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Photoconvertible PSmOrangeシステムを用いたGFPトランスジェニックゼブラフィッシュで細胞を追跡
Photoconvertible PSmOrangeシステムを用いたGFPトランスジェニックゼブラフィッシュで細胞を追跡
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Developmental Biology
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JoVE Journal Developmental Biology
Tracking Cells in GFP-transgenic Zebrafish Using the Photoconvertible PSmOrange System

Photoconvertible PSmOrangeシステムを用いたGFPトランスジェニックゼブラフィッシュで細胞を追跡

Full Text
9,120 Views
07:59 min
February 5, 2016

DOI: 10.3791/53604-v

Carlo A. Beretta1,2,3, Nicolas Dross2, Ulrike Engel2, Matthias Carl1

1Medical Faculty Mannheim, Department of Cell and Molecular Biology,Heidelberg University, 2COS and Nikon Imaging Center at the University of Heidelberg,Heidelberg University, 3Excellenzcluster CellNetworks,University of Heidelberg

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

The PSmOrange system is a cost-effective tool for in vivo cell tracking in GFP transgenic backgrounds, particularly in zebrafish models. This protocol facilitates the study of cell origins during embryonic development and disease.

Key Study Components

Area of Science

  • Developmental Biology
  • Cell Tracking
  • Embryonic Development

Background

  • PSmOrange Photo Conversion Technology enables tracking of cells in living organisms.
  • This method is applicable in various research fields, including regeneration and tumor progression.
  • It can be used in GFP transgenic backgrounds, enhancing its versatility.
  • Confocal microscopy is employed for visualization and photoconversion of cells.

Purpose of Study

  • To track cells during embryonic development and disease processes.
  • To uncover the origins of cells that develop into tissues and organs.
  • To provide insights into cellular behaviors in various biological contexts.

Methods Used

  • Generation of PSmOrange and GFP expressing embryos.
  • Embedding embryos for confocal microscopy analysis.
  • Utilization of 488 and 561 nm lasers for imaging.
  • Photoconversion of PSmOrange protein for tracking purposes.

Main Results

  • Successful tracking of cells in zebrafish models using the PSmOrange system.
  • Demonstrated ability to visualize cellular origins and behaviors.
  • Highlighted the method's applicability in various biological research areas.
  • Provided a straightforward protocol for researchers to follow.

Conclusions

  • The PSmOrange system is an effective tool for in vivo cell tracking.
  • It offers significant advantages in studying developmental biology.
  • This method can enhance understanding of complex biological processes.

Frequently Asked Questions

What is the PSmOrange system used for?
The PSmOrange system is used for tracking cells in living organisms, particularly during embryonic development and disease.
Can this method be used in other organisms?
While this protocol is demonstrated in zebrafish, the PSmOrange system can potentially be adapted for use in other model organisms.
What are the advantages of using GFP transgenic backgrounds?
GFP transgenic backgrounds allow for enhanced visualization and tracking of cells using the PSmOrange system.
How is the photoconversion achieved?
Photoconversion is achieved using specific laser wavelengths during confocal microscopy imaging.
What fields can benefit from this technology?
This technology can benefit fields such as developmental biology, cancer research, and regenerative medicine.

私たちは、GFPトランスジェニック背景におけるin vivo細胞追跡のための強力で、簡単で、安価なツールとして、フォトコンバーチブルPSmOrangeシステムを確立しました。このプロトコルは、ゼブラフィッシュモデルシステムにおけるその応用を説明しています。

PSmOrange写真変換技術の全体的な目標は、胚発生と疾患中の生きた動物の細胞を追跡することです。この手法は、組織や臓器に発展する細胞の起源を明らかにするなど、発生生物学における重要な疑問に答えることができます。この手法の主な利点は、GFPトランスジェニックバックグラウンドに適用できることです。

この方法は、再生、腫瘍の進行、浸潤など、さまざまな研究分野にも適用できます。テキストプロトコルに従ってPSmOrangeおよびGFP発現胚を作製し、包埋した後、胚を共焦点顕微鏡の下に置き、20倍対物レンズと488および561ナノメートルレーザーを使用して標本をスキャンし、光変換する領域を特定します。光変換前にPSmOrangeタンパク質を検出するには、対物レンズの上の焦点面で測定した0.74ミリワットの出力で561ナノメートルのレーザーを使用し、必要に応じてレーザー出力を調整します。

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発生生物学 問題108 ゼブラフィッシュ 松果体 光変換 細胞追跡 PSmOrange 蛍光イメージング CLSM in vivoで 開発

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