カーテンフローカラム：効率の最適化と感度

この方法の全体的な目標は、カーテンフローカラムの最適化を通じて分離の効率と感度を向上させることです。この方法は、環境科学、法医学の分野、および効率的で高感度な分離技術が必要な微量サンプル分析が必要な分野での主要な質問に答えるのに役立ちます。この手法の主な利点は、従来のHPLC分離法と比較して、分離の効率と分析の感度が向上することです。

この方法は、分離力を増加させ、したがって容量を経済的かつ時間効率の良い方法で加速する手段を提供することができます。カーテンフローカラムは、HPLCの実務家にとって新しい概念ですが、その使用は複雑ではありません。適切な流量比の最適化が必要なだけです。

まず、100% 超純水と 100 メタノールのボトルを HPLC 装置の移動相 A および B 用に調製します。メーカーの要件に従ってポンプをパージします。パージ後、ポンプラインをオートサンプラーのインジェクターバルブから切り離します。

切断されたラインにTピースを取り付けます。Tピースの各ポートに、内径0.13mm、長さ15cmのチューブを取り付けます。Tピースから1本のチューブをオートサンプラーのインジェクターバルブに接続します。

最後に、ポンプを毎分1ミリリットルの流量に設定します。2つの空の収集容器を風袋引きし、中央と周辺にラベルを付けます。60秒間、中央に標識された容器を使用して、インジェクターからのラインから出る移動相を回収します。

中央容器の重量を再計量し、回収した移動相の質量を決定します。このプロセスを繰り返して、周辺ポートのフロースルーを周辺ラベル付き容器に収集します。示された方程式を使用して、各ラインからの流量の割合、またはミリリットル/分を決定します。

中央ポートは約 40 パーセント、ペリフェラル ポートは約 60 パーセントにする必要があります。値の差が2%を超える場合は、チューブの長さまたは直径を変更して流量比を調整します。次に、収集と計算の手順を繰り返します。

次に、ポンプの流れをオフにし、インジェクターラインをカラムインレットの中央ポートに接続します。また、Tピースからのラインをカラムインレットの周辺ポートに接続します。100% 移動相の 1 分あたり 1 ミリリットルまで流量をゆっくりと増や B.To、システムのチューニングを終了し、100% メタノールを 1 分あたり 1 ミリリットルで 10 分間流し、カラムを平衡化します。

まず、チューブを使用して中央のアウトレットポートをUV-Vis検出器に接続します。同じタイプと長さのチューブをCFカラムの周辺出口ポートに接続します。次に、ポンプを1分あたり1ミリリットルの流量に設定します。

2つの空の収集容器を風袋引きし、1つは中央収集用、もう1つは周辺機器用に再度ラベルを付けます。60 秒間、中央に標識された容器を使用して、UV-Vis 検出器から出口となる移動相を回収します。収集容器の重量を再測定して、回避した溶液の質量を決定します。

このプロセスを、周辺機器の出口ポートとラベル付きの収集容器で繰り返します。次に、入口流量で前に実行した各ラインからの流量の割合を決定します。UV-Vis ラインは 21% で、周辺出口流量は 79% である必要があります。

流量比が大幅にずれている場合は、UV-Vis検出器の出口に取り付けられたチューブのサイズを調整して、中央の流量パーセントを変更します。カーテンフローカラムの最適な性能を確保するためには、カラムの入口と出口の中央と周辺の間の流量比がこのプロトコルに従うことが重要です。アクティブフローテクノロジーカラムは、マルチポートカラムエンドフィッティングの特殊なフリット設計を使用して開発され、カラムベッドの不均一性を克服し、分離性能を向上させました。

フェネトール、ブチルベンゼン、ペンチルベンゼンを含む試験混合物を、従来の内径4.6mmおよび2.1mmのカラムと、4.6mmの内径カーテンフローカラムで分析しました。混合物の分離は、標準カラムと比較してカーテンフローカラムの効率と感度の点で性能が向上したことを示しています。カーテンフローカラムを使用すると、ピーク量が減少したにもかかわらず、ブチルベンゼンのシグナルが増加しました。

このテクニックを習得すると、適切に実行すれば30分以内にセットアップできます。カーテンフローカラムのセットアップは何度も再利用できますが、流量比は定期的にチェックする必要があります。この手順を試行する際は、規定の流量比にできるだけ近づけることを覚えておくことが重要です。

カーテンフローカラムは、HPLC分野の研究者がカラムとUPLC装置の限界を押し広げ、分離性能を損なうことなくより迅速なサンプル分析を得るための道を開きました。このビデオを見た後、カーテンフローカラムは従来のHPLCカラムよりも優れた分離を提供できるため、カーテンフローカラムの重要性を理解する必要があります。