Delivery of Proteins, Peptides or Cell-impermeable Small Molecules into Live Cells by Incubation with the Endosomolytic Reagent dfTAT

Kristina Najjar; Alfredo Erazo-Oliveras; Jean-Philippe Pellois

doi:10.3791/53175

エンドソーム溶解試薬dfTATとのインキュベーションによって生細胞へのタンパク質、ペプチドまたは細胞不...

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Bioengineering

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Delivery of Proteins, Peptides or Cell-impermeable Small Molecules into Live Cells by Incubation with the Endosomolytic Reagent dfTAT

エンドソーム溶解試薬dfTATとのインキュベーションによって生細胞へのタンパク質、ペプチドまたは細胞不浸透性小分子の送達

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10:30 min

September 2, 2015

DOI: 10.3791/53175-v

Kristina Najjar¹, Alfredo Erazo-Oliveras¹, Jean-Philippe Pellois¹

¹Biochemistry and Biophysics,Texas A&M University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

私たちは、エンドサイトーシスオルガネラをリーキーにする試薬との簡単な共インキュベーションプロトコルにより、タンパク質と細胞不透過性の小分子を培養された哺乳類細胞に送達する方法を説明します。

次の実験の全体的な目標は、細胞に損傷を与えることなく非常に効率的に細胞に浸透できる試薬である二量体、蛍光tat、またはdf tatを使用して高分子を生細胞に送達することです。これは、最初に送達剤を生成して精製することによって達成されます。第2のステップとしてのDfta。

Dftaは、目的の高分子カーゴの存在下で37°Cで1時間細胞とインキュベートされ、df tatはエンドサイトーシス小胞内のカーゴの取り込みを誘導します。小胞は初期のエンドソームに成熟し、最終的にDFタットが細胞の細胞質空間にカーゴを放出できる後期エンドソーム段階に達します。次に、デッタと目的のカーゴの送達効率を評価するために、細胞を蛍光顕微鏡で画像化します。

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