Name: 組織工学のための熱応答性ナノ構造表面の調製 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 22 s
Description: 学ぶLangmuir-Schaefer法による熱応答性ナノ構造表面の調製法。温度変化で細胞接着を制御し、組織工学や細胞シート回収に応用可能なバイオマテリアル技術を解説します。

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この研究は、文部科学省の先端学際的研究プログラム「細胞シート組織工学センター（CSTEC）」のイノベーションセンター創成事業によって財政的に支援されました。

ツーステップ可逆的付加-フラグメンテーション連鎖移動（RAFT）ラジカル重合によるポリポリスチレンブロックの1の合成（N -isopropylacrylamide） <ol><li>スチレン（153.6ミリモル）を溶​​解させ、4-シアノ-4-（ethylsulfanylthiocarbonyl）sulfanylpentanoic酸（ECT; 0.2ミリモル）、及び4,4&#39;-アゾビス（4-シアノ吉草酸）（ACVA; 0.04ミリモル）を1 40ml中、 1,4-ジオキサン。反応性種を除去し、徐々に室温で解凍する15〜20分間真空下で液体窒素中で溶液をフリーズします。溶液が完全に解凍されていることを確認し、この凍結 - ポンプ - 解凍脱ガスサイクルを3回繰り返します。 </li><li>オイルバスで15時間、70℃で重合によるマクロRAFT剤として：ポリスチレン（PST）（13500 Mw）を取得します。 </li><li> 真空中でエーテルとドライの800ミリリットルと沈殿物たPStマクロRAFT剤。 </li><li> 1,4-ジオキサン4ml中IPAAmモノマー（4.32ミリモル）、たPStマクロRAFT剤（0.022ミリモル）、及びACVA（0.004ミリモル）を溶​​解させます。 </li><li>削除しますステップ1.1で述べたように凍結 - ポンプ - 融解脱気サイクルによって溶液中の酸素。 </li><li>脱気後の油浴中で15時間70℃で重合を行います。たPStマクロRAFT剤と同様の方法で：合成セントIPAAm分子（32800 Mw）を取得します。 </li></ol>シラン処理疎水性修飾ガラス基板の作製<ol><li>表面汚染物を除去するために5分間、アセトンとエタノールと超音波処理の過剰な洗浄ガラス基板（×50mmの24 mm）です。 </li><li> 30分間65℃のオーブン中に基板を乾燥させます。その後、室温で基板の表面を活性化するために酸素プラズマ（400 W、3分）を使用します。 </li><li>基板をsilanizeするRTで一晩、1％ヘキシルを含むトルエン中に基板を浸し。 </li><li>トルエン中でシラン化された基板を洗浄し、未反応物質を除去するために、30分間アセトンに浸します。 </li><li> 110℃で2時間アニール基質は完全にSを固定しますurface。 </li><li>細胞培養皿（：φ35ミリメートルディッシュサイズ）に合うように25ミリメートル×24ミリメートルにガラスカッターでシラン化基板をカットします。 </li></ol>ラングミュアフィルムおよびフィルム転写表面の調製<ol><li>埃の蓄積を防ぐために、キャビネットにラングミュア膜装置を配置します。 </li><li> （580ミリメートル×145ミリメートルサイズ）、蒸留水や汚染物質を除去するためにエタノールで障壁ラングミュアトラフを洗ってください。 </li><li>リントフリータオルで拭いてトラフや障壁を乾燥させます。その後、蒸留水約110ミリリットルでトラフを記入し、トラフの両側に障壁を設定します。蒸留水を3.5から3.13には、次の手順にこぼすことなく添加されるべきであることに注意してください。 </li><li>プレートが赤に変わるまで、ガスバーナーで表面張力を監視するために、その後、汚染物質を除去するために蒸留水で洗う：白金ウィルヘルミー板（39.24ミリメートル周囲を）加熱します。に取り付けられたワイヤ上ウィルヘルミープレートをサスペンド表面圧力測定機器。 </li><li>製造業者のプロトコルに従ってゼロ面圧測定器。インタフェースは、ポリマーの任意の低下なしに約50 cm 2で達するまで溝の両側に障壁によってトラフの空気-水界面を圧縮します。 </li><li>面圧まで吸引し、小さな汚染物質はほぼ0 MN / mです。 </li><li>両側の障壁を再配置し、ステップ3.6から蒸留水の減少を補うために蒸留水を追加します。 </li><li>クロロホルムの現像液の5mlに合成されたサンIPAAm分子5mgを溶解させます。 注：ジクロロメタンまたはトルエンを溶媒として使用することもできます。 </li><li>静かにマイクロシリンジまたはマイクロピペットを用いて、トラフ上にクロロホルムに溶解サンIPAAmの27μLをドロップします。 </li><li>クロロホルムを完全に蒸発を可能にするために5分間待った後、サンIPAAm molecuを圧縮するために、水平方向の両方の障壁を移動ル界面で。 cm 2で達成される50の標的領域まで0.5 mm /秒での障壁の圧縮率を維持します。 注：急速な圧縮率は、ラングミュア膜中の欠陥を引き起こします。 </li><li>製造業者のプロトコルに従って、圧縮中の表面圧力測定機器に接続されている白金ウィルヘルミー板と面圧（π）-A メートル等温線を測定します。 </li><li>対象領域の大きさに達した後、サンIPAAm分子がリラックスできるようにするために5分間表面を維持します。分子は、圧縮後すぐに平衡状態に達していません。 </li><li>確実にフィルムを吸着するため5分間転写装置を用いて、疎水的に改質されたガラス基板にラングミュアフィルムを転送します。デバイス上で並列に疎水性のガラス基板を固定してください。アライメントステージにデバイスを接続し、垂直に移動します。 </li><li> desiccatoでの1日の転送装置と乾燥して水平に基板を持ち上げrを。 </li></ol> 4.細胞を培養し、ラングミュアフィルム転写面上の細胞接着と剥離の最適化<ol><li> 10％の胎児を含むダルベッコ改変イーグル培地（DMEM）で組織培養ポリスチレン（TCPS）上のCO 2、95％空気、5％中で37℃で三分の一コンフルエンスまで細胞懸濁液を、培養ウシ頸動脈内皮細胞（BAECs）を調製しウシ血清（FBS）および100 U / mlペニシリン。 </li><li>コンフルエンスに達した後、0.25％トリプシン-EDTAを3分間37℃、5％CO 2及び95％空気中で3mlでBAECsを扱います。 </li><li> DMEM、10％FBSを含有する10mlのを添加することによりトリプシン-EDTAを非アクティブ化し、50mlコニカルチューブに細胞懸濁液を収集します。 </li><li> 5分間、120×gで遠心分離し、上清を吸引除去します。再懸濁DMEMの10ミリリットルで細胞を。 </li><li> 5分間滅菌するためのクリーンベンチに紫外線下でサンIPAAm面を配置します。 </li><li>回収されたCEの種子サンIPAAmのLLSは、使い捨て血球計により計数し、1.0×10 4細胞/ cm 2の濃度で表面及び5％CO 2および95％で37℃のインキュベーターを備えた顕微鏡で表面上の細胞を観察します空気。 注：クリーンベンチに搭載した紫外線によりサンIPAAm表面を滅菌します。 </li><li> 10倍の倍率で位相差顕微鏡により、37℃で約24.5時間、付着BAECsのレコードタイムラプス画像。 BAEC接着、約3.5時間、20℃でのSt-IPAAm表面からBAECsのレコード剥離後。 </li></ol>ラングミュアフィルム転写表面上5.細胞シートの作製<ol><li>セクション4で説明したのと同じ方法で使用される培養BAECs。 </li><li>サンIPAAm表面に1.0×10 5細胞/ cm 2の合計に播種し、5％CO 2中、37℃で3日間インキュベートします。コンフルエントBAECsは自発的に20℃で切り離さ。</li>
</ol>

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すべての著者が原稿の執筆に平等に貢献し、最終版を承認しました。著者らは、競合する金銭的利益はないと宣言している。

温度応答性表面は、ラングミュア - シェーファー法により作製し、細胞接着/剥離および細胞シートの回収のために表面特性を最適化しました。表面を製造するためのこの方法を使用する場合、いくつかのステップは重要です。サンIPAAm分子の分子組成物は、表面構造および表面の安定性、ひいては、細胞接着および剥離に大きな影響を与えます。特に、サンIPAAm分子は、狭い分子量分布を有するべきです。本手法では、異なるPIPAAm鎖長を有する2つのセントIPAAm分子は、分子量及び分子量分布の制御を可能にする、RAFT重合により合成しました。 ステップは、ナノ構造の欠陥を回避するためにサンIPAAm表面の調製中に、空気 - 水界面の汚染を防止するために注意すべきです。インターフェイス上にポリマー分子をドロップする前に、contaminan面圧が約0 MN /メートルに達するまでのtsを吸引する必要があります。汚染は、トラフとウィルヘルミ板のエッジの周りに蓄積する傾向があります。ウィルヘルミー板はその表面に何らかの汚染があったので、それがアニールしました。紙ウィルヘルミー板を使用する場合、界面での吸引工程...

ナノ構造化表面は、最近によるパターニング、細胞培養、洗浄、表面切り替えを含め、さまざまな潜在的用途にかなりの注目を集めています。例えば、蓮の葉やその他の応答性表面のナノ構造に触発された超疎水性表面は、外部からの刺激1-4に反応することができます。 ラングミュア膜は、最も広く研究され、ポリマーコーティングの一つです。ラングミュアフィルムを空気-水界面5-8に両親媒性分子を滴下することにより形成されます。フィルムは、その後、物理的または化学的吸着によって、固体表面に転写することができ、固体表面上の分子の立体配座は、垂直および水平転送方式9-12を用いて制御することができます。ラングミュア膜の密度が正確に空気 - 水界面を圧縮することによって調節することができます。最近、この方法はまた、ナノスケール海島structurを製造するための効果的であることが証明されています両親媒性ブロックコポリマーを利用することにより、ES。ナノ構造体は、疎水性セグメントのコアと親水性セグメント13-17の殻から成っているものとします。また、表面上のナノ構造の数は、界面でのブロック共重合体の分子当たりの面積（m）を制御することによって調節されます。 我々は、温度応答性培養表面を用いて、元の、ユニークな足場フリー組織工学アプローチ、細胞シート工学に焦点を​​当てています。開発した技術は、様々な器官18のための再生治療に適用されています。温度応答性培養表面は、表面19-27上に、ポリ（N -isopropylacrylamide）（PIPAAm）、温度応答性分子をグラフトすることにより作製しました。 PIPAAmおよびそのコポリマーは、32℃付近の温度で、水性媒体中で下限臨界溶液温度（LCST）を示します。培養表面は、温度応答性alternatiを示しました<html>疎水性と親水性の間に。 37℃で、PIPAAmグラフト化表面は疎水性になり、細胞が容易に取り付けられ、表面上だけでなく、従来の組織培養ポリスチレン上で増殖しました。温度を20℃に下げたときに、表面が親水性となり、細胞が自然に表面から剥離します。従って、表面上で培養したコンフルエントな細胞は、温度を変化させることにより、完全なシートとして回収することができます。これらの細胞接着及び剥離特性はまた、研究室のデモンストレーション26、27ラングミュアフィルムコーティングによって製造面で表示した。ポリスチレン（P（ST））からなるブロック共重合体のラングミュア膜とPIPAAm（ST-IPAAm）を作製しました。特定のA mのラングミュア膜が水平に疎水的に修飾されたガラス基板に転写することができました。また、温度に応答して調製された表面からの細胞の接着および剥離を評価しました。 _content &quot;&gt;ここでは、ガラス基板上に熱応答性両親媒性ブロックコポリマーからなるナノ構造ラングミュア膜の製造のためのプロトコルを記述している。我々の方法は、表面科学の様々な分野において有機ナノフィルムのための効果的な製造技術を提供することができ、より多くのを容易にすることができます上の細胞接着を効果的に制御し、表面からの自然剥離。

<table><tbody><tr><td>N-イソプロピルアクリルアミド</td><td>高神</td><td></td><td>カタログ番号なし</td></tr><tr><td>アゾビス(4-シアノ吉草酸)</td>和<td>光純薬</td><td>016-19332</td><td></td></tr><tr><td>スチレン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S4972</td><td></td></tr><tr><td>1,3,5-トリオキサン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T81108</td><td></td></tr><tr><td>1,4-ジオキサン</td><td>和光純薬品</td><td>045-24491</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>シグマ&nbsp;</td><td>D6429</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>中雷</td><td>11482-15</td><td></td></tr><tr><td>ストレプトマイシン</td><td>GIBCO BRL</td><td>15140-163</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン</td><td>GIBCO BRL</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>トリプシンEDTA</td><td></td><td>Sigma T4174</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>日本バイオセラム</td><td>JBS-11501</td><td></td></tr><tr><td>BAECs</td><td>健康科学研究資源バンク</td><td>JCRB0099</td><td></td></tr><tr><td>カバーガラス</td><td>松波ガラス工業</td><td>C024501</td><td></td></tr><tr><td>AFM NanoScope V</td><td>Veeco</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1H NMR INOVA 400</td><td>Varian, Palo Alto</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ATR/FT-IR NICOLET 6700</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GPC HLC-8320GPC</td><td>東ソー</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TSKgel Super AW2500, AW3000, AW4000</td><td>Tosoh</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Langmuir-Blodgett堆積トラフ&nbsp;</td><td>KSV Instruments</td><td>KN 2002</td><td>KSV NIWA Midium trough</td></tr><tr><td>Nikon ECLIPSE TE2000-U</td><td>ニコン</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

組織工学のための熱応答性ナノ構造表面の調製

Preparation of Thermoresponsive Nanostructured Surfaces for Tissue Engineering

細胞の接着と剥離を制御するためのThermoresponsive poly(N-isopropylacrylamide) (PIPAAm)-固定化表面をLangmuir-Schaefer法で作製しました。ポリスチレンとPIPAAm(St-IPAAms)からなる両親媒性ブロック共重合体を可逆的付加フラグメンテーション連鎖移動(RAFT)ラジカル重合により合成した。St-IPAAm分子のクロロホルム溶液をLangmuir-trough装置に穏やかに滴下し、装置の両方のバリアを水平に移動させてフィルムを圧縮し、密度を調整しました。次に、St-IPAAm Langmuirフィルムを疎水性に改質されたガラス基板上に表面固定デバイスによって水平に転写しました。原子間力顕微鏡の画像から、表面のナノスケールの海島構造がはっきりと見えました。調製した表面上の細胞接着と剥離の強度、速度、および質は、PIPAAm分子の下限臨界溶液温度範囲にわたる温度の変化によって調節されました。また、最適化された表面上に2次元の細胞構造(細胞シート)を回収することに成功しました。これらのユニークなPIPAAm表面は、細胞の接着と剥離の強度を制御するのに役立つ可能性があります。

ポリスチレン、特定の分子量を有するポリ（Nの -isopropylacrylamide）（ST-IPAAms）からなるブロックコポリマーは、RAFTラジカル重合によって合成しました。 Moad ら 28に記載されるようにECTは、連鎖移動剤として調製しました。異なるPIPAAm鎖長の二サンIPAAm分子を合成し、得られたブロックポリマーは、1 H核磁気共鳴（NMR）、ゲル浸透クロマトグラフィー（GPC）によって特徴付けました。サンIPAAmsの分子量は、狭い分子量分布（1.31および1.50）で、32,800、および67900でした。ポリスチレンマクロRAFT剤とPIPAAmのモノマー転化率が17.4％以上85.0％であることが見出されました。合成されたサンIPAAmsはそれぞれ、サンIPAAm170とサンIPAAm480と命名しました。 分子当たりの様々な分野（ <sub...

は、細胞の自発的な接着と剥離を制御するためのLangmuir-Schaefer法により、熱応答性ブロック共重合体で構成されるナノスケールの海島表面を作製しました。表面の調製と表面上の細胞の接着と剥離の両方を視覚化しました。

Thermoresponsive poly(N-isopropylacrylamide) (PIPAAm)-immobilized surfaces for controlling cell adhesion and detachment were fabricated by the ...

ブロック共重合体を用いたこのラングミュア・シェーファー法の全体的な目的は、細胞の接着強度と付着を制御することにより、温度応答性表面のさまざまな条件下で細胞シートを作製することです。本手法は、生体適合性材料、細胞培養表面、バイオセパレーションといったバイオマテリアル分野における重要な課題の解決に寄与します。この手法の主な利点は、温度応答性表面と細胞との相互作用を制御でき、細胞シート回収のための修飾条件を最適化できる点にあります。この手法は細胞と表面の相互作用に関する知見を提供できるだけでなく、バイオセパレーションやバイオフィルムなどの他の系にも適用可能です。まず、スチレン、ECT、およびACVAを40 millilitersの1, 4-Dioxaneに溶解させます。反応性種を除去するため、この溶液を真空下で液体窒素を用いて15 to 20 minutesの間凍結させます。室温で溶液を徐々に融解させた後、この凍結、ポンプ排気、融解による脱気サイクルを3回繰り返します。オイルバスを用いて70 °Cで15時間重合させ、ポリスチレンをマクロRAFT剤として得ます。このポリスチレンマクロRAFT剤を800 mLのエーテルで沈殿させ、真空乾燥します。次に、IPAAmモノマー、ポリスチレンマクロRAFT剤、およびACVAを4 mLの1, 4-ジオキサンに溶解させます。前述と同様に、凍結・ポンプ・融解（freeze, pump, thaw）脱気サイクルを用いて溶液中の酸素を除去します。脱気後、オイルバスを用いて70 °Cで15時間重合を行います。最後に、ポリスチレンマクロRAFT剤と同様の方法で、合成したSt-IPAAm分子を得ます。ガラス基板を過剰量のアセトンとエタノールで洗浄し、5分間超音波処理して表面の汚染物質を除去します。基板をオーブンにて65 °Cで30分間乾燥させます。次に、室温で酸素プラズマを用いて基板表面を活性化させます。基板を1% hexatrimethoxysilaneを含むトルエンに室温で一晩浸漬し、基板をシラン化します。その後、シラン化された基板をトルエンで洗浄し、未反応の試薬を除去するためにアセトンに30分間浸漬します。基板を110 °Cで2時間アニールし、表面を十分に固定します。最後に、サイラン化された基板をガラスカッターで25 mm × 24 mmに切り出し、細胞培養ディッシュに適合させます。ラングミュアフィルム装置は、ほこりの蓄積を防ぐため、キャビネット内に設置してください。不純物を除去するため、ラングミュアトラフとバリアを蒸留水とエタノールで洗浄します。糸くずの出ないタオルで拭き取り、トラフとバリアを乾燥させます。その後、トラフに約110 millilitersの蒸留水を満たし、トラフの両側にバリアを設置します。次に、表面張力をモニタリングするための白金ウィルヘルミープレートを、プレートが赤くなるまでガスバーナーで加熱します。その後、プレートを蒸留水で洗浄し、汚染物質を除去します。ウィルヘルミープレートを、表面圧測定装置に取り付けられたワイヤーで吊り下げます。製造元のプロトコルに従って、表面圧測定装置のゼロ点調整を行います。トラフの両側にあるバリアを用いて、ポリマーの液滴が混入していない状態で、気液界面の面積が約50 square centimetersになるまで圧縮します。表面圧がほぼ0 millinewtons per meterになるまで、微小な汚染物質を吸引して除去します。両側のバリアを元の位置に戻し、蒸留水の減少分を補うために蒸留水を加えます。次に、合成したSt-IPAAm分子5 mgをクロロホルムの展開溶媒5 mLに溶解させます。その後、マイクロシリンジまたはマイクロピペットを用いて、クロロホルムに溶解したSt-IPAAm 27 µLをトラフ上に静かに滴下します。クロロホルムが完全に蒸発するまで5分間待機した後、両側のバリアを水平に移動させ、表面のSt-IPAAm分子を圧縮します。目標面積の50 square centimetersに達するまで、バリアの圧縮速度を0.5 millimeters per secondに維持します。圧縮中、製造元のプロトコルに従い、表面圧測定装置に取り付けられた白金ウィルヘルミープレートを用いて、表面圧Pi-A等温線を測定します。目標の面積に達した後、St-IPAAm分子を弛緩させるため、5分間表面を維持します。分子は圧縮直後に平衡状態に達することはありません。その後、ラングミュア膜を疎水化処理したガラス基板へ転写装置を用いて転写し、膜を強固に吸着させるため5分間保持します。疎水性ガラス基板をデバイス上に平行に固定します。デバイスをアライメントステージに接続し、垂直に移動させます。転送装置を用いて基板を水平に持ち上げ、デシケーター内で1日間乾燥させます。細胞懸濁液を調製するために、ウシ頸動脈内皮細胞（BAEC）を、FBSおよびペニシリンを含むDMEMを用い、組織培養用ポリスチレン上で37°C、5%CO2および95%空気の条件下で1/3のコンフルエンスまで培養します。コンフルエンスに達した後、BAECに0.25%trypsin EDTAを3mL加え、37°C、5%CO2および95%空気の条件下で3分間処理します。10%FBSを含むDMEMを10mL加えることで、trypsin EDTAを不活化します。そして、細胞懸濁液を50 mLコニカルチューブに回収します。120 ×gで5分間遠心分離した後、上清を吸引し、細胞を10 mLのDMEMで再懸濁します。使い捨てヘモサイトメーターでカウントし、回収した細胞を10,000 cells/cm²の濃度でSt-IPAAm表面に播種します。37°C、5% CO2、95%空気の条件下に設定されたインキュベーター付き顕微鏡を用いて、表面上の細胞を観察します。次に、クリーンベンチに設置された紫外線照射装置により、St-IPAAm表面を滅菌します。接着したBAECsのタイムラプス画像を、位相差顕微鏡の10倍倍率を用い、37°Cで約24.5時間記録します。BAECの接着後、20 °Cで約3.5時間、St-IPAAm表面からのBAECの脱離を記録します。ラングミュアフィルム転写表面における細胞の接着および脱離の最適化後、前述と同様にBAECを培養して細胞シートを作製します。St-IPAAm表面に1 cm²あたり合計100,000個の細胞を播種してください。そして、37°C、5% CO₂条件下で3日間インキュベートします。コンフルエントになったBAECは、20°Cで自然に剥離しました。ここでは、温度応答性ラングミュア膜転写表面の作製について示します。合成したSt-IPAAmのクロロホルム溶液を、気液界面にゆっくりと滴下した。2つのバリアを用いて、界面上のSt-IPAAm分子を目標面積である50 square centimetersに達するまで圧縮した。圧縮中に表面圧を測定し、ラングミュア膜に欠陥がないかを確認した。圧縮後、疎水性修飾を施したカバーガラス基板を、アライメントステージを用いて界面に水平に配置しました。基板を水平に持ち上げ、1日間乾燥させました。この工程を経て、St-IPAAm表面が細胞培養実験に使用可能な状態となりました。St-IPAAm表面の原子間力顕微鏡（AFM）トポグラフィ像の代表的な結果をここに示します。両方のSt-IPAAm表面においてナノ構造が観察されました。ナノ構造のサイズと形状は、AMおよびSt-IPAAmの組成に強く依存していました。ここでは、St-IPAAm 480を用い、1分子あたり40 square nanometersのAMで転写されたラングミュア膜表面から回収したセルシートのマクロ画像を示します。37 degrees CelsiusでSt-IPAAm 170およびSt-IPAAm 480表面にて3日間培養した後、細胞はコンフルエンスに達しました。そして、温度を37から20 degrees Celsiusに下げた後、セルシートは速やかに回収されました。このビデオを視聴することで、ポリマーの分子組成の設計方法、ラングミュア膜の作製および転写方法、細胞の接着と剥離の制御方法、そして細胞シートの回収方法について十分に理解することができます。本手法の開発により、バイオマテリアルおよび組織工学分野の研究者が、細胞と表面の相互作用や、再生医療に用いる細胞培養戦略を探索する道が開かれました。また、本手法は患者から提供された様々な種類の細胞で細胞シートを作製できる可能性があるため、その意義は細胞移植治療にまで及びます。

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Research

JoVE Journal

Bioengineering

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学ぶLangmuir-Schaefer法による熱応答性ナノ構造表面の調製法。温度変化で細胞接着を制御し、組織工学や細胞シート回収に応用可能なバイオマテリアル技術を解説します。

組織工学のための熱応答性ナノ構造表面の調製

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