ラットにおける同所性肝細胞癌の局所領域治療のための腫瘍溶解性ウイルスのTransarterial管理
2016年4月15日
Oncolytic virotherapiesは、肝細胞癌(HCC)の治療のための新しい治療法として開発中です。 ここでは、腫瘍溶解性ウイルスの肝動脈投与によるHCCの局所領域療法の方法について述べる。
この外科的介入の全体的な目標は、同所性肝細胞癌または HCC 病変に対する肝動脈投与による局所領域腫瘍溶解性ウイルス療法を提供することです。この方法は、同所性HCCを治療するための局所領域適用療法の倫理性は何かなど、腫瘍溶解性ウイルス分野の重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、腫瘍溶解性ウイルスの高力価を複数のHCC病変に送達できることです。
腫瘍内または全身投与の制限。この技術は、経動脈的化学塞栓術の適用を模倣しています。多くのHCC患者に対する標準治療により、前臨床データの優れた翻訳が可能です。
手術を開始する前に、適切な個人用保護具を着用し、手術部位と器具を70%エタノールで消毒してください。ウイルスの毒性、および使用されているラット株の感受性に応じて、ウイルスを適切な濃度に希釈します。次に、1ミリリットルの注射器に希釈したウイルスを事前に充填し、注射器に30ゲージの針を装備し、気泡を取り除くように注意してください。
ラットがフットパッドの挟み込みに対する反応の欠如によって完全に鎮静していることを確認します。小さく湾曲したメスを使用して、正中線に沿って直接皮膚に小さな垂直切開を行い、剣状突起まで開口部を延長します。次に、腹腔内の臓器に穴を開けないように注意しながら、同じように筋肉層を切開します。
リトラクターを腹部に置き、筋肉と皮膚を広げ、腹部全体を露出させます。次に、7.5 x 7.5 cmのガーゼ綿棒2本を生理食塩水で湿らせ、手術用開口部の上部に1枚、下部に1枚のガーゼを広げます。肝動脈を分離するには、まず2つの湿らせた綿アプリケータースワブを使用して、腹腔から腸と盲腸を下ガーゼスワブに優しく移し、ガーゼを臓器の上に折りたたんで臓器を湿らせます。
次に、左外側肝葉をゆっくりと持ち上げて上部ガーゼにひっくり返し、小さなスプリングハサミを使用して葉の下側の繊維膜を切り開きます。ガーゼをローブの上に折りたたんで所定の位置に保持します。次に、解剖顕微鏡と細かい鉗子を使用して、内部の尾状葉を囲む薄い膜を解剖し、葉を上部ガーゼにひっくり返します。
内側の尾状葉を左外側葉でガーゼの折り目の下に置き、次に後尾状葉を同様に解剖します。後尾状葉をガーゼの下に配置した後、その強い脈動によって総肝動脈を特定します。動脈を解剖学的に右にたどって、細い鉗子を使用して、胃十二指腸動脈と適切な肝動脈を覆い隠している厚い膜組織を取り除きます。
綿のアプリケーターで出血を止めます。次に、2つの細かい非外傷性鉗子を使用して、周囲の膜から総肝胃十二指腸動脈と適切な肝動脈を慎重に解剖します。肝動脈を注入するには、まず、胃十二指腸動脈の下に 7-0 プロレン縫合糸を通し、マイクロ ニードル ホルダーを使用して、分岐部のすぐ上の動脈の遠位端に永久結紮糸を結び、両端に約 2 インチの縫合材料を残します。
次に、総肝動脈に小さなクランプを取り付けて、一時的に血流を遮断します。クランプを配置してから5分以内に、胃十二指腸動脈が鋭く焦点を合わせ、針を正確に挿入するのに十分な大きさに見えるまで倍率を上げます。次に、注射針を胃十二指腸動脈の内腔に配置し、プランジャーをゆっくりと押し下げて形質導入効率を最大化します。
全注入量が投与されたら、針を動脈からゆっくりと引っ込め、胃十二指腸動脈の下に2番目の7-0プロレン縫合糸を通します。.注射部位の上に2番目の永久結紮糸を結び、総肝動脈からクランプを取り外します。適切な肝動脈から肝臓への血流が回復したことを確認し、結紮糸の緩い端を切断します。
内出血がないことを確認します。次に、外部化された組織を腹腔に戻します。4-0ビクリルと湾曲した針を使用して、筋肉と皮膚を別々の層に縫合し、約1mm間隔で連続縫合します。
その後、動物が完全に回復するまで動物を監視します。腫瘍内ウイルス複製の動態はウイルス依存性です。例えば、水疱性口内炎ウイルスの複製は、注射後1日以内にピークに達します。
多数のウイルス病巣により、注入された動物の肝細胞癌結節内にのみ親がいます。対照的に、ニューカッスル病ウイルスは長期にわたるウイルス複製動態を示し、注射後5日目にウイルス力価がピークに達します。ウイルスの固有の腫瘍特異性により、病原体は正常な周囲の肝臓組織から急速に除去されます。
さらに、無作為に選択された水疱性口内炎ウイルスベクターで治療された腫瘍結節の形態学的分析は、腫瘍形質導入効率が腫瘍サイズと相関しないことを示しています。分解性デンプンマイクロスフェアの経肝動脈投与は、ウイルス溶液と同時に、腫瘍結節のほぼ完全な塞栓形成をもたらし、正常な肝臓組織の増殖への影響を最小限に抑えます。ガドリニウム造影剤を使用したこれらの動的造影磁気共鳴画像によってさらに実証されるように。
このテクニックを習得すると、適切に実行すれば、20分で完了できます。この手順を試みるときは、介入に必要な時間を最小限に抑えるために、アンテシアを投与する前にすべてを準備することを覚えておくことが重要です。このビデオを見た後、肝動脈を解剖する方法と、HCCの局所領域療法のための腫瘍溶解性ウイルス溶液の注射のためにそれを準備する方法についてよく理解しているはずです。
ウイルスを扱う作業は非常に危険である可能性があり、この手順を実行するときは、個人用保護服を着用し、作業エリアと器具を適切に消毒するなどの予防策を常に講じる必要があることを忘れないでください。
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概要
本記事では、腫瘍溶解性ウイルスの肝動脈投与を用いた、肝細胞癌（HCC）に対する新しい局所領域療法の方法について解説します。この手法は、治療剤をHCC病変に直接的に、より効率的に届けることを目的としています。
研究の主要構成要素
科学分野
- 腫瘍溶解性ウイルス療法
- 肝細胞癌治療
- 局所領域治療
背景
- 肝細胞癌（HCC）は、一般的な肝癌の一種です。
- 現在の治療選択肢には、全身療法および肝動脈化学塞栓術が含まれます。
- 新たな治療アプローチとして、腫瘍溶解性ウイルスが研究されています。
- 局所投与により、治療効果が向上する可能性があります。
研究目的
- HCCに対する局所領域的オンコリティックウイルス療法の有効性を評価すること。
- 複数の病変への高タイター投与による利点を検証すること。
- 本手法を従来の全身投与と比較すること。
使用方法
- 腫瘍溶解性ウイルスの肝動脈投与。
- 肝動脈化学塞栓療法に類似した手法の適用。
- 同所性HCCモデルにおける治療成績の評価。
- 前臨床データの臨床への適用の分析。
主な結果
- 高タイターの腫瘍溶解性ウイルスをHCC病変に効果的に導入することができます。
- この手法は、腫瘍内投与や全身投与と比較して潜在的な利点があることを示しています。
- 結果は、臨床応用におけるこのアプローチの実現可能性を支持しています。
- 有効性と安全性を確認するために、さらなる研究が必要です。
結論
- 腫瘍溶解性ウイルスを用いた局所領域治療により、HCCの治療成績が向上する可能性があります。
- この手法は、前臨床研究と臨床研究の間のギャップを埋める可能性があります。
- 今後の研究では、送達方法の最適化および長期的な影響の評価に焦点を当てるべきです。
よくある質問
産業界における重要性
この前臨床モデルにより、HCC患者に用いられる肝動脈化学塞栓術を模倣した、肝動脈経由の腫瘍溶解性ウイルスの送達評価が可能になります。これにより、正位腫瘍を持つ免疫能を有するラットにおいて局所的な有効性を評価し、ターゲットの検証をサポートします。このアプローチは、臨床応用前のウイルスベクターの性能における予測精度を高めます。
バイオファーマR&Dにおける戦略的応用
初期発見およびターゲットバリデーション
- 科学的価値：免疫能を有する肝細胞癌（HCC）の同所性モデルにおいて、局所的な腫瘍溶解性ウイルスの投与に関する治療的仮説を検証する。
- 運用的価値：ウイルスの導入効率および腫瘍特異的な複製能を評価することで、生物学的なリスク軽減を可能にする。
スクリーニングおよびアッセイ開発
- 科学的価値： ウイルスベクターの生体内分布および腫瘍への導入効率を評価するための、検証済み生物学的システムを構築する。
- 運用的価値： 一貫した肝動脈カニューレ挿入および注入技術により、アッセイの標準化を支援する。
トランスレーショナル・前臨床研究
- 科学的価値：正位腫瘍においてヒトHCCの動脈供給パターンを再現することで、疾患との関連性をモデル化します。
- 実用的価値：臨床的に適切な投与経路を用いることで、基盤研究から前臨床検証までのトランスレーショナルな連続性を促進します。
パイプラインおよびワークフローの統合
この手法は、ターゲットバリデーションのための初期探索に組み込まれ、再現性のある投与によってスクリーニングへの移行をサポートし、定量的な腫瘍応答指標を通じてトランスレーショナルな意思決定に寄与します。
- 探索生物学： 多発性HCCを有する免疫能を有するモデルにおいて、局所領域療法の有効性の仮説検証を可能にする。
- スクリーニング： 標準化されたウイルス希釈、シリンジ準備、および動脈注入プロトコルにより、アッセイの準備を確実にする。
- 分析： 腫瘍の導入効率、ウイルス複製キネティクス、および形態計測分析を含む定量的アウトプットを提供する。
- トランスレーショナルリサーチ： HCC患者で用いられる肝動脈塞栓術の手順を模倣することで、前臨床的な連続性を確保する。
- エンタープライズでの再利用： 開発中の複数の腫瘍溶解性ベクターを評価するための、再利用可能な外科的プラットフォームを構築する。
運用および企業への影響
- 科学的価値： ウイルスベクターの性能に関する予測信頼度の向上、および局所領域投与におけるメカニズム的な不確実性の低減。
- 運用的価値： 肝動脈の単離および注入における標準化、再現性、およびスケーラビリティの確保。
- 戦略的価値： Go/No-go判断の改善、ベクタースクリーニングにおける資本効率の向上、および後期段階における生物学的リスクの低減。
- ポートフォリオへの影響： 腫瘍特異的な複製および安全性プロファイルに基づいた、リスク調整済みウイルスベクターの優先順位付け。
実施上の留意点
- げっ歯類の肝動脈解剖および血管結紮における微小外科的専門技術が必要です。
- 解剖顕微鏡、精細ピンセット、微小縫合糸、および動脈クランプ器具に依存します。
- ウイルス調製、注入量、および術後モニタリングについて、チーム間での標準化が必要です。
- 適応における検討事項として、ウイルス特有の毒性、ラット系統の感受性、および注入量の最適化が含まれます。
- 実際的な制限として、手術の複雑さ、出血または血栓形成のリスク、およびトレーニング後の処置時間（20分）が挙げられます。
