唾液機能低下のラットモデルにおけるRetroductal顎下腺点滴とローカライズされた分割照射

唾液腺の機能低下は、頭頸部放射線治療の大きな副作用であり、患者の生活の質を低下させます。動物モデルにおける新しい治療法の有効性の実証は、臨床移行前の前提条件です。このプロトコルは、ラット顎下腺のレトロダクト投与と局所照射について説明しています。

この手順の全体的な目標は、顎下腺に治療薬を遡及的に投与して、唾液機能障害との闘いにおけるそれらの有効性を評価することです。この方法は、唾液腺障害の分野における重要な疑問、例えば、放射線に対する唾液腺の機能をどのような治療法が保護または回復させることができるかなど、答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、唾液腺を局所的に治療できるため、非標的組織の副作用のリスクが軽減されることです。

一般的に、この方法に不慣れな人は、ダクトの開口部が見えず、カニューレを盲目的にダクトに操作する必要があるため、苦労します。手順を開始する前に、スカルパルでPE10ポリエチレンチューブの長さ10センチメートルをカットし、チューブの両端を人差し指と両手の親指でつかみ、チューブの中央部分を穏やかな炎の上で加熱し、両側を慎重に引っ張って柔らかくなったチューブを長さの2倍に伸ばします。次に、スカルパルを使用してチューブの中央を45度の角度で切断し、それぞれ先細りの端を持つ2つのカニューレを取得します。

カニューレの1つの先細りでない端を、0.5ccインスリン注射器の29ゲージ針の上に伸ばします。.次に、カニューレを取り外し、220マイクロリットルの生理食塩水をシリンジに引き込みます。シリンジシャフトを軽くたたいて気泡を取り除き、カニューレを針に再度取り付けます。

プランジャーを下げてカニューレから空気を排出し、チューブを通る溶液の自由な流れを確保し、シリンジ内の生理食塩水の量を200マイクロリットルに調整します。次に、つま先のつま先つまみと触知可能な反射によってラットの適切な鎮静レベルを確認し、露出した角膜に眼の潤滑剤を塗布します。特別に設計された拘束プラットフォームにアミマルを置き、上顎の切歯を横バーにかみ合わせます。

下顎の切歯に輪ゴムを巻き付けて、顎を引き下げます。プラットフォームに固定します。次に、滅菌縫合糸を舌に通し、それを持ち上げて口底を持ち上げます。

次に、止血器を使用して縫合糸をクランプし、止血剤を横バーに通します。次に、特注のチークスプレッダーを使用して頬を拡張し、解剖顕微鏡を使用して口の床にある舌下乳頭を見つけます。繊細な鉗子を使用して、事前に形成されたPE10チューブの先細りの端をつかみ、カニューレの先端を舌下乳頭の管開口部に優しく操作します。

次に、カニューレをダクトに3〜5ミリメートル通し、カニューレが障害物なくダクトを通過することを確認します。生理食塩水を点眼する前に、動物の首筋に萎縮剤を皮下注射します。注射の10分後、シアノアクリレートを一滴垂らしてカニューレをダクト開口部に固定します。

接着剤が乾いたら、シリンジプランジャーを毎分50マイクロリットルでゆっくりと押し下げ、200マイクロリットルの生理食塩水が腺に注入されるまで押します。点眼中に背中のプリシュアに遭遇した場合は、チューブを停止してから引き出してから、新しいカニューレで再カニューレを再生します。次に、チューブを止血器で固定し、シリンジを慎重に取り外します。

動物が意識を取り戻すまで、チューブをダクトに30〜60分間放置します。次に、舌を固定している縫合糸を取り外し、動物が完全に回復するまでヒートランプの下の別のケージに移します。顎下腺に分画照射を局所的に加えること。

仰臥位の麻酔ラットの下側境界から胸骨の上部までの領域を包含する3センチメートルの放射線場のスリットを円柱状にします。その領域に1センチメートルの組織等価ボーラスを配置した後。線形加速器の6メガボルトの光子ビームを使用して、放射線源とボーラスの上部との間の距離を100センチメートルに調整します。

適切な曝露時間のために動物に2.5グレイを照射します。放射線被ばく期間の終わりには、ちょうど実証されているように、回復中の動物を温めます。最初の実験では、カニューレの適切な配置は、腺にヘマトキシリンまたはトライプランブルー溶液を注入し、安楽死した動物の腺染色を評価することによって確認されました。

顎下腺は、動物の健康と実験結果に影響を与える可能性のある重度の経口オフターゲット効果を回避して、首に円柱状放射線を選択的に照射できるため、研究されました。この分割放射線スキームが放射線照射後8週間の唾液流に及ぼす影響の分析は、2.5灰色の増分への毎日の曝露が唾液の流れを急激に減少させることを示しています。照射された動物の唾液排出量は、照射を受けていない動物と比較して10倍以内に減少します。

このテクニックを習得すると、適切に実行すれば数分で完了できます。この手順を試みるときは、唾液腺の排泄管へのカニューレの無制限の通過を確保することを覚えておくことが重要です。開発後、この技術は、唾液腺障害の分野の研究者が放射線および自己免疫性唾液腺疾患の治療法を探求する道を開きました。

このビデオを見た後、ラットの顎下腺に後導管留置を行う方法と、放射線毒性改善の治療効果を評価するために腺に局所的に放射線を照射する方法についてよく理解できるはずです。遺伝子治療薬やタンパク質治療薬の取り扱いは非常に危険であり、この手順を実行する際には、針刺しを避けたり、生物学的物質への皮膚曝露を最小限に抑えるなどの予防策を講じる必要があることを忘れないでください。