Measurement of Calcium Fluctuations Within the Sarcoplasmic Reticulum of Cultured Smooth Muscle Cells Using FRET-based Confocal Imaging

Gabriela Ziomek; Cornelis van Breemen; Mitra Esfandiarei

doi:10.3791/53912

FRETベースの共焦点イメージングを使用した培養平滑筋細胞の小胞体内カルシウム変動の測定

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Biology

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Measurement of Calcium Fluctuations Within the Sarcoplasmic Reticulum of Cultured Smooth Muscle Cells Using FRET-based Confocal Imaging

FRETベースの共焦点イメージングを使用した培養平滑筋細胞の小胞体内カルシウム変動の測定

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10:05 min

June 20, 2016

DOI: 10.3791/53912-v

Gabriela Ziomek¹, Cornelis van Breemen¹, Mitra Esfandiarei^1,2

¹Department of Anaesthesiology, Pharmacology, and Therapeutics,University of British Columbia, ²Department of Biomedical Sciences,Midwestern University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

現在、ほとんどの利用可能なカルシウム指標は、培養平滑筋細胞の筋小胞体から放出されるカルシウムの間接的な測定値として、細胞質のカルシウム過渡現象を定量化するために使用されています。このプロトコルは、筋小胞体内腔内のカルシウムシグナルの直接測定を可能にする特定のFRETベースのインジケーターの使用を説明しています。

このイメージング技術の全体的な目標は、特に血管平滑筋細胞におけるカルシウム動員剤に応答した内腔SRカルシウムレベルの変動を監視することです。この方法は、細胞のカルシウム循環をより直接的に解明するのに役立ちます。例えば、筋小胞体内のカルシウム輸送と小胞体ストレスとの関係を知ることは非常に重要です。

この手法の利点は、細胞質の変化の間接的な測定からカルシウムを外挿するのではなく、筋小胞体の内腔内のカルシウムを直接測定できることです。この手法を実証するのは、私の研究室の大学院生であるGabriela Ziomekです。この手順を開始するには、DMEMで1〜25希釈のタンパク質混合物を調製します。

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