ALSのSOD1-G93Aマウスモデルにおける疾患進行を評価するためのクイック表現型の神経学的スコアリングシステム

この手順の全体的な目標は、単純な表現型神経学的スコアリングシステムを使用して後肢機能を毎日評価することにより、SOD one G 93マウスの神経筋機能を迅速かつ確実に評価することです。これは、最初にマウスの後肢を観察し、尾でマウスを吊り下げることによって達成されます。2番目のステップは、マウスが歩行を観察しながら歩ける

次に、マウスを横向きにして、書き込み反射の有無をテストします。最後のステップは、マウスコホートの神経学的スコアデータを順序ロジスティック回帰モデルに当てはめてデータ分析を実行することです。最終的に、私たちの表現型神経学的スコアリングシステムは、治療介入の有効性を識別する目的で、LSのマウスモデルであるSOD one G 93の疾患進行を評価するために使用されます。

この方法が他のすべての既存の技術よりも優れている主な利点は、マウスにとって迅速、単純、信頼性が高く、ストレスが最小限に抑えられることです。この方法の意味は、この疾患の最も一般的なマウスモデルにおける治療介入の迅速な評価を可能にするため、新熱帯性側索硬化症またはLSの治療にまで及びます。神経学的な違いが微妙な場合があるため、神経学的なスコアリング方法を学ぶのが難しいため、視覚的なデモンストレーションが重要です。

まず、オスのSODマウス1匹のG93Aマウスを飼育し、ケージハウスごとに1匹のマウス、メスのSODマウス1匹のG93Aマウスをケージごとに2匹まで収容します。プラスチック製の小屋の形でマウスに環境エンリッチメントを提供します。Lido recordでマウスに餌と水を提供します。

すべてのマウスと研究の体重を同時に測定します。毎日の体重は、病気の進行や慢性的な薬物治療から生じる可能性のあるあらゆる病気の敏感な指標です。研究中、各マウスの神経学的スコアを、連続して実行される3つのテストのレジメンを通じて毎日評価します。

表現型の遷移点でのスコアの描写は、最初のテストでは非常に難しいので、注意深く見てください。テールサスペンションテストでは、マウスをテールの基部から約1.5インチ、ホームケージのワイヤー上部に保持します。後肢の機能を1〜2秒間観察し、テストを3回繰り返します。

歩行テスト用。マウスを、ある程度の牽引力があり、歩行距離が25センチメートル以上の清潔な面に置きます。マウスがそのgaを観察しながら最大75センチメートル歩くのを許可します。

筆記反射テストでは、マウスを横に置き、ストップウォッチを使用して、両側から自力で書くのにかかる時間を測定します。このテストの試行は1回のみ必要です。3つの表現型観察テストの集合的な結果に基づいて、0から4までのスケールで各後肢を左右に独立して採点します。

洞スコアが 0 の場合は、マウスが未発症であることを示します。サスペンションテスト中、後肢は外側正中線から完全に伸びており、この位置に2秒以上留まります。また、歩行テスト中に、正常な歩行が観察されます。

最初の症状の出現を示す 1 のスコアを割り当てます。サスペンションテスト中に、後肢が外側正中線に向かって崩壊した場合、または部分的に外側正中線に向かって震えていたり、他の方法で異常に広がったりした場合。先ほど示したサスペンションテストの症状に加えて、スコア1を受け取るべきマウスの歩行は、まだ正常またはわずかに低く見えるはずです。

Parsisの発症を示すスコア2を割り当てます。サスペンションテスト中に後肢が部分的または完全に崩壊した場合、さらに歩行テスト中に、後肢が前進運動に使用されます。ただし、75センチの歩行中につま先が少なくとも2回下向きに曲がるか、足の任意の部分を引きずって2のスコアを獲得します。

また、マウスは、10 秒以内にマウスの両側に配置された後も、自分自身を書き込むことができる必要があります。麻痺を示す3の洞スコア。サスペンションテスト中にマウスが後肢に硬性麻痺を示したり、関節の動きが最小限であったりする場合、マウスは歩行テスト中に前進運動を示すことがありますが、後肢を使用することはできません。

サイナススコアが3であることに加えて、マウスは10秒以内に両側に配置された後も自分自身を書くことができなければなりません。最後に、スコア4のaは、マウスが懸濁中に硬直した麻痺を示すたびに人道的なエンドポイントを定義します。後肢を用いた歩行テストでは、前進運動は見られず、また、どちらかの側に置いてから10秒以内に自分自身を書くこともできません。

雄マウスは、通常、雌マウスよりも進行性が進んでおり、これは、雌と比較して神経学的スコアが1で分類できる症状を示す寿命の割合が高いことからも明らかです。症状が神経学的スコアが2または3の範囲に増加すると、各スコアで費やされた日数は性別間で同じ頻度になります。ここに示されているのは、前述の neuroco プロトコルを使用して生成された順序ロジスティクスの統計分析グラフです。

これらのデータは、試験化合物TDI1 73を投与されたマウスであるSOD one G 93のコホートを、ビヒクルを投与されたマウスのコホートと比較した薬効薬理学研究からのものである。性別を別々に解析した場合、統計的に有意な差は観察されなかったが、性別を統合した場合には統計的有意性に達した。同様の傾向を示しているが、カプラン・マイヤーの生存分析は、性別が統合されても有意差を明らかにするほど感度が十分ではなかった。

一度習得すると、スコアリングシステムは、適切に実行されれば、マウス1つにつき1分以内に適用できます。このビデオを見た後、Neurocoシステムを使用してLSのマウスモデルであるSOD one G 93の疾患の進行を評価する方法を十分に理解しているはずです。