ソーシャル・コミュニケーションを評価するためにマウスの超音波発声を記録

このプロトコルの全体的な目標は、マウスの子犬または成体からの超音波発声を記録して分析し、そのデータをmouseTubeデータベースで公開することです。そのため、以前に自閉症の突然変異を特定したので、今ではこれらの遺伝子の役割を理解したいと考えています。私たちはマウスモデルを使用しており、特にマウスの超音波発声に注目しています。

このモデルは、神経科学分野における重要な問題を理解するのに役立ちます。例えば、自閉症などの神経精神病性障害のマウスモデルにおいて、遺伝子変異が社会的コミュニケーションにどのように影響するか。このプロトコルの主な利点は、マウスのアドレッシング発声が確実に誘発されることです。

これは、研究間の比較を改善するために、コンテキスト情報の標準化を優先する必要があります。この方法は、mouseTubeデータベースを使用したマウス音速通信に関する知識も向上させます。マウスを準備し、生まれたばかりの子犬を手に入れたら、彼らの鳴き声を録音するためのケージを設置します。

防音ボックスまたは発泡スチロールボックスを使用してください。まず、内部温度を監視するための温度計をセットアップします。次に、ボックス上部の穴を通して、コンデンサー超音波マイクを下げて、マイクの膜が床から約12〜15センチメートル上にくるようにします。

次に、マイクをコンピューターのサウンドカードに接続します。実験していない子犬を録音ボックス内の清潔なプラスチック製の子犬ホルダーに入れ、閉じます。ピーク録音サウンドが歪みなく利用可能な最大振幅を使用するようにします。

実験中はこの設定を変更しないでください。さて、実験的な測定のために、子犬をできるだけ優しく、素早く清潔なプラスチックカップに入れます。次に、子犬をマイクの下に置き、できるだけ優しく静かに箱を閉じます。

次に、16ビット、300キロヘルツの録音を行い、高品質のデータセットを作成します。最大5分間の録音後、子犬を取り出します。その足の入れ墨に注意し、次にデジタル温度計で皮膚温度を測定します。

次に、水性インクを使用して子犬に小さな印をつけ、巣に戻します。テストの合間に、10%エタノールを使用してカップを洗い、完全に乾かします。成人用テストケージには、低強度の白色光で照らされた防音ボックスに収まるプレキシガラス製ケージを使用します。

ケージを石鹸水できれいにし、乾かし、2センチメートルの新鮮な寝具で満たします。マイクをケージの片隅に固定し、マイクの角度を調整してケージ全体から音をキャプチャします。次に、ビデオカメラを防音チャンバーの上に置いて、マイクがコーナーを覆い隠さないようにテストケージの表面を表示します。

実験的でない動物のペアを使用して、前と同じように録音のゲインを設定します。実験では、最初に1匹の動物をケージに導入して、乗員の役割を果たします。20分間慣れさせます。

この間にベースライン記録が行われる場合があります。次に、ビデオとオーディオの録音を開始し、同性の2番目の動物を紹介して新人の役割を果たします。ケージに2回目のタッチでビープ音を鳴らすことで、録音を同期させます。

動物の相互作用を必要なだけ(4分間など)記録します。このテストの準備として、テスト日の早朝に、各女性から膣塗抹標本を採取して、発情周期の状態を判断します。メスの尻尾をつかみ、ケージのグリッドをつかませます。

ピペットを使用して、20マイクロリットルのPBSを注入して回収することにより、彼女の膣を数回すすぎます。PBSが膣から洗い流されるときに注意してください。少し曇っているときは、十分なセルが含まれています。

粘液を作らないように、これを慎重に行ってください。サンプルをスライドに広げます。一度に4つまで調べることができます。

先に進む前に、サンプルを乾かしてください。ドラフトの下で、スライドをPBS中の0.1モルのMay-Grunwald溶液の浴中で3分間インキュベートします。次に、スライドをPBSバスに1分間移します。

次に、スライドをPBS中の体積重量5%のGiemsa Rの浴に移します。10分後、スライドを新しいPBSでさらに1分間すすぎます。次に、染色されたスライドを調べます。

サンプルが核を持たず、青く染まる大きな角化した上皮細胞のみを示している場合、女性は完全に発情しています。そのような女性だけがテストに使用できます。次に、男性を乗員としてテストケージをセットアップします。

彼に10分間慣れさせ、必要に応じてベースラインのオーディオ録音をします。次に、ビデオとオーディオの録音を開始し、完全に発情している女性を紹介します。ビープ音を使用して、前と同じようにレコードを同期します。

次に、動物たちを必要なだけ、例えば4分間など、相互作用させます。録音が完了したら、マウスをそれぞれのケージに戻します。パスツール研究所のmouseTubeウェブサイトにデータをアップロードするには、まずログインしてください。

から記録されたマウス系統がmouseTubeデータベースに存在するかどうかを確認するには、Strainsボタンをクリックしてください。そうでない場合は、管理者に作成を依頼してください。次に、動物の被写体を作成します。

記録された動物の識別コードを入力します。それらをグループに集めて、後でデータを取得しやすくします。次に、使用されるプロトコルの説明を入力します。

次に、レコーディング セッションごとに実験を作成します。プロトコル、記録された個人のグループ、使用されたハードウェアとソフトウェア、およびそれらの特異性を指定します。この実験では、発声ファイルに対応するすべてのメタデータが収集されます。

次に、発声ファイルへのリンクを作成します。まず、リスト内の実験を選択します。次に、音声ファイルのURLをコピーして、[リンクするファイル]列の対応するフィールドに貼り付けます。

このデータベースに配置しているリンクが実際には適切でない可能性があります。発声ファイルをホストしているサーバーが、コミュニティのメンバーのために所属機関の外部からアクセスできることを確認してください。[詳細] の [メモ] セクションで、必要に応じて提供します。

たとえば、オーディオ ファイルに付随するビデオ ファイルへのリンクが入力されたことを指定します。最後に、入力を行った後、それらを検証します。ファイルごとに各ボックスに入力する必要はありません。

必要に応じて、入力したリンクを変更します。自閉症スペクトラム障害に関連する遺伝子であるShank2の発現を欠くマウスを特徴付けました。これらのマウスは、非定型的な音声コミュニケーションを示し、最初に雌の相互作用における通話率の低下として観察されました。

次に、子犬期から成年期に変化する5つの鳴き声の標準的なレパートリーが評価されました。測定は最初にP2の子犬で行われました。ボーカルのレパートリーはP6の子犬でも変わりませんでした。

P10では、ボーカルのレパートリーは変わらなかった。この時点まで、Shank2 nullマウスには大きな差は見られませんでした。しかし、成人期になると、遺伝子型に関連する違いが明らかになりました。

発情期のオスがメスと対話すると、突然変異したオスによる短くて構造化されていないコールの割合が顕著に増加しました。女性間で聞こえる通話パターンでは、Shank2 nullの女性は、通常の女性とペアになった場合、より短く構造化されていない通話を発し、複雑でない通話と頻度のジャンプ通話を発しました。雄または雌のShank2ヌルマウスのペアは、野生型の同腹仔のペアと比較して低いピーク周波数で発声されました。

行動イベントと発声放射の解析を同期させることで、変異マウスにおける超音波発声の放出の文脈における障害の同定を可能にした。Shank2 nullマウスは、新参者と物理的に接触しているとき、特に肛門性器領域を嗅いでいるときに発声する頻度が少なかった。新参者がShank2ヌルマウスの視野にいたときに、より多くの発声が聞こえました。

このビデオを見た後、マウスの超音波発声を記録する方法と、mouseTubeデータベースにデータをアップロードする方法をよく理解しているはずです。この手順を試みる際には、マウスの声帯の高さと内部生存率を考慮して、十分な数の個別プレコンディショニングを記録することを忘れないでください。