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可溶性タバコの煙抽出物によって損傷した後のマウス間葉系幹細胞の移動の変化を検出するために創傷スク...
可溶性タバコの煙抽出物によって損傷した後のマウス間葉系幹細胞の移動の変化を検出するために創傷スク...
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JoVE Journal Developmental Biology
Optimization of the Wound Scratch Assay to Detect Changes in Murine Mesenchymal Stromal Cell Migration After Damage by Soluble Cigarette Smoke Extract

可溶性タバコの煙抽出物によって損傷した後のマウス間葉系幹細胞の移動の変化を検出するために創傷スクラッチアッセイの最適化

Full Text
17,641 Views
08:40 min
December 3, 2015

DOI: 10.3791/53414-v

Nicholas Cormier*1, Alexander Yeo*1, Elizabeth Fiorentino1, Julia Paxson1

1Department of Biology,College of the Holy Cross

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This article presents a migration assay designed to quantify changes in the migratory capacity of lung mesenchymal stromal cells (MSCs) after exposure to soluble cigarette smoke extract. The method is optimized for better quantitative measurements while remaining economical and customizable.

Key Study Components

Area of Science

  • Cell migration
  • Lung regenerative biology
  • Mesenchymal stromal cells

Background

  • Mesenchymal stromal cells play a crucial role in tissue repair.
  • Quantifying migratory capacity is essential for understanding cell behavior post-damage.
  • Existing methods may lack rigorous statistical analysis.
  • This study focuses on lung MSCs and their response to environmental stressors.

Purpose of Study

  • To detect changes in MSC migratory capacity after damage.
  • To improve understanding of lung progenitor cell migration.
  • To provide a reliable method for assessing cell migration in regenerative biology.

Methods Used

  • Scratch assay to quantify cell migration.
  • Use of soluble cigarette smoke extract to induce damage.
  • Growth of MSCs in complete media on 60 mm plates.
  • Statistical analysis to assess changes in migration.

Main Results

  • Demonstrated the impact of cigarette smoke extract on MSC migration.
  • Provided quantitative measurements of migratory capacity.
  • Showed that the scratch assay can effectively measure changes in cell behavior.
  • Highlighted the importance of confluence for accurate imaging results.

Conclusions

  • The assay is a valuable tool for studying MSC migration.
  • It can help answer critical questions in lung regenerative biology.
  • Future applications may lead to improved strategies for lung repair.

Frequently Asked Questions

What is the main goal of the migration assay?
To detect changes in the migratory capacity of lung mesenchymal stromal cells after damage.
How does the scratch assay work?
The scratch assay quantifies cell migration by creating a scratch in a cell monolayer and measuring the closure over time.
What is the significance of using soluble cigarette smoke extract?
It simulates environmental damage to study its effects on lung progenitor cell migration.
Why is confluence important in this assay?
Proper confluence ensures accurate identification of scratch boundaries for imaging analysis.
Can this method be customized?
Yes, the assay is designed to be easily adaptable for various experimental needs.
What are the advantages of this migration assay?
It provides better quantitative measurements and is economical to perform.

移動能力は、間葉系間質細胞(MSC)を含む多くの異なる細胞タイプの重要な機能です。しかし、被害後の回遊能力の変化を定量化することは困難です。このプロトコルは、損傷後のMSC遊走能力の変化を定量化するために厳密な統計を使用する、容易に適応可能な遊走アッセイを説明しています。

このアッセイの全体的な目標は、可溶性タバコの煙抽出物による損傷後の肺間葉系間質細胞の遊走能力の変化を検出することです。この方法は、肺再生生物学の分野における重要な疑問、例えば、肺前駆細胞の遊走能力をどのように改善して肺の修復を助けることができるかなど、その答えとして使用することができます。この技術の主な利点は、細胞移動の定量測定を改善しながら、経済的に実行でき、カスタマイズも容易であるように最適化されていることです。

このデモンストレーションでは、スクラッチアッセイを使用して、マウスの肺間葉系間質細胞(MSC)の遊走能力を定量化します。可溶性タバコの煙抽出物に曝露した後、MSCは60ミリメートルプレート上の完全な培地で成長し、プロトコルテキストに記載されているように損傷を受けます。適切なコンフルエンスは、イメージングソフトウェアがスクラッチの境界を正しく識別できるようにするため、スクラッチアッセイにとって重要です。

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