miRNAの脳特異的ノックダウンのための定位注射への単純な代替

ここでは、マウスの脳内のマイクロRNAを特異的にノックダウンするために、修飾されたアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む細胞浸透性ペプチドの使用を示します。これは、5月29日に対するアンティゴを設計することによって達成されました。この研究では、アンティゴオスを使用して、核酸修飾をロックするマイクロRNAを標的としました。

つまり、LNAの変更は5つの異なる位置に組み込まれました。この点では、LNA修飾を組み込むことで、マイクロRNAへの結合親和性が向上します。また、核抵抗性を与えるため、マイクロRNAのターゲティング効率が向上します。

ANTIGO MARとペプチドとの複合体をin vitroで調製し、尾静脈を介してマウスに注入しました。マイクロRNAのノックダウンは、このマイクロRNAの運動失調への関与を示唆する行動変化をもたらしました 3回連続注射は、治療後に歩行の顕著な変化を誘発するのに十分であり、脳組織が収集され、マイクロRNAのノックダウンが確認されました。CPPまたは自己透過性ペプチドは、最近、核酸送達の魅力的な担体として浮上しています。

ここでは、LNAとの電荷ベースの錯体化を受けることができるそのようなアルギニンに富む神経向性ペプチドの1つを使用しました。これは、体循環に投与されると、指定された標的部位であるこの場合はニューロン細胞に到達し、これらの細胞へのLNAの適切な放出を確保します。ME 29ファミリーメンバーの配列はmeaseから取得され、16 MERアンチセンスは、複合体を調製するために5つの等間隔の位置でロック核酸修飾とともに合成されました。適切な濃度のペプチド溶液とアンティゴ溶液を、滅菌10%グルコース中で別々に調製しました。

無菌条件下で。アンティゴ溶液をペプチド溶液にゆっくりと滴下し、穏やかに攪拌しました。ゆっくりと添加し、穏やかに攪拌することは、サイズがトリックスケールのモノ分散錯体の形成に重要です。

アンティゴは毎回3等分に添加され、1分間の混合と1分間の混合なしのインキュベーションが続きました。急速な添加は、複合体の凝集と沈殿につながる可能性があります。アンティゴコンプレックスは注射の準備ができました。

複合体は尾静脈注射によって投与されました。マウスを同じケージに戻しました。運動失調症の行動アッセイは、注射後3時間で毎日実施されました。

マウスは尻尾で押さえられ、周囲の物体に触れないようにしていました。後肢が10秒間広げられる方法に注目してください。棚の試験では、マウスはケージの薄い棚に沿って歩く必要がありました。

マウスは細いチャネルを通り抜け、厚い吸収性紙インクのストリップにインクを塗った足跡を残し、後ろ足だけを歩きます。データを混乱させないように、4つの手足から、アンティゴ治療の効果を見てみましょう。我々は、治療および制御されたマウスから脳および他の組織を単離した。

その結果、R VGペプチドは、蛍光標識されたsiRNAを脳特異的に送達するが、肝臓などの他の組織には送達しないことを発見しました。非神経向性制御ペプチドRVMは、siRNAを肝臓に送達しました。ANTIER 29を投与したマウスは、後肢に欠損を示した。

スクランブルされたanmeで処理されたClasping Controlled Mousesは、棚を交渉することができましたが、MARE 29に対してanmeで処理した後、マウスはこのアッセイで軽度の欠陥を示しました。フットプリントアッセイでは、処理したマウスでステップ長が著しく短縮されました。さらに、QR tpcrを通じて、マイクロNNAベースの治療薬の開発のために、29A中期とBB29B中期のレベルがダウンレギュレーションされていることを確認しました。

抗マイクロRNAの脳特異的送達は、血液脳関門による課題です。ここで紹介した技術を用いることで、従来の抗マイクロRNAの脳への送達方法を回避することができます。この方法により、マイクロRNAのノックダウンが技術的に実現可能になり、組織の特異性が向上します。