Name: コンピュータ支援ビデオとデジタル画像解析を用いた銅水溶液の急性暴露に応答して、魚の遊泳行動を定量化 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-02-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 21 s
Description: 学ぶ、銅暴露に対するシロチョウザメの遊泳行動をビデオ解析で定量化する方法。生態毒理学研究に応用可能で、水生生物保全に貢献する。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

私たちは、コロンビア環境研究センターの米国地質調査所の生態学部門、毒物学部門、環境化学部門のスタッフに、技術的および分析的な支援に感謝します。 資金の一部は、米国環境保護庁(USEPA)リージョン10との契約を通じてテックアメリカンインコーポレイテッドによって提供され、USEPAが米国地質調査所(USGS)に内務省中央危険物基金を通じて資金を提供しました。

<ol><li>Gerhardt, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aquatic+behavioral+ecotoxicology-prospects+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Ecol+Risk+Assess%3A+An+International+Journal%22%5BJournal%5D)">Aquatic behavioral ecotoxicology-prospects and limitations.</a> Hum Ecol Risk Assess: An International Journal. 13 (3), 481-491 (2007).</li>
<li>Beitinger, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+reactions+for+the+assessment+of+stress+in+fishes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Great+Lakes+Res%22%5BJournal%5D)">Behavioral reactions for the assessment of stress in fishes.</a> J Great Lakes Res. 16, 495-528 (1990).</li>
<li>Beitinger, T. L., McCauley, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-animal+and+physiological+processes+for+the+assessment+of+stress+in+fishes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Great+Lakes+Res%22%5BJournal%5D)">Whole-animal and physiological processes for the assessment of stress in fishes.</a> J Great Lakes Res. 16, 542-575 (1990).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Behavioural+Ecotoxicology%22">Behavioural Ecotoxicology</a>. Dell'Omo, G. , J Wiley & Sons. Chichester, UK. (2002).</li>
<li>Little, E. E., Finger, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Swimming+behavior+as+an+indicator+of+sublethal+toxicity+in+fish%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Toxicol+Chem%22%5BJournal%5D)">Swimming behavior as an indicator of sublethal toxicity in fish.</a> Environ Toxicol Chem. 9, 13-19 (1990).</li>
<li>Rand, G. M. Behavior. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRand%2C+GM+%22Fundamentals+of+Aquatic+Toxicology%3A+Methods+and+Applications%22">Fundamentals of Aquatic Toxicology: Methods and Applications</a>. Rand, G. M., Petrocelli, S. R. , Hemisphere Publishing. New York. 221-256 (1985).</li>
<li>Calfee, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+sensitivity+of+white+sturgeon+%28Acipenser+transmontanus%29+and+rainbow+trout+%28Onchorhynchus+mykiss%29+to+copper%2C+cadmium%2C+or+zinc+in+water-only+laboratory+exposures%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Toxicol+Chem%22%5BJournal%5D)">Acute sensitivity of white sturgeon (Acipenser transmontanus) and rainbow trout (Onchorhynchus mykiss) to copper, cadmium, or zinc in water-only laboratory exposures.</a> Environ Toxicol Chem. 33 (10), 2259-2272 (2014).</li>
<li>Little, E. E., Calfee, R. D., Linder, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity+of+smelter+slag-contaminated+sediments+from+Upper+Lake+Roosevelt+and+associated+metals+to+early+life+stage+White+Sturgeon+%28Acipenser+transmontanus+Richardson%2C+1836%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Ichthyol%22%5BJournal%5D)">Toxicity of smelter slag-contaminated sediments from Upper Lake Roosevelt and associated metals to early life stage White Sturgeon (Acipenser transmontanus Richardson, 1836).</a> J Appl Ichthyol. , 1-11 (2014).</li>
<li>Wang, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+sensitivity+of+white+sturgeon+%28Acipenser+transmontanus%29+and+rainbow+trout+%28Onchorhynchus+mykiss%29+to+cadmium%2C+copper%2C+lead+or+zinc+in+water-only+laboratory+exposures%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Toxicol+Chem%22%5BJournal%5D)">Chronic sensitivity of white sturgeon (Acipenser transmontanus) and rainbow trout (Onchorhynchus mykiss) to cadmium, copper, lead or zinc in water-only laboratory exposures.</a> Environ Toxicol Chem. 33 (10), 2246-2258 (2014).</li>
<li>Little, E. E. Behavioral measures of injuries to fish and aquatic organisms: regulatory considerations. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLittle%2C+EE+%22Behavioural+Ecotoxicology%22">Behavioural Ecotoxicology</a>. Dell'Omo, G. , J Wiley & Sons. Chichester, UK. 411-431 (2002).</li>
<li>Little, E. E., Brewer, S. K. Neurobehavioral toxicity in fish. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLittle%2C+EE+%22Target+Organ+Toxicity+in+Marine+and+Freshwater+Teleosts+New+Perspectives%3A+Toxicology+and+the+Environment.+Volume+2%22">Target Organ Toxicity in Marine and Freshwater Teleosts New Perspectives: Toxicology and the Environment. Volume 2</a>. Schlenk, D., Benson, W. H. , Taylor and Francis. London and New York. 139-174 (2001).</li>
<li>Mount, D. I., Brungs, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+dosing+apparatus+for+fish+toxicological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Water+Res%22%5BJournal%5D)">A simplified dosing apparatus for fish toxicological studies.</a> Water Res. 1, 21-29 (1967).</li>
<li>Standard guide for performing early life-stage toxicity tests with fishes. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Annual.Book+of+ASTM+International+Standards.+Volume+11.06%22">Annual.Book of ASTM International Standards. Volume 11.06</a>. , ASTM International. West Conshohocken, PA. SOURCE: http://www.astm.org/Standards/E1241.htm (2014a) 1241-1305 (2013).</li>
<li>Standard guide for measurement of behavior during fish toxicity tests. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Annual.Book+of+ASTM+Standards.+Volume+11.06%22">Annual.Book of ASTM Standards. Volume 11.06</a>. , ASTM International. West Conshohocken, PA. SOURCE: http://www.astm.org/Standards/E1711.htm (2014b) 1711(2014).</li>
<li>Standard guide for conducting acute toxicity tests on test materials with fishes, macroinvertebrates, and amphibians. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Annual.Book+of+ASTM+Standards.+Volume+11.06%22">Annual.Book of ASTM Standards. Volume 11.06</a>. , ASTM International. West Conshohocken, PA. SOURCE: http://www.astm.org/Standards/E729.htm (2014c) 729-796 (2014).</li>
<li>Brunson,, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+bioaccumulation+of+contaminants+from+sediments+from+the+upper+Mississippi+River+using+field-collected+oligochaetes+and+laboratory-exposed+Lumbriculus+variegatus%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Environ+ConTox%22%5BJournal%5D)">Assessing bioaccumulation of contaminants from sediments from the upper Mississippi River using field-collected oligochaetes and laboratory-exposed Lumbriculus variegatus.</a> Arch Environ ConTox. 5, 191-201 (1998).</li>
<li>Brumbaugh, W. G., May, T. W., Besser, J. M., Allert, A. L., Schmitt, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+elemental+concentrations+in+streams+of+the+New+Lead+Belt+in+southeastern+Missouri%2C+2002-05%5BTitle%5D)+AND+%22U.S.+Geological+Survey+Scientific+Investigations+Report+2007-5057%22%5BJournal%5D)">Assessment of elemental concentrations in streams of the New Lead Belt in southeastern Missouri, 2002-05.</a> U.S. Geological Survey Scientific Investigations Report 2007-5057. , (2007).</li>
<li>Kane, A. S., Salierno, J. D., Gipson, G. T., Molteno, T. C. A., Hunter, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+video-based+movement+analysis+system+to+quantify+behavioral+stress+responses+of+fish%5BTitle%5D)+AND+%22Water+Res%22%5BJournal%5D)">A video-based movement analysis system to quantify behavioral stress responses of fish.</a> Water Res. 38, 3993-4001 (2004).</li>
<li>Sprague, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Avoidance+of+Copper-Zinc+Solutions+by+Young+Salmon+in+the+Laboratory%5BTitle%5D)+AND+%22JWater+Pollut+Control+Fed%22%5BJournal%5D)">Avoidance of Copper-Zinc Solutions by Young Salmon in the Laboratory.</a> JWater Pollut Control Fed. 36 (8), 990-1004 (1964).</li>
<li>Saunders, R. L., Sprague, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+copper-zinc+mining+pollution+on+a+spawning+migration+of+Atlantic+salmon%5BTitle%5D)+AND+%22Water+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of copper-zinc mining pollution on a spawning migration of Atlantic salmon.</a> Water Res. 1 (6), 419-432 (1967).</li>
<li>Barron, M. G. Environmental contaminants altering behavior. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBarron%2C+MG+%22Behavioural+Ecotoxicology%22">Behavioural Ecotoxicology</a>. Dell'Omo, G. , Wiley & Sons. Chichester, UK. 167-186 (2002).</li>
<li>Ellgaard, E. G., Guillot, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetic+analysis+of+the+swimming+behavior+of+bluegill+sunfish%2C+Lepomis+macrochirus+rafinesque%2C+exposed+to+copper%3A+hypoactivity+induced+by+sublethal+concentrations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Fish+Biol%22%5BJournal%5D)">Kinetic analysis of the swimming behavior of bluegill sunfish, Lepomis macrochirus rafinesque, exposed to copper: hypoactivity induced by sublethal concentrations.</a> J Fish Biol. 33, 601-608 (1998).</li>
<li>Drummond, R. A., Spoor, W. A., Olson, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Some+short-term+indicators+of+sublethal+effects+of+copper+on+brook+trout%2C+Salvelinus+fontinalis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Fish+Res+Board+Can%22%5BJournal%5D)">Some short-term indicators of sublethal effects of copper on brook trout, Salvelinus fontinalis.</a> J Fish Res Board Can. 30, 698-701 (1973).</li>
<li>Hansen, J. A., Rose, J. D., Jenkins, R. A., Gerow, K. G., Bergman, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chinook+salmon+%28Oncorhynchus+tshawytscha%29+and+rainbow+trout+%28Oncorhynchus+mykiss%29+exposed+to+copper%3A+neurophysiological+and+histological+effects+on+the+olfactory+system%5BTitle%5D)+AND+%22Environl+Toxicol+Chem%22%5BJournal%5D)">Chinook salmon (Oncorhynchus tshawytscha) and rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) exposed to copper: neurophysiological and histological effects on the olfactory system.</a> Environl Toxicol Chem. 18, 1979-1991 (1999).</li>
<li>Sandahl, J. F., Baldwin, D. H., Jenkins, J. J., Scholz, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+sensory+system+at+the+interface+between+urban+stormwater+runoff+and+salmon+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">A sensory system at the interface between urban stormwater runoff and salmon survival.</a> Environ Sci Technol. 41 (8), 2998-3004 (2007).</li>
<li>McIntyre, J. K., Baldwin, D. H., Beauchamp, D. A., Scholz, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-level+copper+exposures+increase+visibility+and+vulnerability+of+juvenile+coho+salmon+to+cutthroat+trout+predators%5BTitle%5D)+AND+%22Ecol+Appl%22%5BJournal%5D)">Low-level copper exposures increase visibility and vulnerability of juvenile coho salmon to cutthroat trout predators.</a> Ecol Appl. 22 (5), 1460-1471 (2012).</li>
<li>Green, W. W., Mirza, R. S., Wood, C. M., Pyle, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copper+binding+dynamics+and+olfactory+impairment+in+fathead+minnows+%28Pimephales+promelas%29%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Copper binding dynamics and olfactory impairment in fathead minnows (Pimephales promelas).</a> Environ Sci Technol. 44 (4), 1431-1437 (2010).</li>
</ol>

商号、会社名、または製品名の使用は、説明のみを目的としており、米国政府による承認を意味するものではありません。

汚染物質への暴露に行動の変化は、多くの場合、サブ致死毒性のエンドポイントとして使用されるが、測定することが困難な場合があります。一般的に、行動応答は、目視観察し、処理するために多くの時間を必要とする手動によるデータ分析により測定されています。技術を進めるとともにしかし、水泳の活動を定量化するための方法は、ビデオ撮影18および運動解析や処理および分析時間を短縮し、デジタルトラッキングソフトウェアを使用することに焦点を当てています。ビデオの分析の間ので、チョウザメの遊泳行動を分析するためのより効果的かつ効率的な方法を提供し、映像データの記録や魚のトラッキングソフトウェアの使用を消費手動で非常に時間があったであろう水泳変数を定量化、データを捕獲しました。手順は、魚の遊泳行動を強調したが、このような両生類や水生無脊椎動物のような他の生物のためにカスタマイズすることは簡単な変更を必要とするであろう。どのような行動endpoinに応じて、TSは、実験的なデザインとカメラシステムは、ちょうど約あらゆる市販の追跡ソフトウェアパッケージで使用するために開発することができ、アドレス指定されています。 この方法は、溶解した銅を用いて実証するが、他の水性汚染物質又は温度又は酸素含有量等の特性に適用可能です。本論文で開発し、提示されたプロトコルは、記録装置のような単純なデジタルビデオカメラを利用しました。デジタルファイルは、容易にコンピュータに転送し、運動解析ソフトウェアにアップロードされます。方法は絶えず変更され、定量化プロセスを合理化するために洗練されています。ビデオ品質を追跡するために、各個々の魚を識別するために解析ソフトウェアために高解像度であることが不可欠です。データファイルを処理しようとすると魚とのコントラストしない任意の背景には、問題が発生します。 2次元ビデオトラッキングと別の一般的な問題は、個人を識別しています水泳のパスが渡ります。これは、パスの横断中に各魚を識別し、ソフトウェア内経路セグメントを連結することによって、手動で補正することができます。あるいは、総活性は、グループの平均として各反復室から決定することができます。 1魚をそれぞれ含むものといくつかの個々のチャンバは、個々の魚の動きを計算するために、同じ視野で撮影することができます。 現在、我々は、高精細デジタルビデオ記録装置（HD-DVR）にリンクされている露光室以上のオーバーヘッドの監視カメラのシリーズを使用してアップグレードしました。しかし、高解像度のMPEG-4ビデオを録画することができます任意のカメラシステムの使用が動作します。 HD-DVRは、指定した時刻に記録するように設定し、7日間までプログラムすることができます。この手オフの自動化のアプローチは、魚の行動を損なう可能性外乱を最小限に抑えながら、一貫性を維持するために、同時に複数のビデオのキャプチャを可能にします。 HD-DVRのsysteMSは、そのようにファイルの転送は比較的簡単である内部ネットワークに接続されています。自動化されたカメラシステムは、遊泳行動を定量化するためのはるかに改善された技術ですが、まだ毒性試験中に行動障害を文書化するためなどの追加支援情報を提供するために視覚的な観察を行うことが有益です。 1960年代初頭19,20,21にさかのぼる金属への暴露に起因する文献の文書化変更された魚の行動の長い歴史があります。銅はブルーギル22でこのような活動低下などの活動レベルの変化（ ブルーギル属macrochirus rafinesque）とカワマス23（ イワナ fontinalis）の運動と摂食活動の変化を引き起こすことが示されています。少なくともいくつかの稚魚の捕食者を検出し、回避するために、匂いの感覚に頼る、および銅誘導性の化学感覚の剥奪は、アラーム化学物質24,25,26の検出に関連した行動に影響を与える可能性があります</sup&gt;。嗅上皮は、それによって、見当識障害につながる可能性があり感覚のメカニズム、行動の回避、低減し供給および嗅覚27に案内され、他の行動に影響を与えることにより、銅暴露に破損しています。これらの変更された行動は、エクスポージャーの間に観察されたものと一致しました。 白チョウザメの遊泳行動が大幅に銅水溶液濃度に致死量以下の露光時に影響を受けました。これらの結果は、動作が銅の亜致死濃度で影響を受け、毒性ストレスの指標として使用することができる方法を示しています。ビデオベースの分析では、遊泳行動を定量化するのに有効証明し、また銅にさらさチョウザメに深刻な影響の定性的な視覚的なドキュメントを務めていました。解析ソフトウェアは、他の様々な行動のエンドポイントを定量化することが可能です。リストについては、 表1を参照してください。露光システムは、各エンドポイントに対処するために変更することができますリアルタイムモードと関心のさまざまな汚染物質への曝露に関連した動作の違いを定量化するために使用することができます。 水生毒性学的研究における行動のエンドポイントの使用がますます採用されており、適応行動機能は、環境傷害9の決意に重要であるため、汚染物質の影響を評価する際に考慮すべきです。魚の行動への環境汚染物質の影響は、標準的な方法の不在下で亜致死エンドポイントを扱う場合は特に、多くの場合、主観的かつ挑戦的です.. 厳密に監視することができ、これらの方法を使用して定量化活性を水泳、生物に最小限のストレスで非破壊的であり、繰り返すことができます。水泳の動作は、標準的な毒性試験5の感度を拡大するテストプロトコルに組み込まれるべきである亜致死毒性の有効かつ一貫性の指標です。

汚染物質の曝露は行動にどのように影響するかを理解することは時間に非常に困難かつ主観的です。行動は、一般的に、中枢神経系を介して動作と、生き残る成長し、再現するために生物を有効に明白な、観察可能な、全身の一連の活動として定義されています。生存率1と比較した場合に起因する毒物への暴露に行動の変化は、環境ストレス、多くの場合、10から100の間の倍の感度の最も敏感な指標の一つです。これらの研究の大半は、スイミングアクティビティ、換気、および魚の2,3,4の採餌行動を調べました。水泳の活動は、毒性試験5中の汚染物質に反応して行動変化を決定する上で最も頻繁に使用される亜致死のエンドポイントです。水泳変数は、周波数や旅の移動、速度と距離の期間、頻度およびターンの角度、位置水柱中や水泳のパターンを含みます。水泳活性があります遊泳行動の有効な手段水生毒性の本の基礎にランド6により、第9章で提案された基準に基づいて、毒性物質に対する感受性を評価します。 本稿では、早期開発の様々な段階での早期のライフステージ白チョウザメへの銅の毒性（ シロチョウザメ ）水のみの遊泳行動を評価したチョウザメする相対的なエクスポージャー方法の例として、毒性学的研究を提示し、水泳を定量する方法を示しています動作。 以前の研究では、有害な行動反応は銅に急性および慢性暴露の最初の数日の間に早期発症と明らかにしたと暴露時間と濃度の7,8,9の上に次第により厳しいなりました。これらの行動反応の発症の大きさとタイミングが長期生存を制限する可能性が十分であり、したがってrecruiに影響与え懸念されますtment障害10。正確に金属露出方法および手順に、この感度の意義を解釈するために銅濃度を基準に行動の減損の時間経過と程度を定量化するために開発されました。 行動機能と開発のための試験プロトコルは、露光チャンバ内でチョウザメのオーバーヘッドビデオサンプルを分析することによって確立しました。ビデオサンプルは、暴露期間を通して銅処理間発達と機能の定性的な評価を提供します。行動と避難所を追究活動を行うようにと協調、平衡、および呼吸を泳いで、避難所のシーク、無気力に影響を与える減損の時系列を特徴づけるために時間を決定するために、水性銅濃度に対するエクスポージャーの間に評価しました。また、ビデオ録画を定量的に文書化する自発的な水泳ACTIの目的のために複製それぞれからサブサンプリングされたチョウザメで作られていましたVITY。これらのエンドポイントは、持続時間の測定が含まれるか、または時間が移動費やし、遊泳速度及び距離は、商業的に利用可能なデジタル画像分析ソフトウェアパッケージを用いて5,11を旅しました。このソフトウェアは、視野内の各画像の輪郭を定義し、このことから、各画像の重心を定義します。ソフトウェアは、運動の経路を決定するために、フレームの連続によってフレーム内の各重心の位置を追跡することができます。 動物福祉法の規定（9 CFR）の最終規則の該当するすべてのセクションで、文化と実験中の試験生物の人道的な扱いのためのすべての施設のガイドラインを遵守し、この研究。研究の終了時に、すべての魚は、米国地質調査所のための制度的動物実験委員会、コロンビア環境研究センターによって承認されたように、適切なガイドラインに従って安楽死させました。

<table><tbody><tr><td>銅II硫酸塩五水和物</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>懸念</td></tr>汚染物質シ<tr><td>リンジディスペンサー</td>ハ<td>ミルトンMicroLab600シリーズ</td><td></td>化学薬品を<td>スパイクする装置</td></tr>2<tr>リットルストック<td>溶液を保持するための</td><td>2リットル容量フラスコ</td><td></td><td></td>容器</tr><tr><td>24-1.5Lガラス瓶</td><td></td><td></td><td>2dphチョウザメビデオカメラ用テストチャンバー</td></tr>ソニー<tr><td></td><td>ハンディカムHDR-CX550V</td><td></td><td></td></tr><tr><td>デジタルトラッキングソフトウェア</td><td>Noldus Ethovision</td><td></td><td></td></tr><tr><td>3-17インチフラットスクリーンモニター24</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>台の監視カメラ</td><td>モデルCL101</td><td></td><td></td></tr><tr><td>3-16チャンネルデジタル記録デバイス</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DOメーターYSI</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>pH</td><td>メーターOrion 940</td><td></td><td></td></tr><tr><td>phプローブ</td><td>Orion&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>アンモニアメーター</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>アンモニアプローブ</td><td>Orion</td><td></td><td></td></tr><tr><td>チラーユニット</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>再循環ウォーターポンプ</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

コンピュータ支援ビデオとデジタル画像解析を用いた銅水溶液の急性暴露に応答して、魚の遊泳行動を定量化

Quantifying Fish Swimming Behavior in Response to Acute Exposure of Aqueous Copper Using Computer Assisted Video and Digital Image Analysis

>jove_content<環境汚染物質に対する水生生物の行動反応は、生存、成長、または繁殖などの他の影響の前兆である可能性があります。 ただし、これらの応答は微妙である可能性があり、測定が困難な場合があります。 この論文では、銅を露出したシロチョウザメの稚魚(Acipenser transmontanus)を使用して、コンピューター支援ビデオおよびデジタル画像分析を使用して行動反応を定量化するために使用される手法を示しています。 以前の研究では、初期の生活段階のシロチョウザメの間で、銅への急性および慢性の曝露中に遊泳行動の深刻な障害が観察されました。 チョウザメの行動は急速に損なわれ、魚が下流に流されたり、捕食者に容易に捕らえられたりするため、野外での生存が危険にさらされるほどでした。 この調査の目的は、一連の急性銅曝露中の遊泳活動を定量化して、初期のライフステージの発達中に効果を発揮する時間を決定するためのプロトコルを説明すること、およびこれらの応答がこれらの脆弱な初期ライフステージの魚の生存に関連することを理解することでした。 死亡率は時間連続体上にあるため、銅が最初に遊泳能力に影響を与える時期を特定することは、人口レベルの影響への影響を理解するのに役立ちます。使用される技術は、他の生物やストレッサーを用いた実験計画に容易に適応できます。

手動で処理する視覚観測データは、2日後に孵化（DPH）チョウザメ（ 図2）で開始曝露のわずか72時間後に増加銅濃度とともに増加パーセントの異常を示しました。ビデオサンプルは、チョウザメの遊泳行動（動画2）上の銅暴露の極端な影響を文書化し、その結果としての行動障害を定義する際に支援します。別の例では、30 DPHでのチョウザメは、死亡率のみに基づいて40.3μg/ Lを96時間半数致死影響濃度（LC50）と銅の露出に敏感であることが判明しました。しかし、平衡および固定化の損失の亜致死行動エンドポイントは、死亡率と一緒に含まれている場合2.4〜5.0μgの/ Lの範囲の推定96時間中央値は影響濃度（EC50）での感度が高くなります。記録された行動異常のビデオドキュメントこれらの亜致死影響を捕獲し、さらに検証人間観察露光中。水泳活動を分析する場合、デジタルトラッキングソフトウェアの使用は、後処理時間を減少させました。魚の遊泳速度は、時間が動いて過ごした、との距離はすべて大幅に増加銅濃度で（ 図3）減少し 、トリップアドバイザー。水泳経路も増加銅濃度（ 図4）で還元しました。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/53477/53477fig1.jpg" /> 図1：試験原液濃度目標濃度に基づいて、スプレッドシートのテンプレートを使用して決定した希釈毒性試験のための化学の株式の準備を決定するために使用されるスプレッドシートのテンプレートのコンピュータのスクリーンショット <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53477/53477fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> 図2：希釈のセットアップと実験デザイン白チョウザメのさまざまなライフステージが銅に曝露しました。露光のために使用される希釈のサイズは、魚の大きさに基づいて選択しました。 （a）は初期ライフステージのチョウザメは、大きな希釈のセットアップを使用して露光した小希釈のセットアップおよび（b）は 、古いライフステージのチョウザメを用いて露光しました。 <img alt="図3" src="/files/ftp_upload/53477/53477fig3.jpg" /> 図3：初期生活段階の白チョウザメ（ シロチョウザメ ）72時間の銅暴露（[DPH]魚30日の孵化後から始まる ） から 、 行動結果をスイミング 。白チョウザメDPH 30の間での移動の水泳活動のエンドポイントは、（a）の期間; （b）は、水泳のスピード。そして（c </移動strong&gt;の）距離は96時間さらさ白チョウザメの中銅濃度の増加に伴って減少しました。アスタリスクは対照からの有意差を示し、エラーバーは標準偏差を表します。 <img alt="図4" src="/files/ftp_upload/53477/53477fig4.jpg" /> 図4：初期生活段階の白チョウザメ（シロチョウザメ）の結果96時間の銅暴露（2日目の孵化後[DPH]魚で始まる）の72時間後の平衡および固定化の損失を示す2 DPHで白チョウザメを存続。銅濃度の増加に伴って96時間暴露。アスタリスクは対照からの有意差を示し、エラーバーは標準偏差を表します。 <img alt="図5" src="/files/ftp_upload/53477/53477fig5.jpg" /> 図5：初期生活段階の白チョウザメ（チョウザメ属transmoから例水泳パス結果ntanus）96時間銅暴露（30日の孵化後[DPH]魚）と凝視。チョウザメの水泳経路が（N = 5魚）と（b）高い治療から（50（a）の制御の反復からのデジタルトラッキングソフトウェアを使用してデジタル化96時間曝露後μgの/ L）の反復（n = 3の魚）。不活性であったため、いくつかの魚の遊泳経路の数は、チャンバ内の魚の存在の数を表すものではありません。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53477/53477fig5large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <table fo:keep-together.within-page="1"><tbody><tr><td> 定量化可能なパラメータ </td><td> 観測パラメータ </td></tr><tr><td>速度</td><td>無気力/多動</td></tr><tr><td>距離移動</td><td>均衡の喪失</td></tr><tr><td>ゾーンで過ごした時間の長さ</td><td>痙攣/振戦/逆さまダウン</td></tr><tr><td>選択したゾーン間の時間生物の移動のゾーン遷移数</td><td>水柱内の位置</td></tr><tr><td>見出し興味のある点に向かって、動物のパスの偏差をポイント計算</td><td>呼吸（速い/遅いです） </td></tr><tr><td>見出しは、選択されたボディポイントの見出しを算出し、 </td><td>着色</td></tr><tr><td> 2サンプル間の見出しに角度差を回し</td><td>隠蔽</td></tr><tr><td>角速度計算サンプル間隔によって回転角度を分割することにより</td><td></td></tr><tr><td>移動距離によって旋回角度を分割することにより蛇行計算しました。異なる速度で移動する動物で回し比較するために使用されます</td><td></td></tr><tr><td>時間が動いて過ごしました</td><td></td></tr><tr><td>モビリティでもセントた場合、動物のように検出された完全なエリアが変更されている期間を状態は、計算しますER点は同じまま</td><td></td></tr><tr><td>選択されたボディポイントが360°の累積回転角を有するとき、回転一回転が終了します。無視される閾値未満の反対方向に回転。 </td><td></td></tr><tr><td>移動度は、中心点が同じであっても、検出された動物の完全な領域の移動度の割合を連続計算します。 </td><td></td></tr><tr><td>間の距離全ての関係者と選択した受信機との間の距離を被験者は、計算します</td><td></td></tr><tr><td>俳優であるか、または受信機に近接していないする期間を近接は、計算します</td><td></td></tr><tr><td>相対運動</td><td></td></tr><tr><td>ネット加重移動-（ポジティブ）に俳優の動きとそれらの間の距離によって重み付け（負の）受信機、から</td><td></td></tr><tr><td>加重移動から、moveme<html>それらの間の距離によって重み付け受信機から俳優のntは、。 </td><td></td></tr><tr><td>それらの間の距離によって重み付け受信機に俳優の動き対加重移動、 </td><td></td></tr><tr><td> 2試用コントロール要素のイベント、または1つの要素内の間の試用制御state-期間</td><td></td></tr><tr><td>あなたが裁判コントロールに定義されている要素内のイベントが発生した裁判制御イベントモーメント。 </td><td></td></tr></tbody></table> 表1：デジタル追跡ソフトウェアを介して定量化行動のエンドポイントは、これらのエンドポイントは、個人またはグループで使用され、また、露光時の行動障害を視覚的に観察チェックのリストとして機能することができます。 <img alt="ビデオ1" src="/files/ftp_upload/53477/53477movie1.jpg" /> /www.jove.com/files/ftp_upload/53477/53477video1.avi &quot;&gt; ビデオ1：影響を受けた白チョウザメが示す異常行動のビジュアル定義（右クリックしてダウンロード）毎日観察チェックリストは、異常を文書化するために使用されたザ・。。平衡および固定化の損失は、曝露の間に観察された最も一般的な異常であった。Calfee らから変更された。7 <img alt="動画2" src="/files/ftp_upload/53477/53477movie2.jpg" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53477/53477video2.avi">ビデオ2：白チョウザメの遊泳行動の例を強調ビジュアルドキュメント。 （右クリックしてダウンロード）</a>白チョウザメ水泳活性が大幅に増加銅濃度への暴露で還元しました。このビデオに描かチョウザメは、コントロール、中低、および96時間銅水溶液の終わりに高い治療からのものです暴露。 白チョウザメはまだ生きていたが、魚が大幅にコントロールと比較して治療が損なわれた明白です。 Calfee らから変更。7

魚の行動に環境汚染物質の影響を測定することは、亜致死エンドポイントを扱う場合は特に、多くの場合、主観的かつ挑戦的です。我々は、中および銅の種々の濃度に対する96時間の急性曝露後初期生活段階白チョウザメ（ シロチョウザメ ）の遊泳行動を定量化するためのビデオ技術を含む方法が記載されています。

Behavioral responses of aquatic organisms to environmental contaminants can be precursors of other effects such as survival, growth, or reproduction.  ...

この手順の全体的な目的は、水中の銅への亜致死的な曝露に対するホワイトストurgeons（ホワイトスタージョン）の行動反応を定量化する方法を実証することです。この手法は、汚染物質への亜致死的な曝露が魚類の遊泳行動にどのような影響を与えるかなど、環境毒性学分野における重要な疑問に答えるのに役立ちます。また、この手法はホワイトストurgeonsの保全のための重要な情報を提供することができます。また、本手法は他の魚種、両生類、および無脊椎動物にも容易に適用できます。この手法の主な利点は、応答が非常に高感度であり、毒性の早期指標を提供し、個体の生存に関連していることです。行動測定に不慣れな場合、当初はこの方法の習得が困難な場合があります。共同著者のHolly Puglisがプロトコルを実演します。まず、2 Lの水溶液試薬グレードの硫酸銅(II)五水和物を調製します。次に、希釈システムと露光タンクを平衡化します。自動シリンジディスペンサーの吸込チューブをストック溶液のフラスコに入れます。次に、自動ポンプのスパイク量を1 mLに設定し、希釈器の電源を入れます。システムにより、5つの濃度段階からなる50%希釈系列とコントロールが作成されます。4方路分配器を介して、これらの溶液が4つの反復曝露チャンバーに供給されます。次に、ウォーターバスを15 °Cに維持するように設定したチラーのポンプをオンにします。続いて、希釈装置の自動タイマーを使用して、30分ごとにサイクルするように設定します。タンクの水位はスタンドパイプ排水によって維持されます。側面に4 cmの穴を開け、その穴を30 µmのステンレスメッシュで覆うことで、曝露チャンバーを準備します。魚10 gあたり少なくとも1 Lの水を保持できる曝露チャンバーを選択してください。例えば、生後89日のホワイトスタージョンは約373 mgであり、28 cm × 13.5 cm × 25 cmの正方形チャンバーで試験することが可能です。実験の開始時、中間点、および終了時に、化学分析用に24 mLの試験溶液サブサンプルを採取します。プラスチック製シリンジに取り付けたシッパーストローを使用してください。シッパーストローを0.45 µmのポリエーテルスルホンフィルターに交換し、テスト水を4 mLフィルターに通して分注します。この水は廃棄してください。その後、残りの20 mLの水をフィルターを通して酸洗浄済みのポリエチレンボトルにろ過します。16 Mの硝酸を用いて、サンプルをv/v 1%まで酸性にします。これにより、サンプルを最大3か月間保存することが可能です。試験曝露が確定したら、各反復試験チャンバーにチョウザメを3匹ずつ、1チャンバーのリットルあたり約172 mgとなるように入れてください。非研磨性のネットを用いてチョウザメを捕獲し、小さなバケツに移します。6種類の試験溶液からデータを収集するために、合計144匹の魚が必要です。96時間の曝露期間中、魚に餌を与えないでください。死亡率と異常行動をスコア化するために、毎日一貫した観察を行う必要があります。午前中が観察に最適な時間帯であり、理想的には観察者は試験条件について盲検化されていることが望ましいです。平衡喪失は、魚が水柱内で直立姿勢を維持できなくなった状態と定義されます。不動状態とは、刺激を与えない限り魚が移動または遊泳できない状態と定義されます。また、嗜眠、過活動、呼吸の増加または減少、体色の変化、震え、痙攣、腹部の膨満、水柱における位置、およびその他の異常な遊泳パターンなどのその他の異常についても記録してください。死魚は常に直ちに除去する必要があります。また、毎日、ハンドヘルドメーターを用いて2つの水サンプルから溶存酸素量を測定してください。96時間の曝露終了後、遊泳行動解析用のビデオ撮影を行います。曝露水槽内にテストアリーナを設置してください。魚が自由に泳ぎ回れるのに十分な大きさのテストアリーナを選択してください。各テストアリーナの真上に、三脚に固定したハンドヘルドビデオカメラを設置します。次に、処置を施した魚の中から、生存個体を最大3匹までランダムに選択します。小さなメッシュネットを使用して、3匹をテストアリーナに移動させます。魚をアリーナに約30分間順化させます。魚の順化中に、ピントを合わせ、動く水によるグレアの歪みを最小限に抑え、背景に対する魚のコントラストを最大化し、魚が遮られないように視野を調整します。魚の馴化が完了したら、録画を開始し、2分間のビデオデータを収集します。ビデオ撮影後、魚を安楽死させて廃棄してください。ビデオファイルをデジタル解析ソフトウェアに必要な形式に変換した後、トラッキングソフトウェアを開き、メイン画面の「新規実験の作成」オプションから「新規デフォルト実験」を選択します。プロンプトに入力し、「OK」を押します。次に、「Set up」にある「Experiment settings」オプションに移動し、「Video source」から「Video file」を選択します。アリーナの数を1に設定します。1アリーナあたりの被験体数を3に設定します。次に、追跡機能（tracked features）から中心点検出（center point detection）を選択し、希望する単位を選択します。続いて、セットアップ（set up）でトライアルリスト（trial list）オプションを選択し、画面上部の「ビデオを追加（add videos）」をクリックします。ダイアログボックスからアルファベット順を選択します。[参照]をクリックします。ビデオが保存されているフォルダーに移動し、該当するファイルを選択して、[開く]をクリックします。ビデオファイルを選択しましたので、ソフトウェアで実験の範囲を定義します。まず、画面上部の「add variable」をクリックし、ラベルボックスに「concentration」と入力します。説明ボックスには、「copper concentration in micrograms per liter」と入力してください。次に、「type」のドロップダウンリストから「numerical」を選択します。「pre-defined values」ボックスをクリックし、ダイアログボックスから「define individual values」オプションを選択してください。実験に使用した濃度を入力し、数値を入力するごとに「add」をクリックします。次に、「他の値を許可する」オプションのチェックを外し、「OK」をクリックします。「範囲」ボックスのドロップダウンメニューから「試行」を選択してください。提供されたボックスに、各試行の適切な濃度を入力します。画面上部の「変数（variable）」を追加してください。ラベルボックスに「replicate」と入力します。説明ボックスに「replicate number」と入力してください。タイプのドロップダウンリストから「numerical」を選択します。次に、「pre-defined values」ボックスをクリックし、ダイアログボックスから「define individual values」オプションを選択します。1、2、3、4を入力し、「allow other values」オプションのチェックを外します。次に、「OK」をクリックします。次に、scopeボックスのドロップダウンメニューから試行オプションを選択します。各試行に対して、適切な反復回数を入力してください。次のタスクはアリーナ空間の設定です。「set up」タブでアリーナ設定を選択し、最初の設定に「trial one」という名前を付けます。ダイアログボックスから「grab background image」オプションを選択し、「browse」をクリックします。試行1のビデオファイルを選択し、「開く」をクリックします。ビデオが表示されたら、「grab background image」ダイアログボックスの「grab」をクリックします。次に、「arena settings」の下にある画面上部の白い円形アイコンをクリックし、表示された円を操作して遊泳エリアを囲みます。次に、「arena settings」の下にあるキャリブレーションスケールのアイコンをクリックします。クリックして保持し、ドラッグする動作でアリーナ領域を選択してください。これで、「calibration distance」内の「real world distance」ボックスに、10.5と入力します。次に、「OK」をクリックします。必要に応じて、キャリブレーションラインが円形アリーナの直径全体にわたるように調整してください。アリーナ設定ボックスの「Validate arena settings」オプションをクリックし、検証されなかった設定上の問題に対処します。次に、各試行のすべてのアリーナが定義されるまで、このプロセスを繰り返します。続いて、魚の検出パラメータを設定します。まず、画面左側のエクスペリメント・エクスプローラー・ツールバーにあるセットアップ・オプションから、検出設定を選択してください。次に、「Detection settings one」ダイアログボックスの「Method」ドロップダウンメニューから「Dynamic subtraction」を選択します。また、同じダイアログボックスの「Subject identification」で、各被験者の塗りつぶし色を選択します。続いて、「Select video」を選択し、試験1（trial one）のビデオを指定します。「detection settings one」ダイアログの「video」にある「sample rate」ボックスに5.9941と入力します。同じボックス内の「detection」にある「reference image」オプションの「settings」をクリックします。次に、「reference image」ダイアログボックスの「start learning C」オプションをクリックします。リファレンス画像ダイアログボックスに動物が写っていない画像が表示されたら、ダイアログボックス内の取得設定にある「use dynamic reference image」をクリックし、このダイアログボックスを閉じます。次に、検出設定1ダイアログボックスの検出における「subject is」のドロップダウンメニューから「darker」を選択します。検出のダークコントラストについて、小さい方の数値を33に、大きい方の数値を153に設定します。次に、右下の「save changes」をクリックします。ここで、ソフトウェアが影やゴミではなく、動物を正しくトラッキングしていることを確認してください。再生コントロールダイアログボックスの再生ボタンをクリックし、必要に応じてダークコントラストの数値を調整します。行った調整内容を必ず保存してください。ソフトウェアがビデオからのデータ収集を行う設定になったため、次のタスクは各試行における魚のトラッキングです。まず、画面左側のエクスぺリメント・エクスプローラー・ツールバーのセットアップ・オプションから、アクイジションを選択します。次に、データ収集設定ダイアログボックスの「track next planned trial」をクリックし、データ収集設定ダイアログボックスの設定の下に、正しいトライアル、ビデオ、およびアリーナの設定が表示されていることを確認します。その後、データ収集コントロールダイアログボックスの「detection determines speed」オプションにチェックを入れます。白い正方形に囲まれた緑色の円のボタンをクリックして、データ収集プロセスを開始します。すべての試行の追跡が完了するまで、このプロセスを繰り返します。これで、追跡対象である魚の解析が可能になります。まず、画面左側のエクスペリメント・エクスプローラー・ツールバーにある解析オプションから、データプロファイルをクリックします。次に、コンポーネントツールバーのネスティングオプションで「time」を選択します。時間ダイアログボックスの「select track time interval」設定で、「to」の値を2分に調整し、「okay」をクリックします。その後、画面右側のデータプロファイル領域にある「nest」ボックスを、「start」ボックスと「result one」ボックスの間にドラッグします。画面左側のエクスペリメントエクスプローラーツールバーの「analysis」オプションにある「analysis profile」をクリックします。次に、「dependent variables」ツールバーの「distance and time」の見出しの下にある「velocity」をクリックし、「add」をクリックします。続いて、「dependent variables」ツールバーの「distance and time」の見出しの下にある「distance moved」をクリックします。次に、「distance moved」ダイアログボックスの「add」をクリックし、「dependent variables」ツールバーの「individual behavior」見出しの下にある「movement」をクリックします。「movement」ダイアログボックスの「outlier filter」見出しの下で、「averaging interval」を1に調整します。その後、「threshold」見出しの下で、「start velocity」を2.00に、「stop velocity」を1.75に調整します。「統計の計算」の見出しの下にある、「移動あり」と「移動なし」の両方のボックスにチェックを入れます。次に、「追加」をクリックし、画面左側のエクスペリメントエクスプローラーツールバーにある「結果」オプションの下の「解析出力」をクリックします。最後に、「計算」をクリックします。従属変数の算出が完了したら、画面上部の「export」をクリックします。「export analysis output」ダイアログボックスから保存先のフォルダを選択し、ファイル形式のドロップダウンメニューから「Excel」を選択します。その後、「okay」をクリックしてください。最後に、画面上部のファイルタブにある「実験を保存（save experiment）」をクリックします。デジタル追跡ソフトウェアを終了します。データをスプレッドシートファイルにインポートし、市販の統計解析ソフトウェアパッケージを用いて解析します。様々な濃度の銅にわずか72時間曝露した後、孵化後2日のチョウザメに多くの観察可能な異常が認められました。遊泳行動に明らかな影響が見られ、ビデオデータを用いることでこの行動障害を定義することができました。さらなる試験において、孵化後30日のチョウザメが96時間の銅曝露に対して感受性を持つことが証明された。遊泳速度、移動に費やした時間、および移動距離はすべて、銅濃度の増加に伴い有意に減少した。また、遊泳経路も銅濃度の増加に伴い短縮した。このビデオを視聴することで、毒性試験における行動の定量化方法について十分に理解できるはずです。この手法は、環境管理者が行動定義による基準を用いて環境被害を記録し、修復に向けた指針を得るための手段となります。この手順を実施する際は、行動観察の記録において一貫性を保つことが重要です。汚染物質への曝露が生存に及ぼす長期的な影響について、さらなる疑問を解消するために、本手順に従って摂食や攻撃性などの他の行動を定量化することができます。

quantifying-fish-swimming-behavior-response-to-acute-exposure-aqueous

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

我々は光をインクリメントおよびデクリメントに対応して幼虫のゼブラフィッシュのモータ出力を定量化するために視覚運動応答を開発した。我々はまた別のビジョンアッセイ、視覚性運動反射によってテストするときに完全に盲目であると思われた視運動性応答（NRC）変異体、何を含めていないゼブラフィッシュのビジョンの変異を調べた。...

光強度の変化にゼブラフィッシュの応答性を測定する行動アッセイ

魚の大部分の生活は、水泳を前提としている。このプロトコルは、個人や学校教育の魚に利用できるモードを水泳の範囲をキャプチャするためのテクニックを説明し、そして水泳生理と行動に関連するメトリックが含まれます。...

魚類の遊泳性能評価

ここでは、免疫調節活性物質の同定を目指した新規な高含有化学的に誘発される炎症アッセイを説明します。我々は正常、炎症反応だけでなく、さらに、データ処理、解析、マイニング、およびストレージの自動定量化を可能にするカスタム開発したソフトウェアのスクリプトで自動化された顕微鏡を組み合わせています。...

ゼブラフィッシュで自動化されたハイコンテンツ炎症アッセイ：創薬を促進する

このビデオでは、ゼブラフィッシュの幼生の回避とチグモタキシスアッセイについて説明しています。このビデオでは、視覚嫌悪刺激に反応したゼブラフィッシュの幼生の行動を調べています。...

ゼブラフィッシュの回避とチグモタキシスアッセイ:嫌悪的な視覚刺激に応答した幼虫の行動を調べるためのハイスループット法

我々は、自由に同期して、感覚の内部に特別に設計された水槽の両方で正確かつ確実に、動物の電気器官吐出​​タイミング、上体位置姿勢を測定することにより、長時間にわたって弱電気魚の水泳の自発的挙動を研究するための技術のセットを記述隔離室。...

自由水泳弱電気魚の長期的な行動の追跡

ゼブラフィッシュは、筋肉の機能と病気を研究するための優れたモデルです。初期胚形成期には、ゼブラフィッシュは規則的な筋肉収縮を開始し、リズミカルな遊泳行動を生み出し、筋肉が乱れると遊泳行動が変化します。ここでは、筋肉機能の尺度として水泳パフォーマンスを調べるための、タッチ誘発反応と運動アッセイについて説明します。...

ゼブラフィッシュで筋肉のパフォーマンスと機能を評価するためにタッチ誘発応答と歩行アッセイを使用して

この作業による furzeriのターコイズのヒメダカにおよぼす単一および複合ストレスの効果を研究する、急性、慢性、多世代生物検定法について述べる.このプロトコルは、(死亡率、成長、産卵数、重量)...

急性および慢性毒性試験ターコイズ メダカによる furzeriのためのプロトコル

ここでは、ゼブラフィッシュとヨシノゴチの幼虫ミノーの自発活動と photomotor 応答 (PMR) 自動追跡ソフトウェアを使用して検討するプロトコルを提案します。共通の毒性生物検定株式これらの行動の分析は化学生物活性を調べる診断ツールを提供します。このプロトコルは、カフェイン、モデル neurostimulant...

稚魚の行動応答プロファイルを調べるための実験プロトコル: 神経興奮剤カフェインへの応用

ここでは、行動と生体染色、メカノセンシング メキシコの血脈のシリーズの高スループット研究の手法を提示します。これらのメソッドは、動作研究実用的かつコスト効果の高い方法を提供するフリー ソフトウェアとカスタム...

行動追跡とメキシコの血脈の Neuromast イメージング

脊髄損傷後の機能回復が可能な成体ゼブラフィッシュは、神経再生の先天的なメカニズムを解明するための最高のモデルシステムです。ここでは、脊髄再生の機能的読み出しとしての水泳持久力および水泳行動アッセイについて説明する。...

成体ゼブラフィッシュの水泳持久力と水泳行動の評価

多室社会的嗜好課題は齧歯類からゼブラフィッシュに応用され、モデル生物の社会的行動の研究を促進しています。このプロトコルは、ウェブカメラとオープンソースソフトウェアを用いてゼブラフィッシュの社会的嗜好を測定する低コストの3チャンバーオープンタンク課題を検証し、学部生の研究や教育に利用可能にします。...

ゼブラフィッシュ(Danio rerio)における社会的嗜好を調査するための低コスト代替案:3室オープンタンク自由泳ぎ課題

学ぶ、銅暴露に対するシロチョウザメの遊泳行動をビデオ解析で定量化する方法。生態毒理学研究に応用可能で、水生生物保全に貢献する。

コンピュータ支援ビデオとデジタル画像解析を用いた銅水溶液の急性暴露に応答して、魚の遊泳行動を定量化

さらに動画を探す