Name: 腹腔内卵巣癌転移の定量 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 58 s
Description: 学ぶ 卵巣癌の腹腔内転移における腫瘍負荷の定量法。RFP標識細胞と蛍光スペクトル分離技術を用いて、マウスモデルで組織自己蛍光を除去し、治療効果モニタリングのための正確なイメージングを実現します。

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この研究は、国立衛生研究所/国立癌研究所によるM.S.S.への研究助成金RO1CA109545とRO1CA086984、およびLeo and Ann Albert Charitable Trustからの賞(M.S.S.へ)によって支援されました。

すべてのin vivo試験は、ノートルダム動物実験委員会の大学によって承認され、雌のC57 / BL6Jマウスを用いました。 1.マウス卵巣癌細胞の培養<ol><li>次のようにID8マウス卵巣癌細胞培養培地を作る：4％ウシ胎児血清（FBS）、1％ペニシリン/ストレプトマイシン、5μg/ mlのインスリン、5μg/ mlのトランスフェリンを補充したダルベッコ改変イーグル培地（DMEM）の1 Lおよび5 ngの/ mlの亜セレン酸ナトリウム。 </li><li> RFPおよび選択マーカー（遺伝子ブラスチシジン）を発現する、商業的に調達するレンチウイルス粒子を用いた赤色蛍光タンパク質（RFP）を発現するID8マウス卵巣癌細胞13に伝達します。緑色蛍光タンパク質を用いることができるが、より弱い蛍光シグナルを提供します。 <ol><li>直前伝達に、培養細胞50 - 70％、最終1ミリリットルポリブレン（5μg/ mlのを含んで合流し、（ペニシリン/ストレプトマイシンなし）新鮮な培地を追加濃度）。 </li><li>静かにピペットRFP-レンチウイルス（20μl）をシャーレに滴下し、72時間、37 O Cでインキュベートします。培地を除去し、24時間新鮮な培地で培養します。培地（5μg/ mlの）にブラストサイジンを添加することにより形質導入された細胞の選択を開始し、蛍光顕微鏡（ 図1.）を用いて赤血球を監視します。 </li></ol></li><li>文化の組織培養皿に約10 6個の細胞を播種し、細胞単層がコンフルエントになるまで、光学顕微鏡を用いて毎日可視化することにより、ID8媒体におけるRFPタグ付き細胞。 </li><li>ときにコンフルエントは、トリプシン（0.25％、3分）を使用して細胞を採取し、細胞が分離されるまで、37°C ​​のインキュベーターにフラスコを返します。 </li><li>血清を含むID8培地を6 mlのトリプシンを中和します。アップピペットと皿の底に対して下落し、15ミリリットルコニカルチューブに移します。 2分間1,200rpmで遠心分離し、その後、GLを使用して、培地を吸引お尻ピペット。 </li><li>優しく温かいPBS 6mlに再懸濁し、上記1.5のように遠心分離することにより、リン酸緩衝生理食塩水（PBS）で細胞を洗浄。 5×10 6細胞/ mlの最終濃度になるようにPBSに再懸濁します。注射まで暖かい細胞（37 O C）を保管してください。 </li></ol> 2.腹腔内ID8細胞の注入およびin vivoイメージングで <ol><li>腹腔内（IP）注射を介して、1000万個の細胞の合計のための暖かいID​​8-PBS溶液2mLで各マウスに注入します。腫瘍細胞は毎週ライブイメージングで約10週間のためにin vivoで成長させます。 </li><li>すぐに（0.5リットル/分のO 2流量で2.5％流量）イソフルランを用いて、各マウスを麻酔後、マウスの重量を量ると、その後の注射と毎週以下。注：マウスはない腫瘍負荷の定量的尺度ではなく、研究を通して、個々のマウスの物理的な進行のより一般的な対策として、秤量しました。マウスは、重量を量りますTSは、自分の前の重み値と比較しました。 <ol><li>イソフルランチャンバー内に配置することにより、マウスを麻酔。手順全体で2.5％の流量イソフルランへの曝露のためにノーズコーンにマウスの頭部を配置することによって、スキャン中に一定の麻酔を維持します。 </li></ol></li><li>黒い髪は、蛍光信号の減衰の原因となるよう、各マウスの胴体と腹部の毛を除去するために、脱毛クリームを使用してください。マウスは、脱毛クリームの適用後に温水で浸し、室温でペーパータオルで乾燥させます。 </li><li>麻酔をかけながら、小動物撮像光学系を用いて、各マウスの全身をスキャンします。各時点で、コホート内のすべてのマウスをスキャンします。次の2段階のプロトコル （ 図2A）を使用します。 <ol><li>ステップ1で、440nmで、460nmで、4の励起フィルタを用いて5画像の合計を収集するためにマルチスペクトル取得を実行し、蛍光標識（RFP）腫瘍細胞を観察し80 nmで、520 nmおよび540 nmであり、600nmでの発光フィルター。 15秒の標準的な露出、2×2ビニング、160ミリメートルのFOV、および1.1のF ストップ ：次の取得パラメータを使用します。 </li><li>全動物を観察するステップ2では、オープン励起フィルター（白色光）、オープン発光フィルター、2×2ビニングおよび16 cmとFOVと0.2秒の標準的な露出を使用して反射画像を取得します。注：実際の撮影時間は約1分です。 </li></ol></li></ol> 3.マウスの解剖と画像取得<ol><li>ライブイメージングは、腹水の広範な腹腔内疾患や動物展示蓄積（腹部膨満によって証明されるように）の存在を示し、体重の減少または増加20％以上、無気力や苦痛の他の徴候た場合、CO 2を用いて、各マウスを安楽死させます麻酔は、頸椎脱臼が続きます。 </li><li>尖ったdissectioを使用して、マウスの腹側正中線に沿って前方に皮膚をカットn個のはさみ、胸郭の下に太ももの上から。スキン層のみ（ 図2BI）を切断するために細心の注意を払ってください。静かに腹膜壁に穴を開けないようにしてくださいされ、腹膜組織から皮膚を分離します。 </li><li>尖った解剖ハサミを使用して、皮膚の2つのフラップを作成するには、両方の胸郭の底部と太も ​​もの上部に沿って横方向に切断した （ 図2B II、III）。 </li><li>皮膚弁が開いて引っ張られ、小動物の光学イメージングシステム（ 図3A、B）を使用して、 その場でその臓器で各マウスをスキャンして、その腹側（下向き腹膜腔）に各マウスを置きます。 <ol><li> 2.4.1.-2.4.2で説明したのと同様の画像取得パラメータを使用します。 </li></ol></li><li>肝臓、網/膵臓、胃、絞り、小腸、大腸、左右腹膜、卵巣、kidne含む個々の腹腔の器官を抽出することにより、マウスを解剖続けますYS、腸間膜脂肪パッド。 <ol><li>観察し、列挙し、各臓器に目に見える腫瘍を記録します。各腫瘍の直径を測定するためにキャリパーを使用します。 </li><li> 媒体として2と5ミリメートルと同じ大きさ5mm以上の間に、 小さなとして、直径2ミリメートルよりも腫瘍が少なく指定します。 </li></ol></li><li>各器官のための所定の位置を特定する臓器スキャンテンプレート （ 図4）に臓器を置きます。湿った臓器を維持するためにPBSを使用してください。 </li><li>小動物の光イメージングシステム（ 図3C、D）を用いて、臓器の各シートをスキャンします。 <ol><li>ステップ2.4​​で説明したのと同じ画像取得パラメータを使用します。 </li></ol></li><li>スキャンした後、10％ホルムアルデヒドで場所器官は、組織学のために、その後の処理を可能にします。 </li></ol>目における腫瘍量の4定量電子蛍光画像<ol><li>各マルチスペクトル走査において自家蛍光の量を低減するために、第一の小動物イメージングシステムで使用可能なソフトウェアを使用してファイルをunmix。 <ol><li> インビボでのスペクトルファイルで 、Autofluor続い：最初のRFPロード未撹拌画像ウィンドウにおけるインビボレッドファイルでをし、Unmixを選択します。 </li></ol></li><li> 16ビット.TIFF（スケーリングされていない）形式として.bipファイルをエクスポートします。 </li><li> （ その場での臓器とのex vivoでの器官、その後、完全なマウス本体）ImageJソフトウェアを使用してください。 <ol><li> ImageJので臓器スキャンテンプレートファイルの16ビットの.tiffファイルを開くために&gt;ファイルを開くを使用してください。 </li><li> 画像の下に&gt;、&gt;明るさ/コントラストを調整して 最小値を 0に表示され 、 最大値は 35353に値を表示した後で設定することを選択します画像&gt;ルックアップテーブルは 、 レッドホットを選択します。注：様々な動物モデルが異なる輝度レベルが必要になりますが、与えられた研究を通して一貫明るさを保つことが重要です。 </li><li> フリーハンド選択ツールを使用して、各臓器の周りの関心の選択（ROI）のフリーフォーム領域を描き、各臓器の表面積を計算するために、 測定ツール （CTRL + M）を使用します。スプレッドシートの各臓器の表面積を記録。 </li><li>各臓器の周りに描かれたROIと、右ROI内でクリックして、唯一の臓器が含まれるように重複を選択します。 </li><li> しきい値&gt;調整&gt;画像の下に、個々の臓器を見ながら、ONL選択するために、+ 1200の下位閾値レベルと+ 1700の上限閾値レベルに画像のしきい値を設定することを選択しますyの最も明るい蛍光を発する領域と暗い背景を選択するためにチェックしてください。 [OK]を選択します。注：上記のように、以前に最も明るい領域は、分析工程のために選択されるように画像がImageJの中のしきい値スライダーの手動操作が必要な場合があります。種々の疾患モデルは、異なる閾値の制約が必要となるが、与えられた試験を通して一貫性の閾値レベルを維持することが重要です。 </li><li> 分析の下で&gt; サイズを変更し 、 粒子の分析 （ピクセル^ 2）10 -インフィニティには、 表示に選択します 。 アウトライン 、唯一の「結果の表示」を選択し、地域とこれらの明るい領域の生の統合密度の両方を測定するために[OK]をクリックし確認してください、みなさ腫瘍。 </li><li> 表面積の値とに表示される各腫瘍選択の生統合密度を記録<strong&gt;臓器表面領域を含む同じスプレッドシート内の結果テーブル。 </li><li> 分析&gt;ツールの下に&gt;キャリブレーションバーは 、臓器の画像にキャリブレーションスケールバーを追加します。注：この例では、これは白に黒、 ラベルカラーに右上 、 塗りつぶしの色に場所を変更することで行われた、 ラベルの数 5に、0に小数点以下の桁数 、12にフォントサイズやズーム 4.0と太字テキストを有効にする要因 。 </li><li> ... 名前を付けて保存]&gt; [ファイルの下で、.TIFFと.JPEGとしてモンタージュを保存します。 </li><li>臓器の.JPEGファイルを開くことがファイルを開く&gt;を使用し 、[ 挿入]&gt; [テキストボックスの下に</stronグラム&gt;、臓器の3行のそれぞれの下のテキストボックスを作成することにより、臓器ラベルを追加します。 </li><li>マウス番号順にImageJの中の全身スキャンの16ビットの.tiffの各ファイルを開くことが[ファイル]&gt; [開く]を使用してください。 </li><li> イメージ&gt;調整&gt;明るさ/コントラストの下では、 最小値を 0に表示され 、 最大は + 35353に値を表示してからイメージ&gt;ルックアップテーブルの下に設定 レッドホットを選択すること。 </li><li> [ファイル]&gt; [名前を付けて保存 ]の下...、。 ティフや.JPEGなどのモンタージュを保存します。 </li></ol></li></ol> 5.データ解析<ol><li>各マウスの各臓器のために、それぞれ、腫瘍選択領域と生の統合密度を追加し、各マウスの総臓器腫瘍領域を記録します。 </li><li>記録領域と生integratを正規化対応する臓器の表面積（ 表1）により、総腫瘍面積と総生集積密度の値を分割して各臓器のサイズED濃度値。 </li><li>正規化された腫瘍の表面積及び正規化生の統合された濃度値（ 図5A、B）の両方の平均を計算し、プロットします。 </li><li>視覚的に転移性病変に対する各臓器の検査時に肉眼で見えた腫瘍をカウントしたものに、これらの平均値を比較します。 </li></ol>

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</ol>

この記事では、ブルカー・バイオスピン主催のマルチモーダル前臨床イメージングに特別な問題の一部です。

免疫不全マウスで実施されなければならない、ヒト卵巣癌細胞を用いた研究とは対照的に、上述のプロトコルは、免疫C57 / BL6マウスおよび同系マウスの卵巣癌細胞を利用します。これは、腫瘍の進行および転移における免疫浸潤の潜在的な役割の評価を可能にしながら、腹部の表面に黒い髪の存在は、撮像感度が低いレンダリングします。撮像前に毛を除去する脱毛剤の使用は、画像取得を向上させるが、特に長手方向の撮影を必要とする実験のために、時間がかかります。ヘアレス「ヌード」マウスは、このプロトコルで使用することができ、脱毛ベースの脱毛を必要としません。さらに、ヌードマウスは、機能する免疫系を欠いているので、また、免疫系の寄与を分析中であることを特徴とした実験に、ヒト卵巣癌細胞の増殖を評価するために利用することができます。 またintraperの深さということに留意すべきです光学的蛍光イメージングは​​、一般的に5ミリメートルよりも大きな深さで腫瘍を検出しませんようitoneal腫瘍はまた、技術的な課題を提示します。さらに、腹水の罹患率及び腹水腫瘍細胞の存在は、さらなる合併症を提供します。我々は、同じ細胞...

上皮性卵巣癌（EOC）2015年に米国での推定21290新たな診断と推定14180人が死亡1で、婦人科悪性腫瘍による死亡の最も一般的な原因です。女性の大多数（&gt; 75パーセント）が拡散腹腔内転移および予後不良によって特徴づけ後期疾患（ステージIIIまたはIV）と診断されています。ファーストライン化学療法後の腹腔内疾患再発も一般的であり、死亡率2,3の主要な原因を表します。 EOCは、単一細胞または多細胞集合体のような直接の近隣腹膜臓器への原発腫瘍からの伸長だけでなく、原発腫瘍の表面からの細胞の解離または脱落によって両方を含むユニークな機構により、転移します。彼らは剥離誘導アポトーシスレジスト4を特徴とする細胞は、腹腔内に流されています。小屋腫瘍細胞が腹膜リンパドレナージとtをブロックとして腹膜腹水の蓄積は、一般的ですumorsは血管透過性を変化させ、増殖因子を産生します。彼らは固定し、複数の広く普及二次病変3,5を生成するために増殖し、そこで小屋腫瘍細胞の一部は、腸、肝臓、大網および腸間膜を含む腹膜臓器や構造の表面に付着します。血行性転移はまれです。したがって、臨床管理は、一般的に（どんなに小）すべての可視腫瘍の切除のように定義された「最適な減量」を含む腫瘍縮小手術、で構成されていません。完全な細胞減少は、全生存期間6,7の有意な増加と関連していると識別し、病変の除去&lt;0.5 cmという課題に関連しています。 小動物モデルは、疾患の進行の理解を改善するのにも同様に予後バイオマーカーおよび新規な化学療法又は併用療法アプローチのテストの同定卵巣癌研究における有用性​​が証明されています。プライマリとして卵巣癌の発生率および転移の部位が腹腔で、EOC転移の同所性モデルは、腹腔内疾患の分析および特徴づけを伴います。画像腫瘍細胞の能力における最近の改善がなされているが、単一細胞レベルで、まだEOCの転移性腫瘍量を定量化において著しい困難が存在します。これらの課題は数、サイズおよび転移性病変の解剖学的位置に起因し発生します。さらに、正常な宿主細胞と区別するために、癌細胞を標識する必要性が存在します。以前の研究では、抗体ベースの標識プロトコール又はルシフェラーゼ8,9による腫瘍細胞のトランスフェクションを利用しています。癌細胞の直接の蛍光標識は、最初に1997年10で千島および共同研究者によって報告された。蛍光標識は、外因性基質の添加を必要と絶妙な腫瘍細胞特異性を提供する、癌転移11,12を追跡するためのより効果的な手段を提供しません</suP&gt;。 本明細書において、我々は、マウスID8卵巣癌細胞13免疫コンピテントC57 / BL6マウスに赤色蛍光タンパク質（RFP）からなる同系同所性異種移植片モデルを使用して、転移性疾患の定量分析のための光学撮像方法-タグ説明します。私たちは、組織の自家蛍光を除去しながら撮影を生体内で組み合わせ、ex vivoでの相対的腫瘍量の定量化の新規な方法を示しています。この手法は、卵巣癌の臓器特異的な転移に特異的な遺伝子、エピジェネティックなまたは微小環境の改変および/または治療法の効果を評価するために設計された研究において潜在的な有用性を有します。

<table><tbody><tr><td>ダルベッコの修正イーグルミディアム</td><td>コーニング</td><td>10-014-CM</td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児血清</td><td>Gibco</td><td>10437-028</td><td></td></tr>ペ<tr><td>ニシリン/ストレプトマイシンイン</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>スリントランスフェリンナトリウム亜セレン酸培地サプリメント</td>シ<td>グマ</td><td>I-1884</td><td></td></tr>ブル<tr><td>カーエクストリーム小動物イメージングシステム</td><td>ブルカーコーポレーション</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ブルカーマルチスペクトルソフトウェア</td><td>Bruker Corp</td><td></td><td></td></tr><tr><td>レンチウイルス粒子と赤色蛍光タンパク質</td><td>GenTarget, Inc.</td><td>LVP023</td><td></td></tr><tr><td>細胞培養用トリプシン</td><td>Corning</td><td>25-053-CI</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Corning</td><td>21-040-CM</td><td></td></tr><tr><td>脱毛クリーム(Nair Hair Remover Lotionなど)</td><td>ドラッグストアから購入&nbsp;</td><td></td><td>該当しない</td></tr><tr><td>ImageJソフトウェア&nbsp;</td><td>http://imagej.nih.gov/ij/&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>解剖ツール(鉗子)</td><td>Roboz Surgical Instrument</td><td>&nbsp;RS 5130</td><td></td></tr><tr><td>解剖ツール(ハサミ)</td><td>Roboz Surgical Instrument</td><td>RS 5910</td><td></td></tr></tbody></table>

腹腔内卵巣癌転移の定量

Quantitation of Intra-peritoneal Ovarian Cancer Metastasis

上皮性卵巣がん(EOC)は、米国における婦人科悪性腫瘍による主要な死因です。 死亡率は、転移がすでに存在する末期疾患の女性の75%が診断されたことによるものです。 EOCは、びまん性で広く播種した腹腔内転移を特徴としています。 細胞は、腹腔内および大網の内側を覆う中皮の原発腫瘍アンカーから脱落し、多くの場合、腹膜腹水の存在下で多病巣性転移を引き起こします。 私たちの研究室では、EOC転移の成功を調節する要因をより詳細に理解することに力を注いでいます。 ただし、転移性腫瘍量の定量化は、腹膜全体の病変の数が多く、サイズが小さく、広く分布しているため、重大な技術的課題を表しています。 ここでは、赤色蛍光タンパク質(RFP)で標識された細胞とin vivoマルチスペクトルイメージングを組み合わせたEOC転移の解析方法について説明します。 RFP標識腫瘍細胞の腹腔内注射後、マウスは犠牲になるまで毎週画像化されます。 このとき、腹腔を外科的に露出させ、臓器をその場で画像化します。 次に、解剖された臓器を標識された透明なテンプレート上に配置し、生体外で画像化します。 マルチスペクトルアンミキシングを使用して画像処理中に組織自家蛍光を除去することで、相対的な腫瘍量の正確な定量が可能になります。 この方法は、転移を阻害し、それによって全生存期間を改善する可能性のある化合物を評価するための治療研究など、さまざまなアプリケーションで有用です。

卵巣癌の転移機構は、複数の小さい（&lt;2ミリメートル）の病変を含め、種々のサイズの多数の病変からなる高度に拡散腹腔内転移によって特徴付けられます。したがって、RFP標識腫瘍細胞の使用（ 図1）と光学イメージングは、手動の計数および病変サイズの測定に代わる方法を提供します。経時的な腫瘍量の進展は、毎週の腹水の潜在的な存在を評価するためにマウスおよび腹囲の測定を秤量することによって決定することができる。 インビボ光学イメージングは、腫瘍負荷（ 図2）を評価するための補完的なアプローチを提供します。卵巣癌は、腹腔内の複数の部位に転移し、サイト固有の転移の分子ドライバは現時点では不明です。全体の腫瘍負荷の決意に加えて、次の犠牲注意深く切開は、部位特異的PAを評価し、定量化するために行うことができます転移のtterns。したがって、個々の器官のex vivoでの評価（ 図3C、D）と組み合わせてその場で腹膜臓器（ <stro...

卵巣がんの転移は、多数のびまん性腹腔内病変を特徴としており、腫瘍負荷の正確な視覚的定量化は困難です。 ここでは、赤色蛍光タンパク質(RFP)標識腫瘍細胞と光学イメージングを使用して、転移性腫瘍量のin situおよびex vivo定量法について説明します。

Epithelial ovarian cancer (EOC) is the leading cause of death from gynecologic malignancy in the United States.  Mortality is due to diagnosis of 75% of ...

本実験の全体的な目的は、同系正位異種移植マウスモデルにおいて、腹腔内卵巣がん転移の相対的な腫瘍量（tumor burden）を決定することです。相対的な腫瘍量をイメージングおよび定量化するこの新しい手法は、卵巣がん転移の制御に関する重要な疑問を解決するのに役立ちます。この技術の根本的な利点は、蛍光スペクトルのアンミキシング（un-mixing）を行うことで、画像から組織の自家蛍光を除去でき、標準化された相対的腫瘍量の測定が可能になることです。本手法は、治療法の有効性をモニタリングすることに寄与し、ヒト卵巣がんの転移に関する知見を提供します。堅牢なイメージング技術と、画像から定量データを抽出するための分析手順を組み合わせているため、本手法を視覚的に提示することが極めて重要です。本手順の実演は、Stack Labのラボ・プログラムマネージャーであるYueying Liuが行います。腫瘍細胞を10週間成長させた後、麻酔をかけたマウスを1匹ずつ小動物光学イメージングシステムに設置します。各タイムポイントにおいて、コホート内のすべてのマウスをスキャンしてください。蛍光ラベルされた腫瘍細胞を観察するために、マルチスペクトル撮影を行い、計5枚の画像を収集します。標準露光時間を15秒、2×2ビニング、視野を16cm、F値を1.1に設定します。次に、開放励起フィルターと開放 emission フィルターによる白色光を用い、標準露光時間0.2秒、2×2ビニング、視野16cm、F値2.8の条件で、個体全体の反射画像を撮影します。安楽死させた後、尖頭解剖鋏を用いて、マウスの腹側正中線に沿って太ももの上端から肋骨下端まで、前方に向かって皮膚を切開します。腹壁を穿孔しないように注意しながら、皮膚を腹膜組織から慎重に剥がします。次に、肋骨弓の下端と大腿部の上端に沿って外側に向けて切開し、2枚の皮膚フラップを作成します。マウスを腹側を下にしてスキャナーに置き、皮膚フラップを開いた状態で腹腔が下を向くようにします。生体マウスに使用したときと同じパラメータを用いて、臓器がin situの状態にあるマウスをスキャンします。次に、標準的な手法を用いて、肝臓、大網、膵臓、胃、横隔膜、および小腸と大腸を摘出し、解剖を続けます。また、左右の腹膜、卵巣、腎臓、腸間膜、そして最後に脂肪組織を取り除きます。各臓器上の可視腫瘍を観察、計数し、記録します。ノギスを用いて各腫瘍の直径を測定します。直径2 mm未満の腫瘍を「小」、2 mmから5 mmの間を「中」、5 mmを超えるものを「大」と定義します。次に、付属のテキストプロトコルの図4にある臓器スキャン用テンプレートに臓器を配置し、次回のスキャン時に各臓器の配置を整理するために使用します。PBSを用いて臓器に水分を保ってください。小動物光学イメージングシステムを

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ここで説明した中皮クリアランスアッセイは、蛍光標識細胞とタイムラプスビデオ顕微鏡可視化と定量的に卵巣癌多細胞スフェロイドと中皮細胞単層の相互作用を測定するために利用しています。このアッセイは、卵巣癌転移の初期段階をモデル化します。...

in vitroで中皮クリアランスアッセイでそのモデルの卵巣がんの転移の初期段階を

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腹腔内層における卵巣癌転移のモデリング:腹膜内層のin vitro 3Dモデルを確立する方法

腹膜の中皮ライニングに卵巣癌細胞の浸潤は、時間とともに動的なプロセスである。実時間分析器を利用して、回転楕円体、中皮細胞の共培養モデルにおける卵巣癌細胞の浸潤能は、転移のプロセスを調節する因子への洞察を提供し、長期の期間にわたって定量化することができる。...

リアルタイムで中皮細胞の卵巣癌スフェロイドアタッチメントおよび浸潤の評価

卵巣癌の成長と再発の検出、定量化、モニタリングを可能にする非侵襲的な動物イメージングプラットフォームについて説明します。この腹腔内異種移植モデルは、卵巣がん患者の臨床プロファイルを模倣しています。...

卵巣がん再発を検出し、モニターするための非侵襲的イメージングのためのマウスモデル

私たちは、腹膜脂肪組織、特に大網の卵巣癌のコロニー形成を研究するために、in vivoおよびex...

生体内および生体外では腹膜脂肪にミルキースポット構造の卵巣がん転移性コロニー形成を研究するためのアプローチで

ここでは、卵巣癌細胞の接着、浸潤、増殖を調査するツールとして、初代ヒト中皮細胞と細胞外マトリックスで層状にされた線維芽細胞からなる腹腔の内層の3次元in vitroモデルを構築するためのプロトコルを提示します。...

ヒト腹腔器官培養における卵巣癌普及の初期段階のモデル化

卵巣癌の腹膜播種の多段階プロセスを明確にするために、現在の研究では、これらの腫瘍細胞と同所接種を介して元の腫瘍の開発と腹膜転移のマウス実験モデルを提示します。...

オリジナル腫瘍の開発のマウス実験モデルと腹膜転移<em&gt;経由で</em卵巣癌細胞で&gt;同所接種

卵巣癌は腹腔内全体で転移を形成します。ここで確認するためのプロトコルを提案する、使用葉酸受容体ターゲット表面増強共鳴ラマン散乱ナノプローブ レシオ...

表面増強共鳴ラマン葉酸受容体を介して顕微鏡による卵巣癌の検出のためのナノプローブ比を散乱によるターゲット設定

このプロトコルは癌の細胞大網の相互作用の三次元(3D) ex vivo...

ヒト大網を用いた卵巣癌腹膜転移の Ex vivo モデル

ここでは、卵巣がんの進行、転移、治療反応を研究するための、腹膜内腫瘍モデルおよび滑液内腫瘍モデルを確立するためのステップバイステッププロトコルを示します。さらに、これらのモデルでルシフェラーゼを用いた非侵襲的なin vivo画像診断を用いてマウスの腫瘍進行を監視する方法も説明します。...

転移性卵巣がんおよびマウスの治療反応を研究するための臨床的に関連性の高い移植可能な腫瘍モデル

学ぶ 卵巣癌の腹腔内転移における腫瘍負荷の定量法。RFP標識細胞と蛍光スペクトル分離技術を用いて、マウスモデルで組織自己蛍光を除去し、治療効果モニタリングのための正確なイメージングを実現します。

腹腔内卵巣癌転移の定量

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