Employing Digital Droplet PCR to Detect BRAF V600E Mutations in Formalin-fixed Paraffin-embedded Reference Standard Cell Lines

Nirmal Rajasekaran; Myung Ryurl Oh; Sung-Su Kim; Si Eun Kim; Young Deug Kim; Hyun-Jeung Choi; Bohyun Byun; Young Kee Shin

doi:10.3791/53190

ホルマリン固定パラフィン包埋参照標準細胞株にBRAF V600E変異を検出するデジタルドロップレットPCRを採用

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Biology

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Employing Digital Droplet PCR to Detect BRAF V600E Mutations in Formalin-fixed Paraffin-embedded Reference Standard Cell Lines

ホルマリン固定パラフィン包埋参照標準細胞株にBRAF V600E変異を検出するデジタルドロップレットPCRを採用

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10:16 min

October 8, 2015

DOI: 10.3791/53190-v

Nirmal Rajasekaran¹, Myung Ryurl Oh³, Sung-Su Kim¹, Si Eun Kim³, Young Deug Kim⁴, Hyun-Jeung Choi², Bohyun Byun², Young Kee Shin^1,2

¹Research Institute of Pharmaceutical Science, Department of Pharmacy, College of Pharmacy,Seoul National University, ²The Center for Anti-Cancer CDx, N-Bio,Seoul National University, ³ABION CRO, ⁴ABION Inc., R&D Center

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

このビデオの目的は、臨床の場で珍しい変異を検出するために、ホルマリン固定パラフィン包埋（FFPE）参照標準細胞株およびデジタル滴PCR（ddPCR）分析から、自動化されたDNAの抽出を実行する方法を実証することです。 FFPEサンプルにおける変異を検出することはFFPEサンプルでddPCRの臨床的有用性を示します。

この実験の全体的な目標は、組織調製システムを使用して、形式的および固定的なパラフィン包埋参照標準細胞株からヒトゲノム、DNAを単離し、続いてデジタル液滴を使用してゲノムDNAのbra V 600 E変異を分析することです。P-C-R-D-D-P-C-R RA配列変異の存在と存在量、低テンプレートコピー数での核酸の定量など、分子腫瘍学における重要な質問に答えるのに役立ちます。この方法は、標準的な細胞株からAEPで実証されていますが、目的のDNAを単離するための条件を最適化するためだけに、他のバイオサンプルにも使用できます。

この組織調製システムは、他の手動手順と比較して、4時間以内に汚染物質を含まないヒトゲノムDNAの最大48サンプルを分離するために使用できます。このシステムは、磁気ビーズを使用しているため、準備にやや高価です。しかし、それはより安全で製造され、高品質のクリージ圧力を実証するのは、私たちの研究室のssu Aと技術者です。

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