Name: 網膜疾患の評価のための定量的眼底自己蛍光 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 22 s
Description: 学ぶ定量的眼底自己蛍光法による網膜色素上皮のリポフスチン評価。CSLOを用いて加齢黄斑変性症などの網膜疾患の病態理解と診断に貢献する再現性の高いイメージング技術です。

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私たちは、協力者、フランソワDelori、トーマス・バーク、およびトビアスドゥンカーに感謝したいと思います。 研究サポート： NIH / NEI R01 EY015520（RTS、JPG）、および失明（RTB）を防止するための研究から無制限の資金。

倫理文：これらの研究に登録したすべての患者は、医学のニューヨーク大学ロースクールで承認された施設内倫理委員会の監督に基づいて行ってました。 1.患者の選択およびイメージングのための初期の準備スペクトルドメイン光コヒーレンストモグラフィー（SD-OCT）を搭載した0.5％トロピカミド点眼液、2.5％フェニレフリン点眼液、cSLO、および内部蛍光基準：以下の材料が必要とされています注意してください。 <ol><li>撮影の前には、適切に製造元の指示に従って、データ取得のためcSLOを設定します。 </li><li> cSLO内部蛍光基準をマウントします。注：内部蛍光基準、製造業者から購入し、金属リング内に収容されており、カメラのレンズの後方に直接配置されます。他の製造業者からcSLOが使用される場合、に記載されているものとは異なる構成が存在してもよいですこのプロトコル。 <ol><li> cSLOへの参照を挿入するためには、それを削除し、マシンの金属リングを外し、および参照を含む新しい金属リングでそれを置き換えるために、レンズをねじります。 注：それはレーザーパワーの変動や検出器の感度/ゲインを補正することができるように内部蛍光基準は、QAF技術に不可欠です。 </li></ol></li><li>イメージングのために募集の患者は、日常拡張目の検査を受け、過去の眼の歴史や眼の所見と現れ得る基礎疾患に関する背景情報を取得しています。 </li><li> 0.5％のトロピカミド及び2.5％フェニレフリンと瞳孔を拡張します。重要なステップ：少なくとも6ミリメートルに生徒を膨らませます。注：これは、光の中断のない通過のため、ひいては眼底の最適な可視化および測定のために不可欠です。 </li><li>撮影の前に、あごがchinrestで休んで、cSLO上で適切に患者を配置し、額はforeheaに対して配置しましたdは残り、かつ適切な指標と整合横眼角。 </li></ol>眼底の2ベースラインイメージング<ol><li>まず、黄斑の上にカメラを一元化し、ラフなフォーカスを得るために、近赤外線の反射率（IR）光（820nmの波長）で画像眼底を。 <ol><li>患者が適切に配置して、眼底がフルフォーカスになるまで手で、赤外線撮像モードにコントロールパネル上の位置にカメラをハードウェアの設定を切り替えると、画像を撮ります</li><li> 「IR-OCT」、基礎疾患のための黄斑を評価するために、IRイメージングと併せて、スペクトルドメイン光コヒーレンストモグラフィー（SD-OCT）を使用するには、コントロールパネルの設定を調整します。 </li><li>正しく眼底のIR画像に10月を配向する撮像窓に存在するガイドを使用してください。最適なSD-OCT品質を達成するために、OCT画像が​​撮像窓の上部三分の一になるようにカメラを配置。少なくとも1水平ラインSCを取得中心窩を通る全体イメージング分野にまたがります。 </li></ol></li></ol> 3. QAFイメージングを設定します<ol><li> 「高速」の画像取得を使用してください。注意：この設定が原因患者の動きに信号損失のリスクを減少させ、虹彩や眼瞼による光の遮断を結果としてより高速な画像取得を可能にします。 </li><li>フレーム「9の平均」を使用します。注：この設定は、続いて（下記参照）、ノイズやアーチファクトを低減するために、「平均化」することができます9画像フレームの急速な、シーケンシャル取り込みを可能にします。 </li><li> 「30×30度」フィールドを使用します。注：これは、画像取得中に取り込まれた網膜領域の程度を指します。 </li><li>これが最初で警報することができるように、撮像に先立って、青色光について患者に警告します。 </li><li> AFモードをオンにすると、画面が最大限眼底AF（画像の辺や角の最小限の黒ずみ）で「満たされる」ようなカメラ軸を揃えます。 <ol><li>患者Hの場合明るい青色光を許容aveの難しさは、さらに眼から離れたカメラで撮影を開始し、眼底が丸見えになるまで、患者に向かってゆっくりとカメラを持参します。 重要なステップ：光が遮られているに入るか、目から出た場合は、信号が発生します減少しました。ローカライズされた減少は、像側または角の非対称の黒ずみとして表示されます。目の動きだけでは、光の通路を妨げたときに、信号の一般損失が見られます。 </li></ol></li><li> AF信号がフィールド全体にその最高レベルになるように、カメラの位置を合わせます。しかし、彼らはおおよそ相関し、最大シグナルよりもむしろ最も鮮明な画像を目指します。手動または検眼鏡のジョイスティックでカメラを再配置するcSLOを移動させることで、カメラのフォーカスを調整します。 </li><li>眼底AFが簡単に見えるように感度/ゲインを調整しますが、過飽和を避けます。画像取得時には、内部基準のいずれかで目に見える色の画素は、（の上部にあります画像）や眼底は、信号の飽和オーバー、したがって損失を示しています。 </li></ol> 4.画像取得注意：重​​要なステップを：画像取得における目標は、セッション内の画像間の変動を制御するために、セッションごとに2、高品質の9フレームの画像スタックを取得するためにすべきです。患者とカメラを再配置した後、評価し、変動を制御するために、2つの画像の第二セッションを取得。全ての画像は、最終的には内部基準（後述）に較正されます。 <ol><li>感覚網膜9にロドプシンによる光の吸収を最小限にするためにのみ「漂白」（AF光に対する網膜の完全露出）の少なくとも20秒後に画像を取得します。 <ol><li>カメラのアライメント、フォーカスと感度を最適化するために、この期間を使用します。 </li></ol></li><li>新鮮な涙液膜は、信号品質を向上させるように、各画像取得の前に点滅科目を持っています。 </li><li>買収の面でまぶたを避けてください。 注：これは、より困難な患者のために手動で開くまぶたに役立つかもしれません。著者らは、アシスタントは、このタスクを実行することをお勧めします。 </li><li>その光が減少した信号が得られる虹彩によって妨害されていないことを確認するために、各画像取得の前にアライメントを最適化します。 注：として、少なくともマイナーな動きが非常に一般的であり、著者は各画像取得の前に、必要に応じて細かな再調整をお勧めします。イメージングは​​減少の動きを助けるながら患者を案内し、奨励。オペレータの気晴らしを最小にするように著者はまた、「取得ボタン」として、マシンのフットペダルを使用することをお勧めします。 </li><li>信号対雑音比を増加させるために9フレームスタックの「平均値」を計算することによって、後の画像処理を行います。平均値を計算するためのオプションを選択してcSLOソフトウェアを使用して、スタックの平均を計算します。 注：いくつかのフレームは、最適な品質のものではないスタックがあるかもしれない（ すなわち 、ローカライズや一般SIが低下しています最適なフレームにgnal相対的）、したがって、慎重に各スタックを検査し、平均値の計算の前に、次善のフレームの選択を解除します。 注：許容可能な信号対雑音比の平均画像は、少なくとも3つのフレームから処理することができます。各画像の辺と角がcSLO自体の内部制限のために、中央の20度よりも低い信号を有することは正常です。 <ol><li>ソフトウェアは、オペレータがグレーレベルを正常化したいかどうかを尋ねられた場合は、「いいえ」を選択し、0〜255の間（ すなわち 、ヒストグラムを伸ばします）。これは、分析のための不変のグレーレベルを維持しています。 </li></ol></li></ol> 5.画像解析<ol><li>以前QAF技術のために開発された画像解析ソフトウェアを用いて説明したようにAFの画像を分析（IGORを; 9）。このソフトウェアを使用する典型的な画像解析の簡単な説明は以下に含まれています。 <ol><li> IGORとインポート画像でQAFプログラムをロードします（.bmpの形式で）からエクスポートピクセル縦横比768×768（デフォルトの出力パラメータ）とcSLOソフトウェア。 </li><li>ドロップダウンメニューで画像を選択し、分析を開始します。 </li><li> 「十字線」は、中心窩と「ブラケット」視神経乳頭を（これらの指標は、関心領域を拡張し、配置するために使用されている）に当接し上に重なるように、画像上の校正指標を再配置します。適切に配置すると、利用ソフトウェアは、（ 図1、図2を参照）中心窩の周囲の円周のROIで画像を取り込むように求められます。 </li><li>内部蛍光基準に存在するもののレベルに各画像の全体的なグレーレベルを較正するためにIGORでオプションを選択します。注：このステップは、各画像の電子ゼロレベルと各マシンの内部基準校正係数、ならびに年齢、屈折と角膜曲率を含む患者関連因子、を含む機械関連因子のキャリブレーションを可能にします。 注：解析ソフトウェアは、次に固定Rが表示され結果画像とQAF値にegionsは、各領域内で実証されています。 QAF値も自動的に別のウィンドウでスプレッドシート形式に入力されます。」 </li><li>コマンドプロンプト内でオプションを選択することにより、QAF「ヒートマップ」を生成します。すべての画像およびデータは、適切なオプションを選択することにより、ExcelスプレッドシートにIGORソフトからエクスポートすることができます。 </li></ol></li></ol>

<ol><li>Strauss, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+retinal+pigment+epithelium+in+visual+function%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+reviews%22%5BJournal%5D)">The retinal pigment epithelium in visual function.</a> Physiological reviews. 85, 845-881 (2005).</li>
<li>Ach, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+autofluorescence+and+cell+density+maps+of+the+human+retinal+pigment+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Quantitative autofluorescence and cell density maps of the human retinal pigment epithelium.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 55, 4832-4841 (2014).</li>
<li>Ach, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipofuscin+redistribution+and+loss+accompanied+by+cytoskeletal+stress+in+retinal+pigment+epithelium+of+eyes+with+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Lipofuscin redistribution and loss accompanied by cytoskeletal stress in retinal pigment epithelium of eyes with age-related macular degeneration.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 56, 3242-3252 (2015).</li>
<li>Schmitz-Valckenberg, S., Jorzik, J., Unnebrink, K., Holz, F. G., Group, F. A. M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+digital+scanning+laser+ophthalmoscopy+fundus+autofluorescence+images+of+geographic+atrophy+in+advanced+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Graefe%27s+archive+for+clinical+and+experimental+ophthalmology+%3D+Albrecht+von+Graefes+Archiv+fur+klinische+und+experimentelle+Ophthalmologie%22%5BJournal%5D)">Analysis of digital scanning laser ophthalmoscopy fundus autofluorescence images of geographic atrophy in advanced age-related macular degeneration.</a> Graefe's archive for clinical and experimental ophthalmology = Albrecht von Graefes Archiv fur klinische und experimentelle Ophthalmologie. 240, 73-78 (2002).</li>
<li>Weng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+into+the+function+of+Rim+protein+in+photoreceptors+and+etiology+of+Stargardt%27s+disease+from+the+phenotype+in+abcr+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Insights into the function of Rim protein in photoreceptors and etiology of Stargardt's disease from the phenotype in abcr knockout mice.</a> Cell. 98, 13-23 (1999).</li>
<li>Holz, F. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+lysosomal+degradative+functions+in+RPE+cells+by+a+retinoid+component+of+lipofuscin%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Inhibition of lysosomal degradative functions in RPE cells by a retinoid component of lipofuscin.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 40, 737-743 (1999).</li>
<li>Sparrow, J. R., Nakanishi, K., Parish, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+lipofuscin+fluorophore+A2E+mediates+blue+light-induced+damage+to+retinal+pigmented+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">The lipofuscin fluorophore A2E mediates blue light-induced damage to retinal pigmented epithelial cells.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 41, 1981-1989 (2000).</li>
<li>Smith, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipofuscin+and+autofluorescence+metrics+in+progressive+STGD%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Lipofuscin and autofluorescence metrics in progressive STGD.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 50, 3907-3914 (2009).</li>
<li>Delori, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+measurements+of+autofluorescence+with+the+scanning+laser+ophthalmoscope%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Quantitative measurements of autofluorescence with the scanning laser ophthalmoscope.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 52, 9379-9390 (2011).</li>
<li>Burke, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+fundus+autofluorescence+in+recessive+Stargardt+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Quantitative fundus autofluorescence in recessive Stargardt disease.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 55, 2841-2852 (2014).</li>
<li>Duncker, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+fundus+autofluorescence+and+optical+coherence+tomography+in+best+vitelliform+macular+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Quantitative fundus autofluorescence and optical coherence tomography in best vitelliform macular dystrophy.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 55, 1471-1482 (2014).</li>
<li>Duncker, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+fundus+autofluorescence+distinguishes+ABCA4-associated+and+non-ABCA4-associated+bull%27s-eye+maculopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Quantitative fundus autofluorescence distinguishes ABCA4-associated and non-ABCA4-associated bull's-eye maculopathy.</a> Ophthalmology. 122, 345-355 (2015).</li>
<li>Greenberg, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+fundus+autofluorescence+in+healthy+eyes%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Quantitative fundus autofluorescence in healthy eyes.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 54, 5684-5693 (2013).</li>
<li>Delori, F. C., Goger, D. G., Dorey, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+accumulation+and+spatial+distribution+of+lipofuscin+in+RPE+of+normal+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Age-related accumulation and spatial distribution of lipofuscin in RPE of normal subjects.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 42, 1855-1866 (2001).</li>
<li>Sparrow, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+fundus+autofluorescence+in+mice%3A+correlation+with+HPLC+quantitation+of+RPE+lipofuscin+and+measurement+of+retina+outer+nuclear+layer+thickness%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Quantitative fundus autofluorescence in mice: correlation with HPLC quantitation of RPE lipofuscin and measurement of retina outer nuclear layer thickness.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 54, 2812-2820 (2013).</li>
<li>Delori, F. C., Webb, R. H., Sliney, D. H. American National Standards Institute. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maximum+permissible+exposures+for+ocular+safety+%28ANSI+2000%29%2C+with+emphasis+on+ophthalmic+devices%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Optical+Society+of+America.+A%2C+Optics%2C+image+science%2C+and+vision%22%5BJournal%5D)">Maximum permissible exposures for ocular safety (ANSI 2000), with emphasis on ophthalmic devices.</a> Journal of the Optical Society of America. A, Optics, image science, and vision. 24, 1250-1265 (2007).</li>
</ol>

STA:開示なし、JPG:開示なし、RTS:コンサルタント、Ocata Therapeutics。

異常のRPEリポフスチン分布は、増加または減少するかどうか、網膜疾患の感受性マーカーであり、一般に感覚網膜の機能の喪失と関連しています。ここで、我々は、RPEリポフスチンの評価のためQAFのアプリケーションを記述します。我々の標準化されたイメージング技術と一緒に可変レーザパワーと検出器感度9を補正する内部蛍光基準の取り込みは、AFレベルの信頼できる定量を可能にします。この方法は網膜疾患の診断およびモニタリングに役立つ、そして最終的にはそのような薬剤または遺伝子療法などの治療的介入の有効性を評価するになることを私たちの目標です。 QAFはまた、AMDなどの状態のためにリスクの個体の層別化を助けることができます。 我々は、網膜の病変13を解釈するための参照ツールとして使用されるQAFデータの大規模な規範データベースを生成し、また、いくつかの疾患STAにQAFを記載していますシュタルガルト病10、ブルズアイ黄斑症12とベスト病11を含むTES、。健康的な網膜では、そこに民族グルー...

網膜色素上皮（RPE）は、多数のプロセス1を通して感覚網膜の機能をサポートしています。加齢性黄斑変性症（AMD）は、先進国における治療不可能な失​​明の最も重要な原因であり、顔料の喪失、機能及び萎縮の損失を含むRPEの変化によって特徴づけられます。 AMDでは、通常の老化、RPEは、貪食感光体の断片を含む蛍光、リソソーム由来の細胞小器官を蓄積リポフスチン顆粒と呼ばれます。 RPEのリポフスチンの蓄積は、酸化障害1を示していると考えられてきたが、最近の研究では、RPEの形態は、高リポフスチンのレベル2と高齢目で正常のままであることを示しています。しかし、リポフスチン分布の異常パターンは、リポフスチンの特定の損失で、両方の組織学的および臨床的に3,4、AMDおよびAMDの進行のためのマーカーを文書化されています不良プロセスへRPEリポフスチンの歌うは、特定の遺伝性網膜変性症で起こることが示されています。シュタルガルト病（STGD）に罹患している患者は、最終的にはAMD 5に見られるものと同様の視力喪失を開発し、若い年齢でRPEにおけるリポフスチンを蓄積します。これらの知見は、リポフスチンの蓄積は、それ自体が毒性であるとRPEの機能障害6,7を駆動することができることを示唆しました。しかし、時間をかけてSTGDを有する被験者の詳細なイメージング研究では、焦点リポフスチンの蓄積は8以降のRPEの損失につながった確認しませんでした。リポフスチン異常は網膜変性のマーカーであるが故に、リポフスチンの直接毒性の役割が証明されていないままです。 RPEは、網膜の最も後方の細胞層であるが、眼底からの蛍光信号の大部分を生成します。 RPE由来する自家蛍光の発生と検出（AF）は、VIを可能にする共焦点走査型レーザー検眼鏡（cSLO）を用いて行うことができます眼底AFの空間分布のsualization。特定の網膜変性は、これらの状態の診断およびモニタリングにおける独特の眼底AFのパターン、AF用撮像補助を示します。標準的なAF撮影が臨床的に重要であるが、定量的なAF（QAF）は、RPEの健康を評価する重要な手段となっています。我々と他の人が確実に特定の網膜の位置9でQAFレベルを決定することができる標準的手法を開発しました。 QAFは、網膜の状態の診断およびモニタリングにおける潜在的な用途を有し、また、予後、リスク層別化に有用性を有することができます。また、QAFの診断機能はまた、特定の網膜疾患10-12について記載されています。ここでは、健康と病気の目の評価では、そのアプリケーションの視覚的なデモンストレーションを伴う私たちの技術を実行するための段階的な詳細を提供します。

<table><tbody><tr><td>Spectralis HRA + OCT</td><td>ハイデルベルクエンジニアリング</td><td></td><td></td></tr><tr><td>0.5% トロピカミド点眼液</td><td></td><td></td><td>任意のブランドを使用可能</td></tr><tr><td>2.5% フェニレフリン点眼液</td><td></td><td></td><td>任意のブランドを使用可能</td></tr><tr><td>内部蛍光リファレンス</td><td>ハイデルベルクエンジニアリング</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IGOR Proソフトウェア</td><td>WaveMetrics</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

網膜疾患の評価のための定量的眼底自己蛍光

Quantitative Fundus Autofluorescence for the Evaluation of Retinal Diseases

網膜色素上皮(RPE)は、その上にある感覚網膜に並置されており、視覚系の機能をサポートします。RPEが行う課題の中には、食作用とリソソーム由来のオルガネラを介した外部光受容体セグメントの処理があります。これらの分解生成物は、保存され、リポフスチン顆粒と呼ばれ、部分的にビスレチノイドで構成されており、これは広範な蛍光吸収および発光スペクトルを持ち、共焦点走査型レーザー検眼鏡検査(cSLO)による眼底自家蛍光として臨床的に検出できます。リポフスチンの蓄積は老化と関連していますが、網膜の後天性および遺伝性の変性疾患にもさまざまなパターンで見られます。したがって、その蓄積パターンを研究し、そのようなパターンをその上にある感覚網膜の変化と関連付けることは、網膜疾患の病態生理学と進行を理解するために不可欠です。ここでは、健康な目と病気の目の両方でRPEリポフスチンのレベルを定量化するためにcSLOを使用する、私たちの研究室や他の人々が採用している技術について説明します。

この技術は、両方の健康13および疾患状態10-12でQAFを研究するために使用しました。健康な目（ 図1）においては、RPEから放出されたAFは、眼底（ 図1A）の全体にわたって比較的均一に分布しています。減少し強度が原因で目とカメラの光学系に黄斑色素による光の遮断、および画像の側面やコーナーでのために中央黄斑部に見られます。船舶は暗く見え、よく取得された画像に明確な焦点であるべきである。 図1B は 、 図1AからQAFレベルの対応するヒートマップ表現を示しています。暖かい色はより高い強度の領域に対応しながら、クーラーの色は低い強度の領域に対応します。最大強度は、一般に、（ 図1Bに示される）第二の同心8セグメントリングに見られます。この領域はまた、イメージング関連variabilを受けにくいです近い画像境界に領域よりも性、及...

網膜色素上皮(RPE)は、リポフスチンとして蓄積する視覚サイクル副産物のリサイクルを通じて感覚網膜をサポートします。これらの製品は自家蛍光性であり、in vivoで定性的にイメージングできます。ここでは、共焦点走査型レーザー検眼法を用いてRPEリポフスチンを定量的にイメージングする方法について述べます。

The retinal pigment epithelium (RPE) is juxtaposed to the overlying sensory retina, and supports the function of the visual system. Among the tasks ...

定量オートフルオレッセンス（qAF）の全体的な目的は、健康な眼および疾患のある眼の両方において、網膜の支持細胞である網膜色素上皮（RPE）におけるリポフスシンの全体的なレベルを評価することです。この手法は、網膜色素上皮の健康状態が加齢黄斑変性（AMD）の発症にどのように関与しているかなど、網膜細胞生物学における重要な疑問を解決するのに役立ちます。この手法の主な利点は、眼底におけるリポフスシン自発蛍光の絶対値を決定できることであり、それにより、患者間、同一患者の画像撮影セッション間、および大規模な研究集団において、定量的かつ再現性のある追跡調査が可能になります。イメージングを行う前に、メーカーの指示に従って、データ収集のための共焦点走査レーザー検眼鏡（CSLO）を適切にセットアップします。メーカーから購入した内部蛍光リファレンスを取り付けるには、レンズを回して取り外し、装置のメタルリングを緩めて外し、リファレンスが含まれている新しいメタルリングと交換します。光を妨げなく通過させるため、瞳孔を少なくとも6mmまで散瞳させることが不可欠です。0.5%トロピカミドおよび2.5%フェニレフリンを用いて、患者の瞳孔を少なくとも6mmまで散瞳させます。これは、眼底の観察および測定において、光を遮ることなく透過させるために不可欠です。患者をCSLOに適切に配置し、顎を顎台に載せ、額を額当てに密着させ、外眼角がインジケーターに正しく揃うように調整します。ベースライン画像を撮影するには、まず近赤外反射（IR光）で眼底を撮影し、カメラを黄斑上に中心合わせし、大まかなピント合わせを行います。患者を適切に配置した後、コントロールパネルのハードウェア設定をIRイメージングモードに切り替え、眼底に完全にピントが合うまでカメラを手動で位置合わせし、撮影を行います。次に、コントロールパネルの設定をIROCTに変更します。これは、スペクトラルドメイン光干渉断層計（SDOCT）をIRイメージングと併用し、黄斑に潜在的な疾患がないかを評価するものです。イメージングウィンドウに表示されるガイドを使用して、OCTを眼底のIR画像に対して正しく方向合わせしてください。最適なSDOCT品質を得るために、OCT画像がイメージングウィンドウの上部3分の1に位置するようにカメラを配置してください。中心窩を通り、イメージングフィールド全体にわたる水平ラインスキャンを少なくとも1回取得します。qAFイメージングをセットアップするには、高速画像取得機能を使用してください。これにより、患者の動きによる信号損失や、虹彩またはまぶたによる遮光のリスクを低減できます。9フレーム平均（Mean of 9 frames）を使用します。これは、9枚の画像フレームを高速かつ連続的に撮影し、それらを平均化することでノイズとアーチファク

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医学

網膜画像分析は、微小循環を可視化するための邪魔にならない手順である。心血管疾患の危険因子の影響は、網膜血管口径の変化をもたらすことがある。手順は、口径が記載されている容器を算出するための眼底画像とステップを取得する。...

疫学研究では心血管疾患の危険因子への微小血管の応答を研究するための便利なツールとしての眼底写真

網膜は脳と顕著な類似性を共有し、従って非侵襲的血管と脳の神経構造を研究するためのユニークなウィンドウを表します。このプロトコルでは、網膜のイメージング技術を用いた痴呆を調査する手法について説明します。このメソッドは、潜在的認知症の診断とリスク...

眼底イメージングを使用して認知症を研究するには

孤立チェック視覚誘発電位(icVEP)法は、緑内障で最初に損傷したマグノセルラーON経路を評価するためにここに実施される。この研究は、信頼性の高い結果を得るためにicVEPを使用した標準的な手術手順を示している。緑内障の早期発見のための有用な客観的診断技術として役立つことが証明されている。...

孤立チェック視覚誘発電位による患者における早期オープンアングル緑内障の評価

このレポートでは、研究者がマウスモデルを生成できるようにするプロトコルを提示します 眼内ブドウ膜炎の。より一般的には実験的自己免疫性ブドウ膜炎(EAU)と呼ばれるこの確立されたモデルは、人間の病気の多くの側面を捉えています。ここでは、いくつかの読み出しを用いて疾患進行を誘導およびモニタリングする方法について説明します。...

実験的自己免疫性ブドウ膜炎:眼内炎症性マウスモデル

糖尿病性網膜症は、失明の主な原因の1つです。組織学、血液網膜関門破壊アッセイ、および蛍光血管造影は、網膜の病態生理学を理解するための貴重な技術であり、糖尿病性網膜症に対する効率的な薬物スクリーニングをさらに強化することができる。...

ラットモデルにおける網膜病態生理学的評価

マウスモデルは、網膜色素上皮(RPE)の生物学を調べるための有用なツールとなり得る。マウスは一連のRPE病理を発症する可能性があることが確立されています。ここでは、光、透過電子、および共焦点顕微鏡を使用してマウスのRPE病理を解明および定量化するための表現型プロトコルについて説明します。...

加齢黄斑変性症マウスモデルにおける網膜色素性上皮病変を評価および定量化するためのプロトコル

この研究では、眼底全体の自家蛍光レベルの違いを考慮しながら、個々の関心領域(加齢黄斑変性症[AMD]におけるドルーゼンおよび網膜下ドルセノイド沈着物など)からの自家蛍光レベルを決定して比較するワークフローについて説明します。...

加齢黄斑変性症病変性症の眼底自家蛍光における特異的変動を定量的に決定するワークフロー

ラボアッセイでは、加齢黄斑変性症(AMD)の縦断的光干渉断層撮影(OCT)ベースのマルチモーダルイメージングから得られた予後値を活用できます。AMDの有無にかかわらず、ヒトドナーの眼は、組織切片作成の前に、OCT、カラー、近赤外反射率スキャンレーザー検眼鏡、および2つの励起波長での自家蛍光を使用して画像化されます。...

エクスビボ 加齢黄斑変性症研究のためのヒトドナー眼のOCTを用いたマルチモーダルイメージング

パーキンソン病の原因遺伝子に変異を有する患者からの線維芽細胞は、簡単にアクセスを表す...

パーキンソン病の分野におけるミトコンドリアの表現型を監視するための主要ヒト線維芽細胞の使用

ここでは、金属製の網膜上鋲と人工網膜に直接隣接する眼組織を視覚化するための組織学的技術について説明します。...

網膜タックと2部網膜上インプラント：ローカライズされた病理組織学的分析のための人工網膜を移植した処理の目のための技術

学ぶ定量的眼底自己蛍光法による網膜色素上皮のリポフスチン評価。CSLOを用いて加齢黄斑変性症などの網膜疾患の病態理解と診断に貢献する再現性の高いイメージング技術です。

網膜疾患の評価のための定量的眼底自己蛍光

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