High Throughput <em>Danio Rerio</em> Energy Expenditure Assay

Savannah Y. Williams; Benjamin J. Renquist

doi:10.3791/53297

JoVE Journal
Biology

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JoVE Journal Biology

High Throughput Danio Rerio Energy Expenditure Assay

高スループットゼブラフィッシュエネルギー消費アッセイ

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08:35 min

January 27, 2016

DOI: 10.3791/53297-v

Savannah Y. Williams¹, Benjamin J. Renquist²

¹Department of Molecular Physiology and Biophysics,Vanderbilt University Medical Center, ²School of Animal and Comparative Biomedical Sciences,University of Arizona

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

ゼブラフィッシュは、エネルギー恒常性の研究にとって重要なモデル生物です。 NADH₂感受性酸化還元インジケーターであるalamar Blueを利用することで、ゼブラフィッシュの幼生の代謝率を96ウェルプレート形式で測定するアッセイを開発し、薬物や遺伝子の発見に適用することができます。

このハイスループットのレサズリンベースの蛍光測定法の全体的な目標は、代謝率の尺度であるNADH2産生に対する遺伝的または薬理学的操作の影響を監視することです。この方法は、特定の薬物や遺伝子が代謝率に与える影響など、肥満分野の重要な質問に答えるのに役立ちます。さらに、このアッセイは、動物系全体における潜在的な薬物-薬物間または薬物-遺伝子相互作用のスクリーニングにも適用できます。

このアッセイの主な利点は、酸素消費アッセイと比較して、高いスループットと経時的なシグナルの蓄積であり、これによりユーザーは代謝率のわずかな違いを検出できます。この手順を実演するのは、私の研究室の大学院生であるキャロライン・フォイです。テキストプロトコルに従ってE3培地の60倍ストック溶液を調製した後、16.5ミリリットルのストックと1リットルの二重蒸留水を希釈して1X E3培地を調製します。

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