Name: 攻撃を研究するための取り扱いがなくなり新たなアプローチと「敗者」の影響でキイロショウジョウバエ (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-12-30T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 19 s
Description: 学ぼう、取り扱いを排除した新しいチャンバーを用いたDrosophila melanogasterの攻撃行動研究法。ストレス軽減により勝者・敗者効果の測定精度が向上し、行動パラメータのばらつきを最小化できます。

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この研究は、資金提供者は、研究デザイン、データ収集と分析、公開することを決定、または原稿の準備で何の役割を持っていたEAKする総合医科学研究所（GM099883とGM074675）からの助成金によってサポートされていました。 （：接触私達は行動装置の設計のためのハーバード大学医学部での私たちのマシンショップの人に感謝<a href="http://mikesmachine.com">http://mikesmachine.com）。</a> 著者の貢献：STは、BCは行動の装置を設計しました。 STは、実験プロトコルを設計し、最適化されています。 STとBCは実験を行ったと分析しました。 ST、EAKとBCは、紙を書きました。

注：以下は、私たちは男性ミバエ（キイロショウジョウバエ）のペア間の侵略の信頼性の高いトリガを可能にするために使用する実験プロトコールのステップバイステップの説明です。この手順は、「敗者」効果の形成を誘導します。このプロトコルを使用して、短期的な「勝者」効果も最近5,6を報告されている。 図1は、行動実験のタイムラインを示しています。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/53395/53395fig1.jpg" /> 攻撃実験の1タイムライン図 。 1日目に、（翼が黒くなる）後期のオス蛹は、新たに調製した分離バイアル中に分離されています。大人として浮上した後、5日目に、4日齢の雄のハエを CO 2で麻酔し、識別目的のために、異なる色で塗装。 7日目に、食品のカップや戦闘室があります行動実験を設定するために用意しました。二6-7日齢の成人男性は、チャンバー内にロードし、対話することができますされている。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53395/53395fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> 1. 1日目：蛹の社会的孤立<ol><li>上げて、25℃、相対湿度50％で、環境的に制御12時間の明/ 12時間暗サイクルインキュベーターでフライストックを維持します。 </li><li>溶融するまで加熱新鮮なフライ食品：アイソレーションバイアルを準備します。パスツールピペットを用いて、単一の空のガラス試験管（1.6×10 cm）の中に約1.5ミリリットル溶融フライ食品のを転送します。食べ物が固化することを許可します。 </li><li>蛹を分離：（羽が黒くなるとき）細かい絵筆を使用すると、静かに株式バイアルから後期のオス蛹を削除し、新たに調製された食品を含む試験管の側に置きます。綿との密接なアイソレーションバイアル（ 図2）。 </li><lI&gt; 25℃、相対湿度50％で12時間の明/ 12時間暗インキュベーターに蛹を含むプレイス分離バイアル。 </li></ol><img alt="図2" src="/files/ftp_upload/53395/53395fig2.jpg" /> 図2.社会的孤立。ワン後期オス蛹は、新たに調製し、分離バイアル側に配置されています。蛹を含む分離バイアルを25℃、相対湿度50％で12時間の明/ 12時間暗インキュベーターに入れている。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53395/53395fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> 2. 5日目：個体識別の目的のためにハエを絵画<ol><li> CO 2麻酔の負の影響を最小限にするために4日齢の雄ハエや行動実験前に2日で5日目に、この手順を実行します。 </li><li> CO 2でハエを麻酔。 </lI&gt; <li>細かい爪楊枝で、胸部にアクリル塗料の小さなドットを配置します。頭、翼、腹部や脚（ 図3）に塗料を置かないでください。 </li><li>約10秒のためのペイント乾燥させ、ゆっくり元の分離バイアルに戻ってハエを転送します。 </li><li> 25℃、相対湿度50％で12時間の明/ 12時間暗インキュベーターに分離バイアルを返します。 </li></ol><img alt="図3" src="/files/ftp_upload/53395/53395fig3.jpg" /> 図3.個人識別。CO 2でハエを麻酔した後、アクリル絵の具の小滴は、胸部に適用されます。個体識別の目的のために、異なる色の（白ここ青）が使用されます。この段階でのCO 2の使用に関する以下の説明を参照してください。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53395/53395fig3large.jpg" target="_blank">このfiguの拡大版を表示するには、こちらをクリックしてください</a>再。 3. 7日目：装置の準備<ol><li>食品カップを準備します。 <ol><li>それが溶けるまで新鮮なフライ食品を加熱します。 </li><li>パスツールピペットを用いて、スクリューキャップバイアル（直径1.5cm、1cmの高さ）の蓋に約0.8ミリリットル食品を転送し、冷却します。気泡を避けてください。 </li><li>数滴の水とドライイーストを混合することにより、新鮮な酵母ペーストしてください。ときに厚い、爪楊枝（ 図4）を有する食品カップ表面の中央に酵母ペーストの小滴を適用します。 </li></ol></li></ol><img alt="図4" src="/files/ftp_upload/53395/53395fig4.jpg" /> 食品カップの準備図4。食品カップ、新鮮なフライ食品を用いて調製されます。食品固化した後、酵母ペーストのドットは、食品カップ面の中央に配置されている<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53395/53395fig4large.jpg" target="_blank">。Vにはこちらをクリックしてください</a>この図の拡大版をIEW。 <ol start="2"><li>個々の戦闘室を準備します。 <ol><li>使用前に完全に水で毎回装置および個々の戦闘室を洗います。使用前にペーパータオルで乾燥。 </li><li>各戦闘室の中心に食品カップを置き、パテのドロップで所定の位置に固定します。 </li><li>装置の蓋（ 図5）との戦闘室をカバー。 </li><li> 25℃での高湿度環境（60％）に装置を置きます。 </li><li>戦闘室を照らすと、上から記録するビデオカメラを設定するには、装置の上に光源を配置します。 </li></ol></li></ol><img alt="図5" src="/files/ftp_upload/53395/53395fig5.jpg" /> 図5.個々の戦闘室を準備。表面上の酵母ペーストのドットと新たに調製された食品カップを洗浄し、個々 Fi接続に固定されていますチャンバーをghting。チェンバースは、個々の戦闘室に不透明なプラスチック分配器の挿入を可能ツーピースカバーで閉じられている。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53395/53395fig5large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> 4. 7日目：行動実験<ol><li> 6-7日齢の雄のハエと行動実験を実行します。 </li><li>各戦闘室にプラスチック製の仕切りを挿入します。 </li><li>分離管から綿のプラグを外し、装置の側面に開いた穴の下にチューブを置きます。 </li><li>ハエは、通常、数秒以内に、負の走地性により戦闘室に入るみましょう。 </li><li>フライ、チューブを残し、室内に入った後、スライドの壁を閉じます。 </li><li>装置の他の側の戦い室に第2のフライを導入する手順を繰り返します。 </li><li>裏面照射videotapiで装置を配置ngの位置。 </li><li>ビデオ録画を開始し、ハエが対話できるようにプラスチック製の仕切りを取り外します。 <ol><li>攻撃実験のために： <ol><li>これらの実験では、レコードは、強い支配関係の形成を確実にするために、少なくとも20分間戦います。 </li><li>所望の期間が経過した後、録画を停止します。 </li><li>上記の手順を逆にすることによって戦闘室からハエを削除します。 </li><li>徹底的にそれぞれ使用し、すすぎ後の中性洗剤と水で行動装置を洗います。 </li></ol></li><li> 「敗者」効果実験のために： 注：これらの実験では、最初の戦いは、調整段階と試験段階である第2の戦いと考えられます。戦いの間に残りの期間が異なることがありますが、10分には、強力な「敗者」効果を形成することができます。 <ol><li>最初の戦いを実行するために、上記の手順に従ってください。 </li><li>重要なステップ：「敗者」の考え方の形成を誘導するために、電子最初の戦いは、少なくとも20分、強力な支配関係を確立するために長いnsure。 20分後、ハエを分離するために戦闘室にプラスチック分割器を再挿入します。 </li><li>残りの10分の期間の後、静かにハエが第二の戦いのために対話できるようにプラスチック製の仕切りを取り外します。 </li><li>第20分の戦いの終わりには、ビデオの録画を停止します。 </li><li>上記のように行動室からハエを削除します。 </li><li>もう一度、徹底的行動装置を清掃してください。 </li></ol></li></ol></li></ol> 5.行動分析<ol><li>ムービーを転送<ol><li>パソコンにカメラを接続します。 </li><li> 「選択したクリップを結合する「ビデオ変換ソフトウェアおよびオプションを使用して、ハエを.MOVと一緒に映画のクリップを結合するためにハエの.MTSに変換します。 </li><li>ビデオ・リーダー・ソフトウェアと各ムービーを観察し、分析します。 </li></ol></li><li>採点行動 注：これは手動で行うか、私たちすることができます利用可能な場合の行動解析プログラムソフトをる。下の図は、「敗者」効果の可能な手動分析を説明しています。 <ol><li>食品カップにハエ間の最初の出会いの時間をスコアし、最初の突進の出現の時間（1フライに高い上昇する行動パターン（出会いは、少なくとも2秒続くハエのペア間の相互作用がある）、その後ろ足とダウンのスナップと）相手をつかむしようとします。次に、（最初の出会いと最初の突進の間の間隔）を突進する待ち時間を獲得。 </li><li>戦いの間に出会いと突進の合計数をカウントします。 注：必要に応じて、1は、例えば、翼の脅威、ボクシング​​、フェンシング、後退または最初の突進前の出会いの数のように、他の行動パターンを獲得することができます。 </li><li>支配の確立時のスコア（最初の出会いの間の時間、もう1つは食品カップ後方から3回連続リトリートを飛ぶ時間突進を受けえー）。飛ぶ注意が勝者とする戦いの敗者です。 </li></ol></li><li> 「敗者」効果を計算<ol><li>以前の敗者は、2 番目の戦い（失う敗者：LL）を失うする戦いの数で割り戦いの総数では、得られた割合は「敗者」効果を表して100を掛け： [（＃はLLを飛ぶ）/（＃総戦い）]×100 </li><li> 「敗者」効果が50％の期待値と統計的に異なるかどうかを比較するためにカイ二乗検定を使用してください。 </li></ol></li></ol>

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著者らは開示するものは何もない。

侵略の研究のためのモデル生物としての強力な遺伝的方法とショウジョウバエを用いて、現代の時代には、信頼性の高い戦闘行動はハエ1,7の単一ペアを得ることができた新規な実験アリーナの導入により、十数年ほど前始まりました8,17,19。これらのアリーナは、所望のリソース（食品カップ、潜在的な仲間）と敗者のためのスペースがに撤退を飛ぶが含まれています。これらのアリーナで得られた結果は、ミバエの戦いの行動についての予備知識に加えられた場合には、 キイロショウジョウバエは、しっかりと攻撃性のような複雑な挙動を調べるための非常に望ましいモデル系として設立され、多くの研究室で使用されています。 （a）は食料資源、仲間にアクセスするためのまたは地域14,15の防衛のために競争の中で展示侵略を飛ぶ;得加算結果は、ことを明らかにしました（B）の戦いは、ステレオタイプの行動パターン1の連続的な一連の構成されています。 （c）は男性と女性のハエは、（いくつかのパターンが特定の男性で、いくつかは、特定の女性であり、一部は男...

動物系での攻撃が強く、食品、領土や仲間のような資源の獲得と保持に関連しています。これは、個人の適応に果たす重要な役割を考えると、それは侵略は動物界全体で進化してきたことは驚くべきことではありません。直接個人に利益をもたらす適応形質として、強力な学習と記憶コンポーネントは、攻撃に関連している。社会的地位のための競争では、前回の戦いの経験が、後にコンテストの結果に影響を与えます。一般に、従来負け経験が増加し、そして勝利経験が減少し、後コンテストを失う確率は、（「敗者」と「勝者」効果と呼ばれます）。 「敗者」の効果は、種の広い範囲で観察されている、といくつかの報告は、「勝者」の効果は、通常より短い期間2,10,11のものでありながら、これらは数日間続く ​​ことができることを示唆しています。 攻撃的な行動の最初の報告ショウジョウバエ（D. ampelophila）で性別認識や性別の選択12に関する論文で1915年にスタートバントによるものでした。半世紀後、男性の果物のより完全な検査は侵略を飛ぶミバエの戦いの間に観察された行動パターンのほとんどが記載されている、行われました。これらの実験は主に13-15時間にわたって観察オスとメスのハエの小グループで行いました。最近では、強力な遺伝子ツール、ダイアディック同性の戦いのセットアップと観察、Dの短い時間を加えましたショウジョウバエは侵略1,16の生物学の研究のための重要なモデル系として浮上しています。男性と女性のハエの同性ペア間の戦いの分析は、侵略は、その統計的に信頼できる方法1,17で一方から他方への移行ステレオタイプの行動パターンを伴うことが示されました。他の人が戦いで観察しながら観察行動パターンの中には、性別固有のものです男女ともsです。男の戦いは、女性の戦いよりも高い強度レベルに移動し、明確な「勝者」と「敗者」との支配関係の形成をもたらします。現在では、多くの研究室は、生化学18、神経7,19-21、および攻撃性の遺伝的基盤22を調査し始めています。残念ながら、戦いのダイナミクスと支配関係の形成と維持への洞察を得るための研究のメタ分析は、異なる実験室で実験手順を多数の使用に問題があります。基本的に文献に記載された技術のすべては、競技場の外にハエを転送するために競技場19,23,24へと行動実験3,4の間にそれらを導入するハエの取り扱いと操作を伴います。ジェントル吸引がハエ3,4,23-25 ​​を操作するための最も一般的な方法ですが、寒さやCO 2麻酔にもかかわらず、P、9,26をも使用されていますrevious研究はすでにこれらの手順は、ハエの行動27,28に有害な影響を持っていることを報告しています。少なくとも24時間の期間は、動作29,30への影響を最小限にするために任意の麻酔薬の使用後に推奨されます。 ハエは、前の戦いの経験から学び、学習と記憶が同行し、アゴニストの出会いの結果であることを示唆し、新しい状況で彼らの行動パターンの使用量を変更します。その意味で、戦いは戦略が働いていることを学び、その後の遭遇の間にますます頻繁にそれを使用飛ぶいるオペラント条件付け学習状況に似て飛びます。支配関係が受賞者はますますと敗者少なくを突進して、戦いの間に確立された後、ハエは、彼らの戦いの戦略を変更します。分離の期間の後、以前の敗者は、はるかに従順行動を示し、ナイーブFLと対になったときに2 番目の戦いを失う可能性が高いですIESまたは以前の受賞者3,4。しかし、ハエの取り扱いを除外実験手順が存在しないことは、困難な「敗者」の効果の詳細な検討を行いました。最近の研究では、日常の取り扱いがなくなり新しいプロシージャに対する行動室にハエを導入する研究室（吸引及び冷麻酔）で使用される2つの実験手順を比較しました。結果はコールド麻酔が吸引よりも攻撃性にはるかに大きな負の影響があったが、あっても吸引がハエによって攻撃性のレベルを減少させることを示しました。吸引は、しかし、攻撃性を伴う学習と記憶に非常に重大な影響を与えるでした。ハエの取り扱いが実験手順5,6から除去されたときに、2つの実験手順（吸引なしの取り扱い）、強固な「敗者」効果と同一のプロトコルに続いてのみ観察されました。 理想的には、ラボでのショウジョウバエの侵略の研究ratoriesは通常、（リソースの競合、領土防衛するとスペースが脱出するために）野生で遭遇飛ぶ環境の状況を含める必要があります。また、実験条件は確実に（麻酔薬としてのCO 2の使用を制限、動物の取扱いを最小限に抑えるようにしてください、と実験手順を標準化）、誘導検査中の行動を観察し、解釈するために最適化する必要があります。ほとんどまたはこれらの問題のすべてを解決しようとすると、我々は中と行動アリーナにそれらを導入した後、前にハエの取り扱いがなくなり、新しい行動の装置を設計しました。これらの装置では、ハエがにとの戦い室の外に移動して転送するために彼らの生得的な負の走地性を使用しています。ハエの処理を排除することによって、プロトコルはを目指して：（a）は、個人間での行動変動性を減少させます。ハエが相互作用し、明確な支配関係（オス）を生成するための（b）に必要な時間を短縮します。 （c）確実に十分に強いbehavioを誘導RAL変化は、「敗者」効果の形成を可能にします。 このプロトコルは、新しい実験装置と侵略を分析すると Dに強い「敗者」効果の形成を可能にするためにステップの手順を追って説明しますメラノ。我々は、この行動の装置は簡単にミバエが示す他の社会的行動の研究のために適合させることができることを期待しています。

<table><tbody><tr><td>ショウジョウバエ メラノガスター 蛹</td><td>ブルーミントンストックセンター</td><td></td><td></td></tr><tr><td>スタンダードフライフード</td><td></td><td></td><td>自社で製造.&nbsp;</td></tr><tr><td>ビヘイビアチャンバー</td><td>マイクマシン</td><td></td><td>社内で製造。直接&nbsp;詳細については、会社にお問い合わせください。</td></tr><tr><td>ホウケイ酸ガラスバイアルVWR</td><td>インターナショナル&nbsp;</td><td>47729-576</td><td>16 x 10 mm</td></tr><tr><td>コットン</td><td>フィッシャーブランド</td><td>22-456-881</td><td>どのブランドでも使用できます</td></tr><tr><td>パスツールピペット</td><td>VWR インターナショナル&nbsp;</td><td>53300-567</td><td></td></tr><tr><td>絵筆&nbsp;</td><td>ブリックアート素材</td><td>06157-7030</td><td>ラウンド、サイズ3/0</td></tr><tr><td>つまようじ</td><td>N / A</td><td>N / A</td><td>任意のブランドを使用できます</td></tr><tr><td>アクリル塗料(青/白)</td><td>ブリックアート素材</td><td>01637-5172 / 01637-1022</td>任意の<td>ブランドを使用できます</td></tr><tr><td>乾燥活性酵母</td><td>シグマ</td><td>YSC2-500G</td><td></td></tr><tr><td>スルーキャップチューブ</td><td>VWRインターナショナル&nbsp;</td><td>10011-394&nbsp;</td><td>直径15mm、高さ10mm</td></tr><tr><td>エッペンドルフ</td><td>VWRインターナショナル&nbsp;</td><td></td><td></td>22363212</tr><tr><td>テープ</td><td>N/A</td><td>N/</td><td>A 任意のブランドが使用可能</td></tr><tr><td>プラスチックスライス</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>70329-40 22</td><td>x 40 x 0.25 mm 厚さ</td></tr><tr><td>光源(電球)</td><td>VWR International&nbsp;</td><td>500003-418</td><td>任意のブランドを使用できます</td></tr><tr><td></td><td>タイマーVWRインターナショナル&nbsp;</td><td>62344-641</td><td>任意のブランドを</td></tr><tr><td>使用することができます インキュベータ</td><td>ーパーシバル</td><td></td><td>詳細については、コンストラクタに直接お問い合わせください。</td></tr><tr><td>二酸化炭素ドライ(CO2)</td><td>Medical-Technical Gases, Inc</td><td>14H31</td><td></td></tr><tr><td>双眼鏡</td><td>ニコン</td><td>SMZ-745</td><td>どのブランドでも使用可能</td></tr><tr><td>カメラ(ソニーハンディカム&nbsp;HDR-CX330)</td><td>B&H</td><td>SOHDRCX330B</td><td>任意のブランドを使用することができます</td></tr><tr><td>コンピュータ</td><td></td><td></td><td>1.4 Ghz 以上のプロセッサを搭載し、Microsoft Windows または Machintosh HD</td></tr><tr><td>ClipWrap</td><td>をオンラインで</td><td></td>ダウンロード <td>任意のインポート ソフトウェアを使用することができます</td></tr><tr><td>QuickTime Player</td><td>オンライン</td><td></td>をダウンロード <td>任意の読み取りソフトウェアを使用できます</td></tr><tr><td>GraphPad ソフトウェア</td><td>オンライン</td><td></td><td>任意の統計ソフトウェアを使用できます</td></tr></tbody></table>

攻撃を研究するための取り扱いがなくなり新たなアプローチと「敗者」の影響で<em&gt;キイロショウジョウバエ</em

A New Approach that Eliminates Handling for Studying Aggression and the "Loser" Effect in Drosophila melanogaster

キイロショウジョウバエでの積極的な行動はステレオタイプの行動パターンの連続的な表現で構成されている（分析のための1を参照）。この複雑な挙動は、遺伝子、ホルモン、および環境因子によって影響されます。多くの生物のように、前回の戦いの経験は、ハエの戦いの戦略とそれ以降のコンテストの結果に影響を与える：戦いを失うことは可能性が学習と記憶2-4を伴う 「敗者」の効果を明らかにし、後でコンテストを失う確率が高くなります。侵略のような複雑な社会的行動の発現を伴う学習と記憶は、動物5,6のテスト前の取り扱いに敏感です。多くの実験手順は、侵略7-9を研究するために別の研究室で使用されている、ハエの取り扱いを除外しかし、日常的に使用されるプロトコルは、現在入手可能です。ここでは、insteaを使用して、ハエの取り扱いがなくなり、新しい行動の装置を報告D彼らの生来の負の走地性の応答は、にや戦闘室の外に動物を移動します。このプロトコルでは、食品のカップを含む小さな円形の戦いアリーナ前ハエの導入に取り外し可能なプラスチック製のスライダーによって2等分されています。ハエは、チャンバドアと走地性をスライドを経由して自宅分離バイアルからチャンバーを入力してください。プラスチックスライダーを除去すると、ハエが相互に作用するのは自由です。指定された期間の後、ハエは、その後の実験のためのスライダによって再び分離されています。このすべては、個々のハエの取扱いことなく、容易に行われます。この装置は、ハエの戦いで「敗者」効果の形成を含む侵略と関連する学習や記憶を研究するための新しいアプローチを提供しています。また、この新しい汎用行動装置は、ハエの他の社会的行動を研究するために使用することができると、一般的には、基本的な行動プロセスの経験に関連した変化を調査するための関心を持たれるべきものです。

このセクションでは、行動室の設計と侵略と「敗者」効果の形成を測定する上述のプロトコルを、以下の行動実験の典型的なセットの分析を提示します。また、この装置を用いて測定することができる他の行動のサンプルが示されています。 図6は、新たな装置の概略図を示します。戦闘室のとおりです。装置は、3つの円筒形のウェル（22.86ミリメートル直径17ミリメートル、高さ寸法）で構成されています。ツーピースカバーは上部の戦闘室を閉じて、2つの等しい部分にチャンバーを分割薄い不透明なプラスチックの分周器を挿入することができます。装置の各側には、3つの穴（15.88ミリメートルの直径）で壁をスライドすると、それらの単離バイアルから直接負の走地性により戦闘室にハエの読み込みを可能にします。ハエが戦闘室を入力した後、スライド壁が使用されていますdは全てのチャンバの側面を閉じます。この時点では、2つのハエは戦いアリーナ内にあるが、分周器による対話することはできません。これらを除去することにより、ハエが相互に作用して自由であり、その後の行動パターンを観察し、記録することができま...

ミバエの戦いの間に、行動パターンが見られ、ダイナミクスを戦うし、学習や記憶が実験条件によって影響される関連します。ここで紹介するプロトコルは、完全に実験中にハエの取り扱いがなくなり新たな手順を説明します。これは戦いのダイナミクスを向上させ、強力な「敗者」の効果を形成することができます。

Aggressive behavior in Drosophila melanogaster is composed of the sequential expression of stereotypical behavioral patterns (for analysis see 1). This ...

この手法の全般的な目的は、行動手順からハエのハンドリングを排除することで、キイロショウジョウバエ（Drosophila melanogaster）における「敗者効果」および「勝者効果」の形成を導入することです。研究室環境で実施される動物行動学研究の多くには、動物のハンドリングが含まれています。しかし、動物をハンドリングすることは通常、動物にストレスを誘発し、そのストレスが実施しようとしている行動研究を妨げる可能性があるため、ストレスとなるハンドリングの排除を試みています。ショウジョウバエの攻撃性研究において、実験前、実験中、および実験後の個体操作を完全に排除した新しいチャンバーを開発しました。この新しいチャンバーを用いることで、測定したすべての行動パラメータにおいて改善が見られました。本手法を用いることにより、個体間の行動上のばらつきを最小限に抑えることが可能です。明確な優位関係を形成するために必要な時間を短縮し、強力な敗者および勝者のメンタリティを誘導することができました。これらのチャンバーは使いやすく、ショウジョウバエのさまざまな行動研究に多目的に利用可能です。実験を開始するには、25 °C、相対湿度 50% の 12 時間明暗サイクルインキュベーター内で、フライストックを飼育・維持してください。次に、新鮮なショウジョウバエ培地を加熱して溶かし、分離用バイアルを準備します。パステールピペットを使用して、溶けた培地約1.5 millilitersを空のガラス試験管に1本ずつ移し、細い絵筆を用いて培地を凝固させます。ストックバイアルから後期の雄の蛹を慎重に取り出し、新しく準備した培地が入った試験管の側面に配置します。分離用バイアルを綿で閉じ、インキュベーターに保管します。分離後、ハエの塗装準備が整います。二酸化炭素でハエを麻酔し、その後、細い爪楊枝を用いて操作します。アクリル塗料を胸部に少量塗り、頭部、翅、腹部、または脚に塗らないようにします。塗料を約10秒間乾燥させた後、ハエを慎重に元の隔離バイアルに戻します。隔離バイアルをインキュベーターに戻します。新鮮なショウジョウバエ用培地を加熱して溶かし、器具の準備を続けます。後方ピペットを使用して、0.8 millilitersの培地をスクリューキャップバイアルの蓋に移し、培地を冷却させます。培地が冷めたら、新鮮な酵母ペーストを少量の滴として、フードカップ表面の中心に塗布します。使用前に毎回、装置と個々の闘争チャンバーを水で洗浄し、ペーパータオルで乾燥させてください。次に、フードカップにパテを1滴塗り、各闘争チャンバーの中心に配置します。装置の蓋で闘争チャンバーを覆います。蓋をした装置を光源の下に配置し、構造体の上にビデオカメラを設置します。各闘争チャンバーにプラスチック製の間仕切りを挿入し、行動実験を開始します。分離チューブから綿栓を取り外し、装置側面の開口部の下にチューブを配置します。負の地軸（negative geo axis）により、ハエが闘争チャンバー内に入るようにします。その後、スライド壁を閉じます。ハエがチャンバーに入った後、同様の手順を繰り返し、装置の反対側から2匹目のハエを闘争チャンバー内に導入します。次に、装置を照明付きのビデオ撮影位置に戻します。ビデオ録画を開始し、プラスチック製の仕切りを取り除いて、敗者効果（loser effect）の実験のためにハエ同士を相互作用させます。強力な優劣関係が形成されるよう、最初の闘争を20分間記録します。20分後、プラスチック製仕切りを闘争チャンバーにゆっくりと戻してハエを分離し、ビデオ録画を停止します。強い敗北感を誘発させるために、最初の闘争中にハエの間で優劣関係が確立され、維持されていることを確認し、仕切りを挿入して分離させる際は動物への刺激を最小限に抑えてください。10分間の休息後、録画を開始し、プラスチック製仕切りをゆっくりと取り除きます。さらに20分間、ショウジョウバエに相互作用させます。20分後に記録を停止し、実験を終了します。最初の闘争を観察するために用いた新しい方法の前に記載された手順を逆に行い、負の幾何学的軸（negative geo axis）に沿って、行動チャンバーからショウジョウバエを取り除きます。平均して、最初の遭遇は2分後に観察されます。最初の突進は4分後に起こり、ハエは8分後に優位関係を確立します。残りの12分間で、その優位関係が強化されます。勝者はより積極的に突き進み、敗者はより後退します。この新しいアプローチを用いて、2回目の闘争において敗北する敗者の割合である「ルーザー効果」を定量化しました。以前に敗北した個体を、2回目の闘争において既知の勝者または未知の勝者とペアにしたとき、有意な効果が観察されました。この手順を行う際は、社会的隔離状態で飼育した生後6〜7日の雄のショウジョウバエを用いて攻撃性アッセイを行うことが重要です。これらのチャンバーに習熟すれば、個体を一切直接的に扱うことなく、ハエの導入、モニタリング、相互作用、および分離が容易になり、強力な「敗北者効果（loser effect）」を誘導できます。最初の闘争後にディバイダーを用いてハエを分離することで、実験プロトコルのバリエーションを持たせることが可能です。勝者を維持し、2回目の闘争で異なる相手とペアにすることで、ウィナー効果を誘導することができます。わずかな調整を行うことで、同じチャンバーを用いてショウジョウバエの求愛行動、移動能力、およびその他の社会的行動を研究することが可能です。このビデオを視聴することで、攻撃性アッセイの実施方法と、実験前および実験中にハエを操作することなくルーザー効果を誘導する方法について、十分に理解できるはずです。

a-new-approach-that-eliminates-handling-for-studying-aggression-loser

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

ショウジョウバエの勉強攻撃（ミバエ類）

ショウジョウバエの幼虫は味覚報酬で匂い刺激を関連付けることができます。ここでは、食欲の連想嗅覚学習の分析を可能にする単純な行動パラダイムを記述します。...

で食欲連想嗅覚学習<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;幼虫

攻撃性は生まれつきの行動であり、以前の戦闘経験はハエでの戦闘戦略とその後の競技結果に影響を与えます。このビデオでは、ショウジョウバエの攻撃的な行動を研究するために使用されるアッセイについて説明しています。この例のプロトコルは、ハエの取り扱いを排除し、したがって、被験者のパフォーマンスに影響を与えるであろう動物のストレスを軽減するセットアップで実行されるアッセイを特徴としています。...

ショウジョウバエアグレッションアッセイ:ハエの行動可塑性をテストする方法

ここでは、ストレスを受けた個人の回避を定量化するためのプロトコルを提示します。このパラダイムは強力でありながらユーザーフレンドリーであり、Drosophila...

社会回避での定量化のための簡単​​なアッセイキイロショウジョウバエ

このプロトコルは、Drosophila melanogasterの産卵嗜好を単一動物の解像度でテストするためのハイスループットアッセイを説明しています。...

個々の産卵環境を調べるために、ハイスループットアッセイ<em&gt;キイロショウジョウバエ</em

私たちは、報酬の状態の変化の指標として自主的なエタノール消費を使用して、ミバエ（ キイロショウジョウバエ ）にやりがいとnonrewarding経験を誘導するためのプロトコルについて説明します。...

使用して報酬を求める行動の変化を測定するための簡単な方法<em&gt;キイロショウジョウバエ</em

この研究は、成体果実ハエにおける回避的な連想学習の分析を可能にする単純な行動パラダイムを記述する。この方法は、特定の環境コンテキストと感電との間に形成された関連付けによる自然負のジオタキシス行動を抑制することに基づいています。...

ショウジョウバエ 連想回避学習を研究する新たなパラダイムとしての受動的回避行動

自閉症スペクトラム障害(ASD)は、社会的およびコミュニケーション的行動の障害と反復行動の出現に関連しています。 ショウジョウバエ モデルにおけるASD遺伝子と行動障害との相互関係を研究するために、この論文では、社会的間隔、攻撃性、求愛、グルーミング、および慣れ行動を分析するための5つの行動パラダイムについて説明します。...

自閉症スペクトラム障害の ショウジョ ウバエモデルにおける行動評価のパラダイム

ここで紹介する方法は、特定のグルーミング行動のために Drosophila melanogaster...

過剰なグルーミング表現型の評価のための ショウジョウバエメラノガスター グルーミング行動の定量化

このプロトコルは、従来の哺乳類モデルに代わるものとして、自発運動機能障害の定量化を通じてショウジョウバエの神経毒性を評価するためのハイスループットで費用対効果の高い方法を提供します。これは、高感度で再現性があり、倫理的に有利なモデルを使用して、医薬品化合物、環境剤、または遺伝子組み換えの神経毒性効果を評価することを目的としています。...

神経毒性のリードアウトとしての Drosophila melanogaster の自発運動機能障害の行動解析

学ぼう、取り扱いを排除した新しいチャンバーを用いたDrosophila melanogasterの攻撃行動研究法。ストレス軽減により勝者・敗者効果の測定精度が向上し、行動パラメータのばらつきを最小化できます。

攻撃を研究するための取り扱いがなくなり新たなアプローチと「敗者」の影響で

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