入します。切開部を綿パッドで覆い、ヘパリンが効くまで1〜2分待ちます。次に、鉗子で大動脈を囲み、腎臓から遠位に大動脈と下大静脈を解剖します。

門脈カニューレを配置するには、遠位門脈に魚の口を切開し、鉗子で切開を開きます。次に、門脈をカニューレにし、肝臓が非人間化するまで20ミリリットルのリンガー溶液で肝臓を洗い流します シルクシックスゼロリガチャーを使用してカニューレを所定の位置に固定します。動脈カニューレを配置するには、大動脈セグメントが後腹膜腔から解放されるまで、腹腔幹の上にある大動脈を解剖します。

大動脈セグメントを縦方向に切断して大動脈パッチを生成し、自作のカニューレを静的ホルダーに挿入します。次に、2つの鉗子を使用して大動脈パッチをカニューレに滑り込ませ、カニューレにシルクシックスゼロ縫合糸で肝動脈を結紮します。橋台にパッチを固定して脱細胞化を行う 門脈カニューレの三元ストップコックを関連するリアクターアクセスにリンクし、動脈カニューレを動脈アクセスに接続し、システムに空気が入らないように注意します。

次に、マスクを圧力分配チャンバーに接続し、チャンバーを原子炉に接続します。圧力アプリケーションを開始します。その後、脱細胞化を開始します。

肝臓を1%トリットン×100と毎分5ミリリットルの割合で融合させます。灌流装置の流出による老廃物の排出を許容し、灌流チャンバー内の液面を一定に保ち、灌流された肝臓の上に保ちます。90分後、界面活性剤を力静脈を介して灌流した1%SDS肝臓に変更すると、プロセス中およびプロセス中に肉眼的に見える残りの細胞による脱細胞化を示す均一な解明が示され、肝動脈を介して灌流された肝臓は、目に見える残りの細胞が少なく、より均質な脱細胞化の経過を示します。

振動圧力条件を適用して肝臓を灌流した場合、残りの細胞は見えませんでした。灌流に関係なく。脱細胞化肝マトリックスの根組織学的評価は、肝動脈を介して灌流された肝臓における肉眼的所見を実際に支持しています。

残りの細胞は、それらが振動圧力条件下で灌流されたかどうかにかかわらず、門脈を介して灌流された肝臓は観察されませんが、これらの条件はこれらの肝臓の残りの細胞量を減少させるものの、振動圧力条件下で灌流されたとしても、残りの細胞のゾーンを示しますが、これらの条件はこれらの肝臓の残りの細胞量を減少させますが、脱細胞化条件に関係なく、肝臓の細胞外マトリックスの保存に注意してください。肝臓マトリックスの乾燥重量あたりのDNA含有量も、天然の肝臓と比較して、すべての実験グループで減少しました。ただし、その差は、振動圧力条件下でのグループの灌流でのみ統計的に有意でした。

さらに、脱細胞化した肝臓マトリックスの腐食キャスティングにより、灌流プロセス中の肝臓の微小解剖学的構造の保存が確認されました。このビデオを見た後、再現性のある均質な減速のために赤い肝臓をカニューレと灌流する方法を十分に理解しているはずです。Triton X 100やSDSでの作業は非常に危険である可能性があるため、この手順を実行して手袋を着用するなどの注意点も講じる必要があることを忘れないでください。