キャピラリーチューブ、Creamatocritによって乳脂肪含量の推定を用いたラットにおける牛乳コレクション

この手順の全体的な目標は、乳組成の実験室分析のために授乳中のラットから手動で牛乳を採取する方法を説明することです。この方法は、母子の健康の分野における重要な疑問、例えば、母体の食事が母乳の組成にどのように影響するかなど、答えるのに役立ちます。この手法の主な利点は、特殊な真空装置や吸引装置を使用せずに、1人の研究者で実行できることです。

No.To まず、搾乳の前に最低5分間、母を子孫から分離します。次に、ここに示すように、搾乳手順に必要なすべての材料を収集します。次に、加熱された手術台に吸収性ベンチパッドを置くか、別のヒートパッドを使用して、搾乳手順中のダムからの熱損失を防ぎます。

次に、処置の前に、システムに十分な酸素とイソフッ素があることを確認するために、麻酔システムをチェックします。次に、最初の麻酔導入に使用するマスクをマシンに取り付け、メンテナンスマスクを近くにセットします。酸素ボンベを開けて、流量を1分あたり1リットルに設定します。

その後、イソフッ素の流量をONにし、その流量を5%に設定します 麻酔したら、ダムをメンテナンスマスクに切り替えます。ペダル反射の欠如をチェックして、十分な麻酔レベルを確認します。次に、ダムを吸収性ベンチパッドの仰臥位に置きます。

イソフッ素の流量を2〜3%に減らす手順全体を通してダムを継続的に監視し、必要に応じてイソフフッ素の流量を調整して、痛みや呼吸抑制を回避します。次に、滅菌アルコールワイプまたはクレンジングパッドを使用して、25ゲージの針を備えた1ミリリットルの注射器を使用してオキシトシンのバイアルを消毒し、0.1ミリリットルのオキシトシンを引き出します。次に、針をダムの腹部の右下象限に挿入し、針を15〜30度の角度、深さ約0.5センチメートルで頭に向けています。

注入前に陰圧を確保するためにプランジャーを引き戻します。液体が吸引されない場合は、オキシトシンを注入し、針と注射器をすぐにバイオハザード容器に捨ててください。.オキシトシンがミルクを刺激するまで約5〜15分待ちます。.

この間にがっかりして、ミルクが集まるテットを選んでください。トリマーを使用して、選択したテットの周りの毛皮を優しく取り除きます。毛皮はサンプル収集を困難にする可能性があるためです。次に、ぬるま湯でテットを洗います。

牛乳の収集には複数のサイトが必要になる場合があるため、少なくとも2つのサイトを準備してください。ミルクが落ちたら、テットの根元をそっと絞って手動でミルクを排出します。収集するには、乳滴を50マイクロリットルの毛細管に集めます。

いっぱいになったら、乳頭からミルクをマイクロ遠心チューブの側面に引き出すために使用されたチューブの端に触れて、キャピラリーチューブから滅菌マイクロ遠心チューブにミルクを分配します。次に、1ミリリットルの注射器に取り付けられた18ゲージの針を使用して、チューブに引き込まれなかったミルクを吹き飛ばします。ミルクコレクションを繰り返し、十分なミルクが収集されるまでマイクロ遠心分離チューブに移します。

選択した分析では、ダムが麻酔を受けている合計時間を1時間未満に制限してみてください。搾乳が完了したら、イソフッ素と酸素の流れを止め、マスクをダムから取り外します。ダムが胸骨の横臥を維持するのに十分な意識を取り戻すまで、ダムを監視し続けます。

これ以上の分析が不要な場合は、マイナス80度でミルクをそよ風にしてください。CCR測定の準備として、Tetから直接15〜20マイクロリットルの牛乳をマイクロヘマトクリットチューブにロードします。次に、チューブの端を粘土シーラントで密封します。

キャピラリーチューブをヘマトクリットスピナーにセットし、シールのへこみを外側に向けて、遠心分離機のバランスが取れていることを確認します。次に、サンプルをGの13,700倍で2分間回転させます。サンプルの回転が終了したら、チューブを遠心分離機から取り外します。

サンプルがクリーム層と透明層に分離するのを観察します。チューブ内の液体の全長と、定規またはキャリパーを使用して脂肪またはクリーム層の長さを測定し、記録します。この情報を使用して、妊娠中および授乳中の食事が牛乳の組成にどのように影響するかを判断するために、付属のテキストプロトコルに記載されているようにCCRを計算します。

乳サンプルは、高タンパク、高プレバイオティクス繊維、または管理された食事のいずれかを与えられたウースターのダムから離乳時に収集されました。高プレバイオティクス繊維食で母牛から採取した牛乳は、数値的に最も高いCヘマトクリット値、悪い濃度、およびエネルギー値を示しました。しかし、タンパク質に関しては、これらの差は統計的に有意ではありませんでした。

しかし、高タンパク食で母牛から採取した牛乳は、タンパク質濃度が最も高かった。しかし、この差は統計的に有意ではありませんでした。一度習得すると、この技術は、正しく行われれば、ダムの麻酔の最初のポイントから1時間以内に実行できます。

この手順を試みるときは、この手順に従って麻酔下で呼吸の低下が発生しないように、ダムを継続的に監視することを覚えておくことが重要です。質量分析などの他の方法を使用して、牛乳のオリゴ糖組成の測定などの追加の質問に答えることができます。このビデオを見た後、授乳中のラットからミルクを手動で収集する方法をよく理解しているはずです。