siRNA Transfection and EMSA Analyses on Freshly Isolated Human Villous Cytotrophoblasts

Adjimon Gatien Lokossou; Chirine Toufaily; Amandine Vargas; Benoit Barbeau

doi:10.3791/53995

新たに単離したヒト絨毛細胞栄養芽層に対するsiRNAトランスフェクションおよびEMSA分析

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Genetics

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siRNA Transfection and EMSA Analyses on Freshly Isolated Human Villous Cytotrophoblasts

新たに単離したヒト絨毛細胞栄養芽層に対するsiRNAトランスフェクションおよびEMSA分析

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September 20, 2016

DOI: 10.3791/53995-v

Adjimon Gatien Lokossou¹, Chirine Toufaily², Amandine Vargas³, Benoit Barbeau¹

¹Department of Biological Sciences,University of Quebec in Montreal, ²Department of Pharmacology and Therapeutics,McGill University, ³Department of Clinical Sciences,University of Montreal

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

このプロトコルは、効率的に新たに単離されたヒト絨毛細胞栄養芽層でのsiRNAのトランスフェクションマイクロポを使用して、これらの細胞におけるDNA-タンパク質複合体を同定するための方法が記載されています。トランスフェクトされた細胞は、ウェスタンブロットによりモニターすることができ、EMSAは、4日間の培養期間中に分析します。

このプロトコルの全体的な目標は、新たに単離された初代絨毛性細胞栄養芽細胞のトランスフェクションに最適な条件を実証し、プロモーター部位でのDNAタンパク質相互作用の同定方法を提示することです。この方法は、細胞栄養膜の分化に関与する遺伝子やその発現に関与する制御メカニズムなど、胎盤研究の分野における重要な疑問に答えるのに役立ちます。この手法の主な利点は、実行が簡単で、非常に効率的であることです。

さらに、この実験の実施に必要な時間は短く、多くの異なるサンプルを含めることができます。これらの手順を実演するのは、私の研究室の元博士課程の学生であるChirine Toufailyと、研究員のYong Xiaoです。ここでは、一次絨毛性細胞栄養芽細胞が標準的なプロトコルに従って新鮮な胎盤から単離されます。

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