Name: 前立腺癌患者の発生は、循環腫瘍細胞からの異種移植モデルを派生します (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-10-20T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 3 s
Description: 学ぶ前立腺癌患者由来異種移植モデルの作成法。末梢血から循環腫瘍細胞を分離し、フローサイトメトリーで選別して免疫不全マウスに移植します。この手法は前立腺がんの分子特性解析と新規バイオマーカー開発に有用です。

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>jove_content<マウントサイナイ医療センターのフローサイトメトリー共有リソースのジョルディ・オチャンド博士に感謝します。フローサイトメトリー解析の支援に対して。マウントサイナイ医療センターの顕微鏡共有リソース施設のRumana Huq博士のイメージング支援に感謝します。著者は、このプロジェクトでの支援についてTJマーテル財団に感謝します。

このプロトコルは、制度の研究倫理委員会から承認を得て、私たちの施設で行われ、人間の福祉のためにすべての、機関、国、国際的なガイドラインに準拠しているされています。 進行前立腺癌患者からの末梢血の1コレクション注：転移性前立腺癌患者を選択します。書面による患者の同意を得て、分離時の年齢と前化学療法とホルモン治療など、患者の臨床的特徴を、記録します。転移性疾患を有する患者は、潜在的に、末梢血中のCTCの最高濃度を持っています。 <ol><li>インフォームドコンセントの後、適切な治験審査委員会は、プロトコルを承認の下に血液サンプルを収集します。作業中のラテックス手袋、白衣を着用してください。 </li><li> 25のG翼状針とチューブは、針ホルダに接続します。の面積をきれいにアルコール綿を使用して上腕と前腕の間の肘正中静脈は、その後、患者の上腕に止血帯を適用します。 </li><li>肘前静脈に翼状針を挿入し、収集を開始するために、ニードルホルダーに採血管を押してください。凝固を防ぐために、エチレンジアミン四酢酸（EDTA）を含有する回収チューブ内の血液の約10 mlのを集めます。 </li><li>患者から翼状針を外し、1分間静脈穿刺部位の上に滅菌ガーゼパッドで圧力をかけます。滅菌包帯でカバーサイト。 </li></ol>単核細胞の単離2。 注：ステップ1から採取した血液は、単核のCTCに加えて、末梢血単核細胞（PBMC）（例えば、リンパ球および単球）が含まれています。 <ol><li> 5ミリリットル血清学的ピペットで50mlポリスチレンコニカルチューブにピペットの全血を1にハンクス平衡塩溶液（HBSS）を追加：1の比率。静かにピペット混合物を均質化します。 </li><li>空の50 mlのポリスチレンコニカルチューブに低速密度勾配遠心分離により、血液成分を分離するために、商業的に調製した溶液（フィコール - パック）を15mlを加えます。 </li><li>静かに明確なトップ層を形成するために、ステップ2.2からポリスチレンチューブに、ステップ2.1から、全血およびHBSS混合物をピペット。溶液の混合を最小限にするために、最も低い設定に設定ピペット、これは、効率的な分離を確実にします。 </li><li> RT（25℃）で30分間、400×gで遠心分離します。分離後の溶液の混合を防止するために、最も低い設定に設定減速度。加速度を任意の速度に設定してもよいです。 </li><li>遠心分離した後、チューブの底の上部と分離ソリューションにプラズマとの間の層に挟まPBMCおよびCTCの薄い白灰色のストライプを識別します。 </li><li>プラスチック製トランスファーピペットを用いて50mLのポリスチレンチューブにステップ2.5でホワイトグレーストライプから細胞を収集します。 </li><li> PBMCおよびCTCをとCで50mlポリスチレンコニカルチューブにHBSSを追加10分RTは洗浄するために、400×gで再びentrifuge。 </li><li>洗浄するために、室温で3分間400×gで再びHBSSと遠心50mlの液体再懸濁ペレットをデカントします。 </li><li>上清を捨て、赤血球溶解緩衝液5mlで残ったペレットを再懸濁し、室温で5分間この溶液をインキュベートします。 </li><li> RTで3分間、400×gでの遠心分離によって赤血球溶解緩衝液を除去します。 </li><li>上清を捨て、1mlのPBS 1Xでペレットを再懸濁前に抗体染色にブロックするために、10％ウシ胎児血清（FBS）を補充しました。 </li></ol>蛍光活性化細胞選別（FACS）のためのCD45-FITC抗体で染色3.単核細胞<ol><li>血球計数器または自動細胞カウンターを用いて（ステップ2.11）から実行可能（トリパンブルー陰性）細胞の数を定量化します。 （10％FBSを含むPBS 1Xで）1×10 6細胞 / mlの懸濁液を調製し、1時間氷の上に置きます。 </li><li>定量化を配布2つのチューブに前のステップからの細胞懸濁液。制御およびCD45染色などのラベルチューブ。 </li><li> 250：コントロールチューブでは、1の希釈でIgG1κ型-FITC（2.5μgの/ ml）を追加します。 CD45染色チューブでは、1の希釈でCD45 FITC（2.5 / mlの）結合一次抗体を追加します。250、30分間氷上で細胞懸濁液をインキュベートします。 CD45抗原の標識は、造血細胞を排除するために使用されます。 </li><li> 4℃で3分間400×gで細胞を遠心分離し、上清を捨てます。 </li><li>滅菌1×PBSで各ペレットを懸濁させることによって、細胞を2回洗浄し、4℃で3分間、400×gで遠心分離し、10％FBSを補充しました。 </li><li> 10μg/ mlの濃度の4 &#39;、6-ジアミジノ-2-フェニルインドール（DAPI）を含むPBS 1×1mlの溶液中に細胞を再懸濁。 </li><li> 12ミリメートル×75ミリメートルのポリスチレン管に35μmのストレーナーキャップを通して最終的なソリューションをフィルタリングします。 </li></ol>前立腺CTCの4単離することによってFACS 注：ライブCD45負のCTCを収集するために、フローサイトメーターを利用しています。 <ol><li> 「コントロールを。」と表示されたチューブからの細胞を使用して補償制御を設定</li><li>破片や、適切な前方散乱および側方散乱パラメータを使用して、細胞のクラスターを除外ゲートを作成します。 </li><li>ラベルされたチューブから、細胞懸濁液を用いて、FITCゲートを確立する「CD45-FITC。」 </li><li>パシフィックブルーチャンネルを用いたゲート実行可能（DAPI陰性）細胞。 </li><li>ロズウェルパーク記念研究所（RPMI）1640の2ミリリットルを含む滅菌15ミリリットルポリスチレンコニカルチューブにCD45陰性集団を収集し、10％FBSを補充しました。 </li><li> 10％FBSを補充したRPMI500μlの - 遠心3分間400×gでソートされた前立腺腫瘍細胞懸濁液は、その後、200でペレットを再懸濁します。 </li></ol>マウスおよび異種移植片の成長のモニタリングにCTCの5インジェクション注意：制度的動物管理委員会により承認されたプロトコルに準拠したすべての動物の手順を実施します。このプロトコルは、すべての関連する規制や制度機関、規制やガイドラインに従ってやコンプライアンスに私たちの動物ケア委員会によって承認された特定の動物を使用する議定書の下で私たちの施設で行われています。 <ol><li>氷上で1比と場所：1で、細胞外マトリックスとソートされた前立腺腫瘍細胞懸濁液を混ぜます。 </li><li>酸素を1L /分で5％（v / v）の吸入イソフルランを供給するチャンバで皮下移植する前に、マウスを麻酔。マウスでは、角膜やつま先反射の消失を確認することにより、適切な麻酔を確認してください。 </li><li> 25 G針および1mlシリンジを用いて、8~10週齢の雄の免疫不全マウスの両方の上部側面に前立腺腫瘍細胞および細胞外マトリックスの細胞懸濁液を皮下の250μLを注入します。注入量をiとして関係なく、CTCの濃度の250μLを注入mportant値。マウスの最大のSQ投与はわずか1 mlです。 &#160;</li><li>皮下結節性密度の成長のためのマウスの注射部位の毎週触診を行うことによって、および週2回、マウスの体重を測定することにより、マウスを監視します。 </li><li>腫瘍の大きさは、分子分析および連続継代のために十分な腫瘍組織を確実にするために、以上0.5 cmであり、最大直径が1cm未満である場合に頸椎脱臼および収穫皮下ヒト前立腺癌異種移植片に続く二酸化炭素窒息によりマウスを安楽死させます。無腫瘍にもかかわらず、苦痛または15％の体重減少の徴候を有するマウスを安楽死さが触知可能です。 </li></ol>

<ol><li>Hidalgo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+xenograft+models%3A+an+emerging+platform+for+translational+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+discovery%22%5BJournal%5D)">Patient-derived xenograft models: an emerging platform for translational cancer research.</a> Cancer discovery. 4, 998-1013 (2014).</li>
<li>Siolas, D., Hannon, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+tumor+xenografts%3A+transforming+clinical+samples+into+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+research%22%5BJournal%5D)">Patient-derived tumor xenografts: transforming clinical samples into mouse models.</a> Cancer research. 73, 5315-5319 (2013).</li>
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<li>Quintana, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+tumour+formation+by+single+human+melanoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Efficient tumour formation by single human melanoma cells.</a> Nature. 456, 593-598 (2008).</li>
<li>DeRose, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+grafts+derived+from+women+with+breast+cancer+authentically+reflect+tumor+pathology%2C+growth%2C+metastasis+and+disease+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Tumor grafts derived from women with breast cancer authentically reflect tumor pathology, growth, metastasis and disease outcomes.</a> Nature. 17, 1514-1520 (2011).</li>
</ol>

著者らは、競合する金銭的利益はないと宣言している。

この原稿は、CTCのから前立腺癌PDXモデルを生成するための方法を説明します。 PDXを生成するためのCTCの使用 既存の方法と比較した場合のモデルはいくつかの潜在的な重要な利点を有します。まず、末梢血からのCTCのアクセスコレクションは、異なる疾患段階で同じ患者からの実験モデルを生成することができます。第二に、血液採取は、腫瘍細胞の収集のための外科的処置を必要とする既存の方法と比較すると、腫瘍細胞を単離するために安全で安価な方法を表します。 CTCの濃縮の複数の方法は、しかし多くは資金とリソース制限のために、すべての研究室にアクセスすることはできません記載されています。私たちは、FACS、多くの研究室のために、便利な手頃​​な価格でアクセス可能な方法論を使用することに生かすことができ、私たちの研究室でのアッセイを開発しようとしました。この方法の潜在的な制限があります高い腫瘍負荷を有する患者にこのプロトコルの使用が制限される可能性が希少細胞の検出のための不十分な感度。上皮細胞の物理的または生物学的特性を利用するいくつかの追加の技術が上にこの制限を...

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Veronica Rodriquez-Bravo
to:
Veronica Rodriguez-Bravo

A correction was made to Generation of Prostate Cancer Patient Derived Xenograft Models from Circulating Tumor Cells.

Erratum: Generation of Prostate Cancer Patient Derived Xenograft Models from Circulating Tumor Cells

患者由来の異種移植片は、癌の研究のために使用ますます人気の実験モデルです。彼らは、バイオマーカーおよび生物学的経路の特性、薬効の前臨床評価、およびパーソナライズされた癌治療のための1,2のアバターを作成するために使用することができます。以前は、他の研究グループは、免疫不全マウス1に単一の腫瘍細胞懸濁液または全腫瘍外植片を移植または注入のいずれかによってPDXモデルを開発しました。これらのPDX モデルは高価でもあると医原性罹患のリスク増加に患者を公開し、外科的処置を受けている患者からの新鮮な固形腫瘍、悪性腹水や胸水の外科的コレクションを必要とします。 癌研究における重要な最近の開発は、循環腫瘍細胞の検出、単離および特徴付けされています。これらの腫瘍細胞は、原発腫瘍塊から脱出し、循環に入ります彼らは転移や再発に重要な役割を果たしている場合には、癌の最も一般的な原因は、死亡率3を関連します。いくつかの固形腫瘍タイプからCTCの評価および特徴付けは、診断、予後、および残留疾患3を監視するための臨床情報を提供しています。物理的特性は、バイオマーカーの発現、またはCTCの機能的特徴のいずれかに依存する現在使用されている様々なアプローチは、効率的に4のCTC を単離することができます 。既存のマクロスケールCTCの単離方法は、密度勾配遠心分離、フィルター孔と表面分子に対する物理的な分離と濾過を含みます。最も広く使用されているCTCの分離方法は、CTCの抗体ベースのキャプチャに基づいています。細胞表面マーカーの正と負の両方の選択は、末梢血からのCTCを単離するために使用することができます。末梢循環中のCTCのための正の選択は、一般的に上皮マーカー （例えば、EpCAMを）を使用しますCTCのではなく、造血細胞上に発現再度。この方法の欠点は、転移の可能性を持つのCTCは、多くの場合、上皮-間葉3上皮表面マーカーを下方制御の移行（EMT）、受けているということです。白血球の正常な細胞集団を枯渇させる、転移の可能性、造血表面マーカー、CD45を用いた負の選択方法でのCTCを単離するために5を使用することができます。 前立腺癌は、最も一般的に診断される癌、男性6における癌関連死の主要な原因です。腫瘍進行及び攻撃性のメカニズムは完全には理解されていないので、発生および前立腺癌の分子不均一性を再現実験モデルの特徴は、かなりの関心があります。前立腺癌のPDXモデルがされています immunocomにヒト前立腺癌細胞の移植によって以前に生成されましたマウス7,8を約束しました。しかし、このようなモデルの生成は、主に疾患の無痛の性質に起因する免疫不全マウスへの前立腺癌の低い生着率によって妨げられてきました。最近、のCTCは、乳癌9、肺がん10および前立腺癌11 PDXモデルを生成するために使用されてきました。これらの概念実証研究では、外科的なサンプル収集の必要性とは無関係に、PDXモデルを生成する可能性を紹介しました。この記事では、具体的にこの新規実験モデルを生成するための方法について説明します。

<table><tbody><tr><td>ロズウェルパークメモリアルインスティテュート(RPMI)1640</td>ギ<td>ブコライフテクノロジーズ</td><td>11875-093</td><td></td></tr>ウ<tr><td>シ胎児血清(FBS)</td><td>ギブコライフテクノロジー</td><td>ズ10437-028</td><td></td></tr>ペ<tr><td>ニシリンストレプトマイシン</td><td>ギブコライフテクノロジー</td><td>ズ15140-122</td><td></td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水(PBS)</td><td>コーニングセルグロ</td><td>21-031-CM</td><td></td></tr><tr><td>35&マイクロ;m Cell Strainer</td><td>BD Falcon</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>50 ml ポリスチレン コニカルチューブ</td><td>Crystalgen</td><td>23-2263</td><td></td></tr><tr><td>赤血球溶解バッファー</td><td>Sigma</td><td>R7757</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Invitrogen</td><td>d3571</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll-Paque Plus</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1440</td><td></td></tr><tr><td>12 mm x 75 mm ポリスチレンチューブ セルストレーナーキャップ付き</td><td>BD Falcon</td><td></td><td></td>352235</tr><tr><td>BDバキュテナーラベンダー採血チューブ(EDTA</td><td></td><td></td><td></td>付き</tr><tr><td>) BDウィングド採血セット(プッシュボタン付き) リトラクトニードル 23ゲージ</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BDバキュテナー ワンユースニードルホルダー</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>使い捨てラテックス止血帯</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ラテックスまたは非ラテックス手袋</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>アルコール綿棒</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>2 x 2綿ガーゼパッド粘着</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>包帯</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>25G針</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1ml注射器</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

前立腺癌患者の発生は、循環腫瘍細胞からの異種移植モデルを派生します

Generation of Prostate Cancer Patient Derived Xenograft Models from Circulating Tumor Cells

患者由来異種移植片(PDX)モデルは、がん研究で人気を集めており、前臨床の薬物評価、バイオマーカーの同定、生物学的研究、および個別化医療戦略に使用されています。循環腫瘍細胞(CTC)は、腫瘍転移において重要な役割を果たしており、いくつかの腫瘍タイプの患者から単離されています。最近、CTCは乳がんおよび前立腺がんのPDX実験モデルを生成するために使用されています。本稿では、当グループが開発したCTCから前立腺がんPDXモデルを生成する方法について詳述しています。従来のPDXモデルと比較した場合のこの方法の利点は、外科的サンプル収集からの独立性と、さまざまな疾患段階での実験モデルの生成です。密度勾配遠心分離とそれに続く赤血球溶解およびCD45陽性単核細胞のフローサイトメトリーの枯渇は、転移性疾患の患者から収集された末梢血サンプルからのCTCを濃縮するために使用されます。次に、CTCを免疫不全マウスに注射します。その後生成された異種移植片は、機能研究に使用したり、分子特性評価のために回収したりできます。この方法の主な制限は、CTC濃縮に使用されるネガティブセレクション法です。このような制限にもかかわらず、CTCからPDXモデルを生成することで、前立腺がんの研究に適用できる新しい実験モデルが得られます。

このプロトコルは、単離されたCD45陰性の前立腺癌のCTCからPDXモデルの生成につながります。我々のプロトコルで使用されるネガティブ選択法に基づいて、それはDAPI染色を用いて死細胞を排除することが必要です。フローサイトメトリーにより検出されたCD45陰性細胞の割合は可変であり、患者（ 図1A）の腫瘍量に依存します。白い矢印（ 図1B）に示されるように、CD45及びDAPI（細胞核を識別するために）を使用してソートされていない細胞の免疫蛍光染色は、CD45陰性細胞を明らかにする。 図1Cに 、皮下結節密度は、マウスの両脇腹に見ることができます。各結節密度は、異種移植片の成長を示し、それは、マウスの背側筋から突出し、質感でより強固であるように、健康な組織から区別できるように理解することができます。注入および異種移植片の開発との間の時間間隔はpatieのCTC負担に応じて大きく異なる場合がありますNTサンプル、移植された細胞の数と、CTCの生物学的攻撃性。 CTCから生成された前立腺PDXは、ヘマトキシリンおよびエオシン染色によって示され...

この原稿は、循環腫瘍細胞(CTC)から前立腺癌患者由来異種移植片(PDX)を生成するために使用される方法を詳述しています。CTCからのPDXモデルの生成は、前立腺がんを研究するための代替実験モデルを提供します。最も一般的に診断される腫瘍であり、男性の癌による死亡原因として多い。

Patient derived xenograft (PDX) models are gaining popularity in cancer research and are used for preclinical drug evaluation, biomarker identification, ...

本プロトコルの全体的な目的は、循環腫瘍細胞から前立腺癌の患者由来異種移植片（PDX）を作製することです。これは、まず進行前立腺癌患者から末梢血を採取することによって達成されます。第2ステップとして、循環腫瘍細胞を含む血液単核細胞画分を分離します。次に、単核細胞をCD 45 ZI抗体で染色します。フローサイトメトリーを用いて循環腫瘍細胞を選別し、その後、免疫不全マウスに細胞を注入します。結果として、前立腺癌患者の末梢血からフローサイトメトリーにより分離した循環腫瘍細胞を注入することで、前立腺癌キセノグラフトが作製されることが示されました。この手法は、前立腺がんの分子生物学的特性の解析や新規バイオマーカーの開発に使用できる新しい実験モデルを構築することで、前立腺がん研究における重要な課題の解決に寄与します。手順のデモンストレーションを行うのは、当研究室の学生であるWilliamsと、マウントサイナイの腫瘍学部門の研究員であるOmadaです。まず、末梢血中に高濃度の循環腫瘍細胞が存在する可能性がある、転移性前立腺がんの選択した患者から全血を採取します。10 mLのセラロジカルピペットを使用して、全血を50 mLポリスチレン製コニカルチューブに移し、そこにHank's平衡塩溶液を加えます。1:1の比率で、混合液を均質化させるために穏やかにピペッティングします。次に、空の50 mLポリスチレン製コニカルチューブに、FIコールパック溶液を15 mL加えます。希釈した全血20 mLを、溶液の上に明確な上層を形成させるため、ピペットの最低設定を用いて穏やかに加えます。次に、チューブを 400 Gs で 30 分間遠心分離します。室温で行い、分離後の溶液の混和を防ぐため、遠心分離機の減速設定を最低に設定してください。遠心分離後、血漿の上層と分離液の間に挟まれた、末梢血単核細胞および循環腫瘍細胞からなる薄い白灰色の一層を確認します。チューブの底部にある白灰色の帯状部分から細胞を慎重に回収し、50 mLのポリスチレンチューブに移します。次に、プラスチック製転送ピペットを用いて、単離した細胞にHank's Balance Salt Solutionを加え、全量を10 mLにします。混合物を室温で400 Gsで10分間、再度遠心分離します。細胞を洗浄するため、上清を除去し、この洗浄工程をもう一度繰り返します。2回目の洗浄後、上清を捨てます。残ったペレットを5 mLの赤血球溶血バッファーに懸濁し、室温で5分間インキュベートします。次に、サンプルを室温で400 Gsで3分間遠心分離し、上清を捨てることで溶血バッファーを除去します。最後に、染色の前に、ペレットを10%胎児牛血清を添加したPBS 1mLで再懸濁します。ヘモサイトメーターまたは自動細胞カウンターを用い、標準的なトリパンブルー排除法で生存細胞数を定量します。次に、10%FBS含有PBSを用いて細胞を1mLあたり100万個に希釈し、氷上で1時間保持します。非特異的結合をブロックするため、細胞懸濁液を2本の別々のチューブに分配します。一方のチューブをコントロール細胞用、もう一方をCD 45染色細胞用としてラベル付けします。コントロールチューブに、最終濃度が10 ng/mLになるよう、1:250に希釈したIgG one Kappa Ziを加えます。CD 45染色チューブに、10 ng/mLの同一濃度でCD 45 ZI結合一次抗体を加え、細胞懸濁液を氷上で30分間インキュベートします。次に、4 °Cで400 Gsにて3分間遠心分離し、上清を捨てます。各ペレットを10% FBS添加滅菌PBSに懸濁させ、4°Cで400 Gsで3分間遠心分離することを2回繰り返し、細胞を洗浄します。洗浄後、10 µg/mLのDAPI染色液を含むPBS溶液1 mLに細胞を再懸濁します。細胞の凝集塊やデブリを除去するため、最終溶液を35 µmストレーナーキャップを用いて12 mm × 75 mmポリスチレンチューブにろ過します。次に、付属のテキストプロトコルに従い、フローサイトメトリー（FACS）を用いて懸濁液からCD 45陽性細胞および死細胞を除去します。ソートした前立腺腫瘍細胞懸濁液を細胞外マトリックスタンパク質と1:1の比率で混合し、混合物を氷上に置きます。続いて、施設ガイドラインに従い、1 L/minの酸素気流下で5%のイソフルランを吸入させ、8〜10週齢の雄の免疫不全マウスを麻酔します。マウスの角膜反射および趾反射が消失したことを確認し、適切な麻酔状態であることを担保します。25ゲージの針と1mLシリンジを用いて、細胞懸濁液を250 µL分吸い上げます。次に、この細胞外マトリックス細胞懸濁液の全量を、マウスの両側上部側腹部に皮下注射します。週に一度、注射部位を触診して皮下結節状密度の増大を確認し、腫瘍をモニタリングしてください。本プロトコルで使用されるネガティブセレクション法に基づき、DAPI染色を用いて死細胞を除外する必要があります。ここで示すように、生存細胞のうちCD 45陰性細胞が占める割合は、患者の腫瘍量によって変動しますが、CD 45陽性細胞からは容易に分離できます。適切なゲーティングを行い、前立腺腫瘍細胞懸濁液を移植すると、マウスの両側腹部に皮下結節状の硬結が認められるようになります。各結節状の密度はゼノグラフトの成長を示しており、マウスの背部筋肉から突出していることや、質感が硬いことから、正常組織とは明確に区別できます。循環腫瘍細胞から作製された患者由来ゼノグラフトモデルは、ヘマトキシリン・エオジン染色、およびアンドロゲン受容体や前立腺特異的膜抗原などの前立腺特異的細胞マーカーを用いた免疫組織化学染色により、ヒトの前立腺腫瘍を再現しています。ゼノグラフトを作製した後、遺伝子またはタンパク質発現プロファイリングなどの他のプロトコルを実施することで、前立腺がんの悪性度に寄与する細胞および分子メカニズムを探索することが可能です。

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胃癌患者由来異種移植片モデルおよび原発細胞株の確立

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構造DNA改変解析と患者由来異種移植片を用いたがんの標的治療の試験

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患者由来前立腺癌オルガノイドの確立と維持:詳細な実験プロトコル

学ぶ前立腺癌患者由来異種移植モデルの作成法。末梢血から循環腫瘍細胞を分離し、フローサイトメトリーで選別して免疫不全マウスに移植します。この手法は前立腺がんの分子特性解析と新規バイオマーカー開発に有用です。

前立腺癌患者の発生は、循環腫瘍細胞からの異種移植モデルを派生します

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