Highly Sensitive Assay for Measurement of Arenavirus-cell Attachment

Joseph P. Klaus; Jason Botten

doi:10.3791/53682

JoVE Journal
Immunology and Infection

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JoVE Journal Immunology and Infection

Highly Sensitive Assay for Measurement of Arenavirus-cell Attachment

アレナウイルス - 細胞付着の測定のための高感度アッセイ

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08:34 min

March 2, 2016

DOI: 10.3791/53682-v

Joseph P. Klaus¹, Jason Botten^1,2

¹Department of Medicine, Division of Immunobiology,University of Vermont, ²Department of Microbiology & Molecular Genetics,University of Vermont

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

アリーナウイルスのライフサイクルの最初のステップは、ウイルス粒子の宿主細胞への付着です。アリーナウイルス付着イベントの超高感度検出と定量のための定量的(q)RT-PCRベースのアッセイを報告します。

このプロトコルの全体的な目標は、宿主細胞へのアリーナウイルス粒子の付着を定量的に測定することです。この手法の主な利点は、その高感度です。また、ビリオンエンドサイトーシスの測定や、融合後の細胞質へのゲノムの放出の測定にも適応させることができます。

まず、完全なDMEMを作成するには、500ミリリットルのDMEMボトルに、50ミリリットルの熱不活化ウシ胎児血清と、100Xペニシリン-ストレプトマイシンと100X HEPESバッファーをそれぞれ5ミリリットル加えます。一日の終わりに、1ウェルあたり10の2.5倍から4番目のVero E6細胞に播種し、各ウイルスごとに3倍ずつ、最終容量500マイクロリットルの完全DMEMの48ウェル組織培養プレートに播種します。プレートを摂氏37度で、5%二酸化炭素を含む加湿インキュベーターで10〜18時間インキュベー

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