Name: 急性アルツハイマーなどの認知障害を誘発するために正常マウスにおけるアミロイドβペプチドの脳室内注射 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 1 s
Description: 学ぶアミロイドβペプチドの脳室内注射法。ステレオタクティック装置を用いずに正常マウスに急性のアルツハイマー様行動異常を誘導し、神経生物学研究と創薬スクリーニングを支援します。

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この研究は、保健福祉省によって資金を供給韓国保健産業振興院（KHIDI）、韓国（：H14C04660000承認番号）を通じて韓国医療技術のR＆Dプロジェクトの助成金によってサポートされていました。

全ての動物実験は、実験動物の管理と使用に関する健康ガイドの国立研究所に従って行う（NIH出版番号8023、1978年改訂）との制度的動物実験委員会の動物実験委員会としました。 KIST（ソウル、韓国）。 1.動物の準備<ol><li> 7週齢の雄性ICRマウス（またはC57BL / 6）のグループを準備します。 </li><li>マウスは恒常性を回復するために輸送した後、3-7日間順化過程を経て行きましょう。一般に、各ケージに4-5匹のマウスのグループを配置し、12月12日時間の明/暗サイクルで、22から23°Cと40％の湿度でそれらを維持します。水や食料を自由に提供します。 注：順化プロセスは、新しい住宅、食料、水、および臭いだけでなく、新しいケージと光周期に出荷と適応のストレスからの回復を可能にすることが重要です。この実験では、マウスはのSpeに位置する個別換気ケージ（IVCS）に収容しましたcific病原体フリー（SPF）グレードの施設</li><li>各マウスを秤量し、その重量平均から±10％を外れた被験者を除外します。 </li><li>二つのグループに被験者を分割：車両注射群（Aβを（ - ））およびAβ注射群（Aβ（+））。実験は、特定の薬物候補の有効性を試験する場合、4つのグループにマウスを分ける：（1）Aβ（ - ）/薬（ - ）、（2）Aβ（ - ）/薬（+）、（3） Aβ（+）/薬（ - ）、および（4）Aβ（+）/薬（+）。 </li></ol> 2.Aβペプチドの準備<ol><li>任意の凝集体を溶解するために、 図6のペプチドが均質にするために予冷1,1,1,3,3,3-ヘキサフルオロ-2-プロパノール（HFIP）を用いて、化学合成5を介して、または商業的供給源に由来するAβペプチドを、治療。 <ol><li> （室温で）5分間水浴超音波処理中のAβ/ HFIP溶液を、穏やかに渦を超音波処理し、室温で30分間この溶液をインキュベートします。完全に窒素で蒸発によってHFIPを削除します使用するまで-80℃で均質なAβを格納します。 </li></ol></li><li> Aβモノマー調製：1mMのAβのジメチルスルホキシド（DMSO）ストックを作成し、リン酸緩衝生理食塩水（PBS）で10倍に希釈し（100μMAβ、10％DMSO、90％PBS）。 </li><li> Aβオリゴマーを準備します。 <ol><li>それぞれ、3または7日間37℃で（ステップ2.2）（Aβ（1-42）またはAβ（1-40）を含む）、Aβのモノマー溶液をインキュベートします。 </li><li>インキュベーション期間中の水の蒸発を防ぐために加湿環境を提供するために、湿った紙タオルを含有するジッパーバッグに封管中Aβ溶液を置き。 </li></ol></li><li>未修飾タンパク質6の光誘導架橋とドデシル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS-PAGE）により調製Aβオリゴマーを確認します。 </li><li>車両ICV注入のための10％のDMSOを含む対照PBS溶液を準備します。 </li></ol> 3.シリンジの準備</p&gt; <ol><li> ICV注入のための26のGステンレス鋼針でマイクロシリンジを準備します。 </li><li>外科的処置のために使用されるすべての他の装置とオートクレーブ中で注射器を滅菌します。オートクレーブした後、20分間UV光の下で装置を配置します。 </li><li>脳（ 図1A）への注入の深さで最大の精度を可能にするために3.8ミリメートルにその長さを調整するためにパラフィルムでマイクロシリンジの針を包みます。 （B6マウスの場合は、3.6ミリメートルに注射針を調整します）。 注：パラフィルムの圧縮は、3.6ミリメートルの腹を超える注入の深さにつながります。針の挿入中に圧縮されることからパラフィルムを防止するために、密に針を複数回折り返します。 </li><li>二回、70％エタノールで注射器の内部空間を洗います。 </li><li> RTで30分間水浴超音波処理中に注射器と針を超音波処理します。 </li><li>二回、70％エタノールで注射器の内部空間を洗います。 </li><li>シリンジをすすぎます蒸留水でかつより長い30分間ヒュームフード内で完全に乾燥させてください。 Aβの注入を開始する前に20分間、UV光の下でクリーンなシリンジを残します。 </li></ol> 4.Aβを注射したマウスモデルの準備注：無菌状態を維持し、70％エタノールおよびUV露光を使用して、ICV注入のためのすべての手術器具を滅菌するために消毒剤で術野を清掃してください。 <ol><li>キシラジン（20ミリグラム/ kg）およびチレタミンの混合物の腹腔内注射によってマウスを麻酔・塩酸/ゾラゼパム・ICV注入前のHCl（80ミリグラム/キログラム）。麻酔をかけながら、その体温を維持し、足ピンチ応答を評価することにより、十分な麻酔を確認するために暖かいマットの上にマウスを置きます。 </li><li>滅菌PBSは、手順（ 図1B）の間に角膜の乾燥を防ぐために、両眼に低下し適用します。 </li><li> difficuの場合には、それらの表面上の複数のまっすぐな垂直線を描画することにより、2つのミラーを準備しますLTY垂直に注射器を注入します。 </li><li>右隣のマウスの体と他の（M2）に頭の前で1ミラー（M1）を配置します。マウスの2つの眼の間の架空の正中線にM1を平行に保ち、2面が90°の角度（ 図1C）を形成するように、M1に対して垂直にM2を手配。研究者が右利きの場合は、マウスの左側にM1を配置します。研究者が左利きされている場合は、マウスの右側にM1を配置します。 </li><li>マウスの額の真ん中に70％エタノールをスプレーし、乾いた綿棒でそれをこします。アルコールの蒸発に体温を下げる回避するために、額の面積が大きすぎる濡らさないでください。 </li><li>きれいな綿棒を使用して、2％クロルヘキシジン溶液で額に同じ領域を拭いてください。 3回ずつの合計のためのアルコールとクロルヘキシジンとscrubbingsを繰り返します。 注：必要に応じて、possiを最小限にするために、マウスの額の毛を剃ります汚染の性</li><li>ブレグマの位置を確認します。 <ol><li>親指と人​​差し指を使用して、しっかりと、額の皮膚を押したまま直接両眼が突出する程度には2つの目の上。ピンと張った額を作り、皮膚の下の頭蓋骨の動きを最小限に抑えるために背中の皮膚をドラッグします。 </li><li>マウスの両目とポイント親指と人差し指の大会、ブレグマ：3つの頂点を割り当てることによって、目に見えない三角形を形成します。 （ 図 1B、赤矢印：ブレグマ） </li></ol></li><li>テープを測定して注入ポイントを見つけます。-1.0±0.06ブレグマへミリメートルの後方、矢状縫合に横1.8±0.1ミリメートル、深さが2.4ミリメートル（ 図1D、青い星：各半球内注入ポイント）。 （：-0.9ミリメートルの後方、横1.7ミリメートル、深さが2.2ミリメートルB6マウスの場合） </li><li>偶発的空気注入を回避するために、過剰な溶液を用いて10μlのAβ溶液または車両で注射器を埋めます。 </li><li>目で注射器を配置電子注入ポイント（プロトコル4.7を参照）。注入点の平面に対して垂直に注射器を作ります。位置合わせは、固定された視点（ 図1C）からミラーに描かれた線との両方のミラーでの注射器のイメージを反映しています。 </li><li>パラフィルムラッピングが皮膚に到達するまで針を挿入し始めます。 </li><li>着実に手保持注射器を保持し、一時停止することなく、ゆっくりと5秒かけて、Aβの溶液または車両の5μLを注入するためにもう一方の手を使用しています。注射器は、全体に垂直なままでいることを確認します。注入が完了した後、拡散のために注射器を取り外す前に、3〜5秒待ってください。 </li><li>元の三角形の位置を仮定すると、不要な動きから頭蓋骨を保護するために適度な圧力をかけます。傾くことなく、注射器を取り外します。 </li><li>回復のために暖かいパッド上にAβを注入したマウスを置き、その胸骨横臥位を維持。それが意識を取り戻すまで、無人、マウスを放置しないでください、そしてmを返しませんそれは完全に回復するまで非外科的マウスを含むケージにウーズ。 </li><li>ステップ3.3から3.6に従った注射器を洗います。 </li><li>術後のマウスの移動を監視し、5〜7日間、マウスにおける感染症や病気の兆候を確認してください。 </li></ol><img alt="図1" src="/files/ftp_upload/53308/53308fig1.jpg" /> ICV領域への図1.Aβインジェクション （A）未修正の注射針と比較して、パラフィルムでラップされた注射針。 （B）PBSは乾燥を防ぐために、目に落下します。親指、人差し指でマウスの額に形成される三角形、およびマウスの両眼だけでなく、それぞれの眼から等距離虚正中。注射針の垂直注入を補助するために表面上に描かれた複数の縦線との（C）は、2つのミラー（M1及びM2）。 （D）注入点を持つ三角形、インド系マウスの各半球上（矢状ブレグマから-1.0±0.06ミリメートルと1.8±0.1ミリメートル）青い星のようにated。緑の矢印：パラフィルム、赤矢印：ブレグマ<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53308/53308fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> Y迷路と脳の分析によって、Aβの注射の5確認<ol><li> Y迷路試験3,7,8によってAβを注射したマウスのワーキングメモリを評価します<ol><li>記憶障害の発症のための注射後3日待ってください。 </li><li> 3つの同一の腕を持つ黒いプラスチックの迷路を使用して、Y迷路テストを実行し、標識、B、およびC、それぞれの迷路の中心から120°の角度で分岐するうち（幅×長さ×高さ10cmの×40 ×12センチセンチ）。 </li><li>スタートアーム（アームA）でマウスを置き、被験者が自由に8分間迷路を探索することができます。 </li><li>各アームにエントリの数を測定し、alternを計算各被験者3,9のエーション率。 </li></ol></li><li>直接注入​​が適切にICV地域をターゲットにかどうかをチェックするために死後脳を調べます。 <ol><li> 4.1節で概説したのと同じ手順により、マウスを麻酔。その後、頸椎脱臼によりマウスを生け贄に捧げます。 </li><li>マウスを刎ねると手術用はさみを使用して頭蓋骨を露出するように皮膚を除去。頭蓋から組織や筋肉を削除します。 </li><li>脳に損傷を与えることなく（頭頂と壁間の骨の間）ラムダ縫合の切り傷を作ります。頭頂と前頭骨、その後、後頭部と壁間の骨を削除します。鉗子を使用して頭蓋骨を削除し、髄膜を持ち上げて頭蓋骨から脳を隔離します。 </li><li>チルド滅菌生理食塩水で脳を洗うとメス（ 図2）と冠状方向に脳のICV域をカット。 </li><li>上の針挿入の軌跡に基づいて注入領域を確認脳組織（ 図2）。針跡が心室の1に達しているかどうかを確認してください。針跡が満たす、または心室を通過しない場合は、実験結果の解析から、その被験者のデータを除外します。 </li></ol></li></ol>

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</ol>

著者らは開示するものは何もない。

このプロトコルの中で最も重要なステップは、AβのICV注射です。このプロトコルは、定位固定器具11,12なしマウスのICV領域にAβを注入するように設計されています。実験を開始する前に、代わりにAβの青色染料との練習注射の準備期間は十分な器用さを達成するために行われるべきです。注射直後には、顔料噴射が正常に行われたか否かを確認する必要があります。慎重に脳を取り出し、適当な領域が青色に染色されたかどうかを確認してください。着色された行はに達するが、ICV領域の深さを超えてはなりません。一般的に50以上のICV注射後に達成される90％の成功率の最小値は、提案されています。 ICV注射中に、（ブレグマ零点に近い）矢状静脈洞を注入することにより、血管の損傷を防ぎます。 Aβ注入した後、統計的に有意な記憶障害を観察しましたY字型迷路行動試験を使用して、Aβ注射群と対照群との間にD。行動実験の異なるタイプは、モリス水迷路13、物体認識、受動的回避試験並びに恐怖条件として、認知障害の程度を試験するために適用することができます。恐怖条件付けは、海馬依存...

アミロイドβ（Aβ）は、アルツハイマー病（AD）の病理学的特徴であることを考慮すると、ADの動物モデルの開発は、Aβの神経の過剰発現に焦点を当ててきました。アミロイド前駆体タンパク質（APP）またはプレセニリン（PS）の変異はAβの平衡の乱れに、最終的に家族性AD 1の病因につながるので、APPまたはPS遺伝子変異を伴うマウスモデルは、一般的に受け入れられています。 TG2576、PDAPP、APP / PS1とAPP23：トランスジェニックマウスの広い範囲の中で、原型のマウスモデルは、以下を含みます。脳では、これらのマウスは、一般的に、Aβ凝集し、最終的に老人斑を示します。プラーク形成は、彼らが学習と記憶の行動試験に劣った性能を示すように、かなりの認知障害が続いています。自然に人間のAD病理を模倣するトランスジェニックマウスを用いての生成は、このようにディの進行をモニターするために私達を可能にすることにより、ADの研究、社会に貢献してきましたsea​​se。それは、Aβ斑を発症するマウスについてヶ月かかり、より長いAβ誘発性シナプスまたは行動異常2,3を表示するためしかし、トランスジェニックマウスを使用して不経済であり、時間がかかります。元々のトランスジェニックマウスモデルの欠点を克服するための代替手段として開発され、非トランスジェニックモデルはまた、一般的に、それらの明確な利点のために使用されています。 ADのような認知障害は、他の化学的および物理的手段、例えばかかるスコポラミン、病変の誘導のような神経毒性化合物の注射などによってトリガすることができる一方、病原体誘導性のADモデルは、脳内のAβの直接注入することにより製造することができますこのような海馬のような認知関連分野で、または皮質損傷4によります。しかし、認知障害の非病原性誘導は正確にADの根本的な病態生理を反映するものではありません。その代わりに、それだけで、その症候成果を模倣します。対照的に、病原体誘導性のADモデル、A46; -injectedマウスモデルは、AD様行動異常を示すことができるだけでなく、Aβ病理学、家族性および散発性ADによって共有される共通の特徴を示すことができます。 脳組織内のAβプラークを可視化する難しさにもかかわらず、ADの調査のために、それが魅力的Aβを注射したモデルの最大の利点は、その制御性です。研究者らは、薬物関連の研究に誤ったデータにつながる可能性マウスモデルにおける個人差を取り除くことができます。タイムリーな薬物治療は、候補薬物のメカニズムに応じて有効になっています。詳しく説明するように、Aβ凝集の阻害剤は、Aβの注入の前に適用することができます。さらに、研究者らは、他の要因が密接に個人差を含めて、制御されているため、Aβの注射後に生じる病原性形質転換は、Aβの暴露に由来することを想定することができます。 hのこのプロトコルでは、鮮やかな説明OWが提示され、定位楽器ずにAβの脳室内（ICV）注射を介して、正常なマウスにおけるAD様の表現型を誘導します。脳組織への挿入誘発損傷を最小化することは構造的損傷および病変誘発性炎症の可能性を防ぐために不可欠です。マウス操作でのスキルの不足が予想外の神経細胞損傷につながります。また、注入中に達成することが適切な角度と深さを可能にする技術は、頻繁なミスを回避することが特に重要です。 ICV注入の詳細、鮮明な説明に加えて、以下の手順により作成したモデルの信頼性は、以下のセクションに示されています。以下のプロトコルは、それによって最終的にADの社会のために意味のある発見につながる可能性が踏み台を提供し、ADの研究に貢献し信頼性の高い、容易に理解ツールである可能性があります。

<table><tbody><tr><td>ICRマウス</td><td>Orientbio</td><td></td><td>雄、6-8週間、体重27-29 gC57BL</td></tr><tr><td>/ 6マウス</td><td>Orientbio</td><td></td><td>雄、6-8週間、体重21-23 g、</td></tr><tr>ア<td>ミロイドβ1-42</td><td>、社内合成</td><td></td><td>ストック濃度:1 mM / DMSO、注入濃度:100 &mu;M/10% DMSO および 90% PBS</td></tr><tr><td>ICV 注射器 (26s ゲージ)</td><td>ハミルトン</td><td>80308</td><td></td></tr><tr><td>エバンス ブルー染料 (EBD)</td><td>abcamBIochemicals</td><td>ab120869</td><td>1% EBD in PBS</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>gibco</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>Gradi-GelTM II Gradient PAGE Analysis Kit</td><td>ELPiS Biotech</td><td>EBS-1056</td><td>15% Gel</td></tr><tr><td>Precision Plus ProteinTM Dual Xtra Standards</td><td>Bio-Rad</td><td>161-0377</td><td></td></tr><tr><td>銀染色キット</td><td>GE-Healthcare</td><td>17-1150-01</td><td></td></tr><tr><td>LabDiet</td><td>Orientbio</td><td>5053</td><td></td></tr></tbody></table>

急性アルツハイマーなどの認知障害を誘発するために正常マウスにおけるアミロイドβペプチドの脳室内注射

Intracerebroventricular Injection of Amyloid-&#946; Peptides in Normal Mice to Acutely Induce Alzheimer-like Cognitive Deficits

アミロイドβ(Aβ)は、家族性および散発性アルツハイマー病(AD)の主要な病理学的メディエーターです。AD患者の脳では、Aβオリゴマーとプラークの進行性の蓄積が観察されます。このようなAβ異常は、長期的な増強を阻害し、シナプス機能を損ない、認知障害を誘発すると考えられています。臨床的および実験的証拠により、脳内のAβレベルの急激な増加がアルツハイマー様表現型の発達を可能にすることが明らかになりました。 したがって、多くの場合、Aβの脳室内(ICV)注射を介してADマウスモデルを急性に生成する方法を説明する詳細なプロトコルが必要です。このプロトコールには、ペプチドの調製から行動異常の試験まで、Aβを注入したマウスを用いた実験のステップが含まれています。注射前にツールや動物被験者を準備するプロセス、ICV注射によってマウスの脳にAβを注射するプロセス、認知障害の程度を評価するプロセスは、Aβの効果的なICV注射のヒントに重点を置いて、プロトコル全体で簡単に説明できます。Aβの特定の側面を模倣してAβを注射することで、研究者は老化プロセスを回避し、Aβ異常の下流の病理に焦点を当てることができます。

このセクションでは、Aβ凝集および記憶障害のY迷路評価を確認することによって得られる結果の例を示します。使用して42個のアミノ酸、Aβ単量体の混合物、オリゴマーおよび原線維（ 図3）の完全長のAβ（1-42）ペプチドを作製しました。 HFIP誘発性モノマー化工程を経て、比較的均一な単量体（レーンB）が得られました。 7日間のインキュベーション後、Aβ凝集体（レーンC）の多様なサイズが開発しました。トリマーおよびテトラマーは、Aβのオリゴマー形態の中で優占種でした。空間的ワーキングメモリは、Y迷路試験における交代を経てAβを注射したマウスで評価しました。各マウスを自由に迷路を探索させながらアーム選択のシーケンスと合計アームエントリの数を記録しました。認知能力、より多くのマウスが少なく、最近訪問した腕を入力する傾向を持っている必要があり、アルテより無傷その腕の選択肢をrnating。 Aβ注入マウスの群は、認知障害（ 図4）の発達を示し、有意に低い交替率を示しました。 <p class="jove_c...

アミロイドβ（Aβ）は、動物モデルが定義された量とAβ断片の種の管理を可能にし、各研究グループ内の個人差を低減-injected。このプロトコルは、正常マウスにおけるアルツハイマー様の行動異常の製造を可能にする、定位楽器なしでAβの脳室内（ICV）注射を説明しています。

Amyloid-&#946; (A&#946;) is a major pathological mediator of both familial and sporadic Alzheimer's disease (AD). In the brains of AD patients, ...

この手術手順の全体的な目的は、ステレオタキシス装置を使用せずにアミロイドβを脳室内注入し、正常なマウスにアルツハイマー病様行動異常を急性的に誘発することです。この手法は、アルツハイマー病の創薬など、神経生物学分野における重要な問いへの回答に寄与します。本手法の主な利点は、ステレオタキシス装置の助けを借りずにマウスの脳室領域へAβを直接注入できることであり、加齢プロセスを待たずにマウスにアルツハイマー病様行動異常を模倣させることが可能になります。この手法の意義は、アミロイドβの下流の病理学的研究や薬剤候補のスクリーニングに利用できるため、アルツハイマー病の治療や診断へと広がります。一般的に、この方法に慣れていない方は、動物の頭蓋骨上のブレグマの正確な位置を特定することが困難なため、苦労する可能性があります。この手順を開始するには、DMSOを用いて1 mMのA-betaを調製してください。次に、これをPBSで10倍に希釈します。続いて、ICV注入用の溶媒として、10% DMSOを含むPBS溶液を調製します。その後、深度制御注入に合わせて針の長さを調整するため、26ゲージのステンレス製針を装着したマイクロシリンジをパラフィルムで巻きます。針を挿入する際にパラフィルムが圧縮されず、針の長さが一定に保たれるように、シリンジを数回密に巻き付けます。次に、針先からパラフィルムまでの長さが3.8ミリメートルになるように、パラフィルムの層を切り取って調整します。その後、シリンジを70%エタノールで2回洗浄します。その後、シリンジを蒸留水で洗浄します。ドラフト内で少なくとも30分間完全に乾燥させ、注入前にクリーンなシリンジをさらに20分間UVライトの下に置きます。このステップで、麻酔をかけた7週齢のマウスを保温マットの上に置きます。次に、処置中の角膜の乾燥を防ぐため、両眼に滅菌PBSの点眼または軟膏塗布を行います。その後、足指へのピンチ刺激による伸展反射を確認し、十分な麻酔が効いているか判断します。次に、シリンジを垂直に注入するための指標とするため、表面に複数の垂直線を描いた2枚のミラーを準備します。1枚の鏡をマウスの体のすぐ横に、もう1枚を頭の前に配置します。M1をマウスの両眼を結ぶ仮想の中線と平行に保ち、M2をM1と垂直に配置して、2つの平面が90度の角度を形成するようにします。次に、マウスの額に70%ethanolをスプレーし、乾いた綿棒で拭き取ります。前頭縫合点（ブレグマ）を特定するために、親指と人差し指を目の直上に置き、両目がわずかに飛び出す程度に前頭部を軽く押し下げます。同時に、頭蓋骨下の皮膚の動きを最小限に抑えるため、前頭部の皮膚を後方に引っ張ります。メジャーを用いて、頭蓋骨下 2.4 mm の深さに注射部位を特定します。シリンジにA-beta溶液または溶媒を10 µL充填します。シリンジを注入部位の平面に対して垂直に配置します。次に、両方の鏡に映ったシリンジの像を、鏡上の描かれた線に合わせて調整します。Parafilmのラッピングが皮膚に触れるまで、ゆっくりと針を刺します。片手でシリンジを固定し、もう一方の手でA-beta溶液または溶媒を5 µL、5秒間かけて休止することなくゆっくりと注入します。その際、シリンジが常に垂直に保たれていることを確認してください。注入完了後、3〜5秒待ってからシリンジを抜いてください。親指と人差し指を再び頭部に戻し、頭蓋骨に不要な動きが出ないよう押さえます。次に、傾けないようにシリンジを抜去します。その後、マウスを保温パッドの上に置き、回復させます。A-betaが標的のICV領域に注入されたかを確認するために、脳組織内の針の刺入痕をチェックし、脳室のいずれかに到達しているかを確認します。注入に失敗した場合は、その被験者のデータを実験結果の解析から除外してください。本実験では、42個のアミノ酸からなるフルレングスのA-betaペプチドを用い、A betaのモノマー、オリゴマー、およびフィブリルの混合物を調製しました。HFIPによる単量体化ステップを通じて、相対的に均一なモノマーを得た。7日間のインキュベーション後、さまざまなサイズのA-beta凝集体が形成され、A-betaのオリゴマー形態の中では三量体および四量体が優勢な種となった。本研究では、Y迷路試験を用いてA-betaを注入したマウスの空間作業記憶を評価し、各マウスに迷路を自由に探索させながら、アーム選択の順序および総進入回数を記録した。A-betaを注入したマウス群では、交互作用率が有意に低下しており、認知機能欠損の発現が示されました。この手法を習得すれば、適切に実施することで、麻酔処置を含めて20分で完了させることができます。これらの処置を行う際は、針を注入面に対して垂直に刺入することを忘れないでください。この技術の開発により、アルツハイマー病の創薬分野の研究者が、アクセスしやすいこれらのアルツハイマー病げっ歯類モデルを用いて、候補薬のin vivoスクリーニングを探索する道が開かれました。このビデオを視聴することで、定位固定装置を用いずに脳室内投与を行う方法について十分に理解できるはずです。

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

ADのトランスジェニック（Tg）マウスモデルでは、病気は人間の患者で進行するにつれてどのように、なぜCSFの変化でAβやタウのレベルを調査するために素晴らしい機会を提供しています。ここで、我々は、マウスからシリアルCSFのサンプリングのための洗練された大槽穿刺のテクニックを示しています。...

大槽マウスでの脳脊髄液のシリアル収集のためのテクニック

このビデオは、アミロイドベータ(Aβ)ペプチド特異的抗体をラットの海馬に連続注入する技術を示しています。この研究では、Aβペプチド特異的抗体の制御された注入と可溶性Aβオリゴマー(Aβo)のラット海馬への注入を組み合わせて、オリゴマーと抗体との間の相互作用を研究するための両側カニューレシステムを埋め込むことを採用しています。...

Aβペプチド特異的抗体とAβオリゴマーのラット海馬への制御注入

このビデオは、アミロイドベータペプチド、塩化アルミニウム、および海馬領域での有毒なアミロイドプラーク形成をまとめて助ける神経炎症性成長因子を注入する手順を示しています。これは、アルツハイマー病の特徴であるラットの記憶障害を引き起こします。...

アミロイドβペプチド注入によるアルツハイマー病ラットモデルの確立

このビデオは、アルツハイマー病のマウスモデルを確立するために、歯状回へのアミロイドベータの正確な定位固定装置注入を示しています。アミロイドβタンパク質の正確な座標決定と制御された送達は、ニューロンの分解を引き起こし、記憶処理を混乱させ、アルツハイマー病の発症に寄与します。...

アルツハイマー病モデルのためのアミロイドベータタンパク質の脳定位直接注入

出典:Arango-Lievano, M. et.al., Longitudinal In Vivo Imaging of the Cerebrovasculature: Relevance to CNS Diseases(脳血管系の縦断的In vivoイメージング:中枢神経系疾患との関連性)。J. Vis. Exp. (2016)このビデオは、蛍光標識されたアミロイドプラークと脳血管系を視覚化するためのin vivo...

アルツハイマー病モデルマウスにおける脳血管およびアミロイドプラークのin vivoイメージング

ここでは、アミロイドベータの脳定位固定剤を直接注入するためのプロトコルを紹介します。この方法論は、アミロイドベータが脳ニューロンに及ぼす短期的な影響に対処するための代替のin...

マウス海馬にオリゴマーアミロイドベータの定位注入

慢性アミロイドβオリゴマー輸液の動物モデルにおける神経変性は、浸透圧ポンプを用いて抗体治療フューズによって打ち消されます

このプロトコルは、合成と性質、組織学的解析および検出に続いてアルツハイマー病モデルを確立する大人のゼブラフィッシュでアミロイド毒性を生成する単量体のアミロイド β42...

Β42 アミロイド毒性と大人のゼブラフィッシュ脳の神経変性をモデリング

および Aβ25 35 の注入による凝集、原線維変化を組み合わせたラットの空間記憶障害、神経細胞の病理学的変化、神経のアミロイド β 蛋白 (a β) 負担の評価によるアルツハイマー病を模倣するプロトコルです。三塩化アルミニウムと遺伝子組換えの人間成長因子 β 1...

合成アミロイド β 蛋白の脳室内投与によるラットの動物モデルにおけるアルツハイマー病の貴重な模倣の確立

このプロトコルで説明されているマウスの脳内出血の自家血注入モデルでは、針のトラックまでの血液逆流、ポンプシステムにおける無抗凝固剤のリスクを最小限に抑えるために二重注入の技術を使用し、システム内のすべてのデッドスペースと拡張可能なチューブを排除。...

マウスにおける自発脳内出血をモデル化する自家血注入

学ぶアミロイドβペプチドの脳室内注射法。ステレオタクティック装置を用いずに正常マウスに急性のアルツハイマー様行動異常を誘導し、神経生物学研究と創薬スクリーニングを支援します。

急性アルツハイマーなどの認知障害を誘発するために正常マウスにおけるアミロイドβペプチドの脳室内注射

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