Name: インビトロコロニーアッセイでトライ強力な前駆細胞を特徴付けるための大人のマウスの膵臓から分離されました (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-06-10T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 31 s
Description: 学ぶ インビトロコロニーアッセイ法でマウス膵臓由来前駆細胞の自己更新と分化能を評価する方法。メチルセルロース半固形培地を用いて個々の細胞の生物学的ポテンシャルを解析し、膵臓細胞生物学の理解を深めます。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

私たちは、ソートの支援のための希望の都市で分析サイトメトリーコアからルーシー・ブラウンとアレクサンダースパッラに感謝します。この作品は、国立衛生研究所によって部分的にサポートされている（NIH）ADRにHTKにR01DK081587とR01DK099734を付与し、U01DK089533、国立科学財団助成金NSF-DMR-1206121及び再生医療のためのカリフォルニア工科大学によってDATにRB5-07398を付与サポートジョセフ・J・ジェイコブスDATにカリフォルニア工科大学で医学のための分子工学研究所、およびオックスナード財団とエラ・フィッツジェラルド財団からのものからHTKにも深く感謝しています。 資金調達：この作品は、国立衛生研究所によって部分的にサポートされている（NIH）ADRにR01DK081587とR01DK099734 HTKに、とU01DK089533を付与し、国立科学財団の助成によりNSF-DMR-1206121及び再生医療のためのカリフォルニア工科大学にRB5-07398を付与DATは、ジョセフ・J・ジェイコブスからサポートDATにカリフォルニア工科大学で医学のための分子工学研究所、およびオックスナード財団とHTKのエラ・フィッツジェラルド財団からのものも深く感謝しています。この刊行物で報告された研究は、受賞数P30CA33572の下で国立衛生研究所の国立癌研究所によってサポートされている分析サイトメトリーコアと光学顕微鏡デジタルイメージングコアで実行される作業が含まれていました。 研究のスポンサー：スポンサーは、研究デザイン、収集、分析、またはデータの解釈に参加しませんでした。

<ol><li>Gu, G., Brown, J. R., Melton, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+lineage+tracing+reveals+the+ontogeny+of+pancreatic+cell+fates+during+mouse+embryogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Mech+Dev%22%5BJournal%5D)">Direct lineage tracing reveals the ontogeny of pancreatic cell fates during mouse embryogenesis.</a> Mech Dev. 120, 35-43 (2003).</li>
<li>Kopp, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sox9%2B+ductal+cells+are+multipotent+progenitors+throughout+development+but+do+not+produce+new+endocrine+cells+in+the+normal+or+injured+adult+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Sox9+ ductal cells are multipotent progenitors throughout development but do not produce new endocrine cells in the normal or injured adult pancreas.</a> Development. 138, 653-665 (2011).</li>
<li>DiGiusto, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA-based+gene+therapy+for+HIV+with+lentiviral+vector-modified+CD34%28%2B%29+cells+in+patients+undergoing+transplantation+for+AIDS-related+lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22Science+translational+medicine%22%5BJournal%5D)">RNA-based gene therapy for HIV with lentiviral vector-modified CD34(+) cells in patients undergoing transplantation for AIDS-related lymphoma.</a> Science translational medicine. 2, 36-43 (2010).</li>
<li>Inada, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbonic+anhydrase+II-positive+pancreatic+cells+are+progenitors+for+both+endocrine+and+exocrine+pancreas+after+birth%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Carbonic anhydrase II-positive pancreatic cells are progenitors for both endocrine and exocrine pancreas after birth.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105, 19915-19919 (2008).</li>
<li>Solar, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+exocrine+duct+cells+give+rise+to+insulin-producing+beta+cells+during+embryogenesis+but+not+after+birth%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Pancreatic exocrine duct cells give rise to insulin-producing beta cells during embryogenesis but not after birth.</a> Dev Cell. 17, 849-860 (2009).</li>
<li>Ku, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minireview%3A+pancreatic+progenitor+cells--recent+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Minireview: pancreatic progenitor cells--recent studies.</a> Endocrinology. 149, 4312-4316 (2008).</li>
<li>Jin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colony-forming+cells+in+the+adult+mouse+pancreas+are+expandable+in+Matrigel+and+form+endocrine%2Facinar+colonies+in+laminin+hydrogel%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Colony-forming cells in the adult mouse pancreas are expandable in Matrigel and form endocrine/acinar colonies in laminin hydrogel.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110, 3907-3912 (2013).</li>
<li>Fu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA-26a+targets+ten+eleven+translocation+enzymes+and+is+regulated+during+pancreatic+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">MicroRNA-26a targets ten eleven translocation enzymes and is regulated during pancreatic cell differentiation.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110, 17892-17897 (2013).</li>
<li>Ghazalli, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+Pancreas+of+Mice+Contains+Tripotent+Progenitors+Capable+of+Giving+Rise+to+Duct%2C+Acinar%2C+and+Endocrine+Cells+In+Vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Postnatal Pancreas of Mice Contains Tripotent Progenitors Capable of Giving Rise to Duct, Acinar, and Endocrine Cells In Vitro.</a> Stem Cells Dev. , (2015).</li>
<li>Jin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colony-forming+progenitor+cells+in+the+postnatal+mouse+liver+and+pancreas+give+rise+to+morphologically+distinct+insulin-expressing+colonies+in+3D+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Rev+Diabet+Stud%22%5BJournal%5D)">Colony-forming progenitor cells in the postnatal mouse liver and pancreas give rise to morphologically distinct insulin-expressing colonies in 3D cultures.</a> Rev Diabet Stud. 11, 35-50 (2014).</li>
<li>Jin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vitro+Multilineage+Differentiation+and+Self-Renewal+of+Single+Pancreatic+Colony-Forming+Cells+from+Adult+C57Bl%2F6+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">In Vitro Multilineage Differentiation and Self-Renewal of Single Pancreatic Colony-Forming Cells from Adult C57Bl/6 Mice.</a> Stem Cells Dev. , (2014).</li>
<li>Huch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unlimited+in+vitro+expansion+of+adult+bi-potent+pancreas+progenitors+through+the+Lgr5%2FR-spondin+axis%5BTitle%5D)+AND+%22Embo+J%22%5BJournal%5D)">Unlimited in vitro expansion of adult bi-potent pancreas progenitors through the Lgr5/R-spondin axis.</a> Embo J. 32, 2708-2721 (2013).</li>
<li>Greggio, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artificial+three-dimensional+niches+deconstruct+pancreas+development+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Artificial three-dimensional niches deconstruct pancreas development in vitro.</a> Development. 140, 4452-4462 (2013).</li>
<li>Lee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+and+conversion+of+human+pancreatic+ductal+cells+into+insulin-secreting+endocrine+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Expansion and conversion of human pancreatic ductal cells into insulin-secreting endocrine cells.</a> Elife. 2, e00940(2013).</li>
<li>Dorrell, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+organoid-initiating+cells+in+mouse+pancreas+and+liver+are+phenotypically+and+functionally+similar%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">The organoid-initiating cells in mouse pancreas and liver are phenotypically and functionally similar.</a> Stem Cell Res. 13, 275-283 (2014).</li>
<li>Ku, H., Yonemura, Y., Kaushansky, K., Ogawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombopoietin%2C+the+ligand+for+the+Mpl+receptor%2C+synergizes+with+steel+factor+and+other+early+acting+cytokines+in+supporting+proliferation+of+primitive+hematopoietic+progenitors+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Thrombopoietin, the ligand for the Mpl receptor, synergizes with steel factor and other early acting cytokines in supporting proliferation of primitive hematopoietic progenitors of mice.</a> Blood. 87, 4544-4551 (1996).</li>
<li>Ku, H. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin-expressing+colonies+developed+from+murine+embryonic+stem+cell-derived+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Insulin-expressing colonies developed from murine embryonic stem cell-derived progenitors.</a> Diabetes. 56, 921-929 (2007).</li>
<li>Winkler, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative+assay+for+insulin-expressing+colony-forming+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A quantitative assay for insulin-expressing colony-forming progenitors.</a> J Vis Exp. , e3148(2011).</li>
<li>Gong, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+gene+expression+atlas+of+the+central+nervous+system+based+on+bacterial+artificial+chromosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A gene expression atlas of the central nervous system based on bacterial artificial chromosomes.</a> Nature. 425, 917-925 (2003).</li>
<li>Formeister, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+SOX9+levels+differentially+mark+stem%2Fprogenitor+populations+and+enteroendocrine+cells+of+the+small+intestine+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Distinct SOX9 levels differentially mark stem/progenitor populations and enteroendocrine cells of the small intestine epithelium.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 296, G1108-G1118 (2009).</li>
<li>Fluidigm. Real-Time PCR Analysis User Guide (PN) 68000088 K1. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.fluidigm.com/documents">http://www.fluidigm.com/documents</a> (2015).</li>
<li>Seymour, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dosage-dependent+requirement+for+Sox9+in+pancreatic+endocrine+cell+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">A dosage-dependent requirement for Sox9 in pancreatic endocrine cell formation.</a> Dev Biol. 323, 19-30 (2008).</li>
<li>Ogawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+and+proliferation+of+hematopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Differentiation and proliferation of hematopoietic stem cells.</a> Blood. 81, 2844-2853 (1993).</li>
<li>Suzuki, A., Nakauchi, H., Taniguchi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+isolation+of+multipotent+pancreatic+progenitors+using+flow-cytometric+cell+sorting%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Prospective isolation of multipotent pancreatic progenitors using flow-cytometric cell sorting.</a> Diabetes. 53, 2143-2152 (2004).</li>
<li>Seaberg, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+identification+of+multipotent+precursors+from+adult+mouse+pancreas+that+generate+neural+and+pancreatic+lineages%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Clonal identification of multipotent precursors from adult mouse pancreas that generate neural and pancreatic lineages.</a> Nat Biotechnol. 22, 1115-1124 (2004).</li>
<li>Zhou, Q., Brown, J., Kanarek, A., Rajagopal, J., Melton, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+reprogramming+of+adult+pancreatic+exocrine+cells+to+beta-cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">In vivo reprogramming of adult pancreatic exocrine cells to beta-cells.</a> Nature. 455, 627-632 (2008).</li>
<li>Baeyens, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+cytokine+treatment+induces+acinar+cell+reprogramming+and+regenerates+functional+beta+cell+mass+in+diabetic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Transient cytokine treatment induces acinar cell reprogramming and regenerates functional beta cell mass in diabetic mice.</a> Nat Biotechnol. 32, 76-83 (2014).</li>
<li>Thorel, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conversion+of+adult+pancreatic+alpha-cells+to+beta-cells+after+extreme+beta-cell+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Conversion of adult pancreatic alpha-cells to beta-cells after extreme beta-cell loss.</a> Nature. 464, 1149-1154 (2010).</li>
</ol>

著者らは、開示することは何もありません。

膵臓コロニーアッセイおよび単一コロニーをここで説明する分析は、過去数十年23中の造血前駆細胞の生物学を解読で主要な役割を果たしてきたメチルセルロースを含む、造血コロニーアッセイに触発されました。これらのアッセイ（ 図5）において、膵臓細胞を適切な成長因子およびECMタンパク質のリングの形成をサポートする、高密度または内分泌/腺房コロニー7とメチルセルロースを含有する半固体培地に播種する解離。細胞のコロニーを生じることが可能な単一の前駆細胞はPCFUと呼ばれます。マイクロ流体定量RT-PCRおよびホールマウント免疫染色を用いて、個々のコロニーを特徴づけることにより、元のPCFUsの系統電位を推定することができます。これは、成体マウスPCFUsの大部分はトリ強力なインビトロ 7,9 内管、腺房、及び内分泌系統細胞を生じさせることが可能であることが見出されました。 MUR一方、伊根のECMタンパク質は、ダクト系統に向けてトライ強力PCFUの分化を促進する、ラミニンヒドロゲルは、堅牢な内分泌および腺房細胞系譜分...

膵臓は、3つの主要な細胞系統で構成されています。腺房細胞が消化酵素を分泌する、ダクトは、病原体をかわすと腸に消化酵素を輸送するためにムチン分泌、および内分泌細胞は、グルコース恒常性を維持し、インスリンおよびグルカゴンなどのホルモンを、分泌します。膵臓の胚発生時には、初期の導管細胞は、成体動物1,2の膵臓に3系統を生じることができるトライ強力な前駆細胞の源です。そのような骨髄幹細胞などの成体幹細胞および前駆細胞は、すでに正常に様々な疾患3を治療するために使用されるので、成体膵臓幹細胞および前駆細胞を見つけることに強い関心があります。成体膵臓幹細胞および前駆細胞の単離および操作が可能であった場合は、これらの細胞は、インスリン分泌細胞は自己免疫によって破壊された1型糖尿病のような疾患を治療するために使用することができます。 in vivoでのcre-LOX系譜追跡技術を使用して、稲田と同僚は、マーカーで標識された大人のマウス膵管細胞、炭酸脱水酵素IIは、すべての3つの膵臓系統4を生じさせることができることを示しました。しかしながら、このようなHNF1b 5とのSox9 2などの他の管のマーカーを使用して、それが管細胞は、成体マウスにおけるβ細胞の主な原因ではないと結論付けられました。 数年前、我々は、上記の議論の原因が必要な自己再生および多系列分化二つの基準に測定するために使用することができる適切な分析ツールで、フィールド6,7において、欠如に起因し得ることを提案し幹細胞を定義します。上記のin vivoでのcre-LOXの系統追跡技術上記集団レベルでの前駆-子孫関係の証拠を提供することができます。しかし、この系統のトレース技術は、単一の前駆細胞は、自己再生し、複数の系統に分化することができるかどうかを識別するために、その電力が制限されます。いくつかのモノ強力な前駆細胞、異なる系統の電位のそれぞれが、一緒に分析した場合、それらをまとめて多系列分化能力を持っているように見える可能性があるため、単一細胞分析が重要です。さらに、幹細胞は、通常、成人器官の小集団です。マイナーな細胞集団の活動は、主要な人口でマスクすることができました。したがって、集団研究からの否定的な結果は、必ずしも、幹細胞が存在しないことを示すものではありません。最後に、CRE-LOXの系譜トレースは、現在、自己再生の測定を許可していません。 膵臓前駆細胞生物学、コロニーの分野で技術的なギャップに対処を開始するには7-11またはオルガノイド12月15日 </su三次元培養系を使用してP&gt;アッセイを考案しました。膵臓前駆細胞のための二つのコロニーアッセイは、我々の研究室で開発された：1は、マウスの細胞外マトリックスタンパク質（ECM）（ 方法および装置表を参照）の市販の調製物が含まれ、もう一方はラミニンヒドロゲル、定義された人工的なECMタンパク質7-11が含まれています 。前駆細胞は、メチルセルロースを含む半固形培地中で混合します。メチルセルロースは、木材繊維から調製し、生物学的に不活性粘性材料であり、日常的に、造血コロニーアッセイ16において使用されています。それらは再集合体をできないようにメチルセルロースを含む半固形培地は、単一の前駆細胞の移動を規制します。しかし、培地は、前駆細胞が増殖し、3次元空間における細胞のコロニーに分化させるのに十分柔らかいです。血液学者の伝統に従い、細胞のコロニーを生じさせることができた膵臓前駆細胞は、nでしたアメッド膵臓コロニー形成単位（P​​CFU）。ネズミECM-含むコロニーアッセイで増殖させた場合PCFUsは、「リング」コロニー7と命名されている嚢胞性コロニーを生じさせます。 Wntアゴニストを添加すると、R-spondin1は、マウスのECM含有培養に、いくつかのリングコロニーを「密」コロニー7に変わります。この記事では、マウスECM培養で生育したコロニーのこれらの2つのタイプをまとめて「リング/高密度」コロニーと呼ばれます。リング/高密度コロニーを単一細胞懸濁液に解離し、ラミニンヒドロゲルを含む培地に再播種するとき、「内分泌/腺房「コロニー7が形成されています。 単一のコロニーを分析使用して、9ネズミ膵臓、のいずれかから大人（2-4ヶ月齢）7,11または若い（1週齢）リング/高密度および内分泌/腺房コロニーの大部分は、3つすべてを表現することが判明しました系統マーカー。これは、発信PCFUsのほとんどがトライ強力であることを示唆しています。ネズミECM-含むコロニーアッセイでは、大人のマウスPCFUsロバスト自己複製と文化7で11週間にわたって約50万回を展開します。ラミニンヒドロゲルの存在下で、ネズミPCFUsは内分泌および腺房細胞と腺管系統7,9,11に非常に少ないに優先的に分化することが奨励されているのに対し、マウスECMは、優先的に、内分泌および腺房系統以上の管細胞の分化をサポートしています。重要なことは、インスリン+グルカゴン-モノホルモンの細胞はラミニンヒドロゲル培養物中で生成され、機能的成熟を ​​示唆し、 インビトロ 7,9 においてグルコース刺激に応答してインスリンを分泌しています。個々のPCFUsの三系列の分化ポテンシャル7,9および自己再生11は、コロニー形成のためにウェルあたり1細胞を培養すること、 すなわち 、単一細胞マイクロマニピュレーションによって確認されています。一緒に、これらの結果は、自己再生、トリpotenがあるという証拠を提供しますトン、3D培養における活性を示す生後マウスの膵臓内の前駆細胞様細胞。 この資料に記載されたマウスPCFUアッセイは、マウス胚性幹細胞（たmESC）17から分化した前駆細胞のために設計された前コロニーアッセイに由来するものです。そのプロトコルは、別のJoveの出版物18に詳細に記載されています。培養成分及び成人PCFUs用マウスECM含有コロニーアッセイを行うために必要な技術は、MESC由来前駆17,18と同じです。したがって、アッセイのこれらの側面は、ここでは繰り返さないことにします。代わりに、次の手順では、対処されることになります：1）成人の膵臓の解離および成体マウス7、2）選別された細胞の単一細胞操作、3）シングルコロニーからPCFUsを豊かCD133 +のSox9 / EGFP +管細胞を、ソーティングマイクロ流体定量RT-PCRおよびホールマウント免疫染色を用いて分析し、コロニーの4）解離単一細胞懸濁液にsおよびマウスECMまたはラミニンヒドロゲルコロニーアッセイに再メッキ。

<table><tbody><tr><td>マウスECMタンパク質(マトリゲル)</td><td>ベクトン・ディクソン(フランクリンレイクス、ニュージャージー州、米国)</td><td>354230</td>ストック<td>は-20&#176に保たれています。デ</td></tr><tr><td>ビッド・ティレル(米国</td><td></td>カリフォルニア州パサデナ)が提供するC<td>ラミニンヒドロゲル</td>在庫は<td>-20&#176に保たれています。C</td></tr><tr><td>メチルセルロース</td><td>信越化学 (東京)</td><td></td> <td>1,500 センチポアズ (動粘度単位 15 g/cm/秒) (高粘度)</td></tr><tr><td>Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline</td><td>Mediatech (Manassas, VA, USA)</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline</td><td>Gibco (Grand Island, NY, USA)</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>50 ml Flacon Conical vial</td><td>Corning Inc. (Corning, NY、米国)</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>100 mm x 20 mm懸濁培養皿</td><td>Corning Inc.(米国ニューヨーク州コーニング)</td><td>430591</td><td></td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin</td><td>Sigma(米国ミズーリ州セントルイス)</td><td>A8412</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td>Gibco(米国ニューヨーク州グランドアイランド)</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>DNase1</td><td>Calbiochem(ドイツ、ダルムシュタット)</td><td>260913</td><td></td></tr>コ<tr><td>ラゲナーゼB</td><td>ロシュ(CH-4070、バーゼル、シュヴァイツ、スイス)</td><td>11088831001</td><td>在庫は-20&#176に保たれました。C</td></tr><tr><td>抗マウス CD16/32</td><td>Biolegend (サンディエゴ、カリフォルニア州、米国)</td><td>101310</td><td>低エンドトキシン、アジドフリー</td></tr><tr><td>PE-Cy7 ラット IgG2a &κ;アイソタイプコントロール</td><td>バイオレジェンド(米国カリフォルニア州サンディエゴ)</td><td>400522</td><td></td></tr><tr><td>ラットIgG1 & κ;Isotype Control</td><td>eBioscience (San Diego, CA, USA)</td><td>13-4301-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD133-Biotin</td><td>eBioscience (San Diego, CA, USA)</td><td>13-1331-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD71-PE-Cy7</td><td>Biolegend (San Diego, CA, USA)</td><td>113812</td><td></td></tr><tr><td>Streptavidin-Allophycocyanin</td><td>Biolegend (San Diego, CA, USA)</td><td>405207</td><td></td></tr><tr><td>4',6-Diamidino-2-phenylindole</td><td>Invitrogen (マサチューセッツ州ウォルサム、&nbsp;USA)</td><td>3571</td><td>在庫は-20 &#176に保たれました。C</td></tr><tr><td>Anti-mucin 1</td><td>Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA USA)</td><td>HM-1630-P1</td><td></td></tr><tr><td>Dylight 649 Goat anti-Armenian Hamster</td><td>Jackson Immuno (West Grove, PA, USA)</td><td>127-495-160</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium: Nutrient Mixture F-12</td><td>Mediatech(Manassas, VA, USA)</td><td>10-092-CV</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Tissure Culture Biologicals (Long Beach, CA, USA)</td><td>101</td><td>ストックは-20&#176に保たれました。C</td></tr><tr><td>Tris Ethylenediaminetetraacetic</td><td>acid TEKnova (Hollister, CA, USA)</td><td>T0221</td><td></td></tr><tr><td>Rneasy Micro Kit</td><td>Qiagen (Venlo, Netherlands)</td><td>74004</td><td></td></tr><tr><td>QuantiTec Reverse Transcription Kit</td><td>Qiagen (Venlo, Netherlands)</td><td>205310</td><td></td></tr><tr><td>CellsDirect One-Step qRT-PCR Kit</td><td>Ambion/Invitrogen(Grand Island, NY, USA)</td><td>11753-100</td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド</td><td>Santa Cruz Bio (Santa Cruz, CA, USA)</td><td>SC-281692</td><td></td></tr><tr><td>ヤギ血清</td><td>Jackson Immuno (West Grove, PA, USA)</td><td>005-000-121</td><td>Stock kept at -20 &#176;C</td></tr><tr><td>Donkey serum</td><td>Jackson Immuno (West Grove, PA, USA)</td><td>0017-000-121</td><td>在庫は-20 &#176;C</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma (米国ミズーリ州セントルイス)</td><td>T9284</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin Sigma</td><td>(米国ミズーリ州セントルイス)</td><td>T-4799</td><td></td></tr><tr><td>エチレンジアミン四酢酸</td><td>Invitrogen (マサチューセッツ州ウォルサム、&nbsp;米国)</td><td>15575-020</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>Life Technologies(米国マサチューセッツ州ウォルサム)</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>滅菌水</td><td>Gibco(米国ニューヨーク州グランドアイランド)</td><td>15230-147</td><td>分子生物学グレード</td></tr><tr><td>パスツールピペット</td><td>フィッシャーサイエンティフィック(米国ペンシルベニア州ピッツバーグ)</td><td>13-678-8B</td><td></td></tr><tr><td>40 &mu;m フィルターメッシュ</td><td>フィッシャーサイエンティフィック (米国ペンシルベニア州ピッツバーグ)</td><td>08-771-1</td><td></td></tr><tr><td>70 &mu;m フィルターメッシュ</td><td>Fisher Scientific (ペンシルベニア州ピッツバーグ、米国)</td><td>08-771-2</td><td></td></tr><tr><td>TC Plate 96 Well Suspension</td><td>Sarstedt</td><td>83.3924 (Previously 83.1835)</td><td></td></tr><tr><td>1 cc Syringe</td><td>Becton Dickson (Franklin Lakes, NJ, USA)</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>10 cc Syringe</td><td>Becton Dickson (Franklin Lakes, NJ, USA)</td><td>301604</td><td></td></tr><tr><td>48.48 Dyanmic Array Chip</td><td>Fluidigm (San Francisco, CA,アメリカ)</td><td>BMK-M-48.48</td><td></td></tr><tr><td>Fluidigm GE 48.48 ダイナミックアレイサンプル &アッセイローディング試薬キット</td><td>Fluidigm (米国カリフォルニア州サンフランシスコ)</td><td>85000800</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Universal PCR Master Mix</td><td>Applied Biosystems (米国ニューヨーク州グランドアイランド)</td><td>4304437</td><td></td></tr><tr><td>ポリエチレングリコールソルビタンモノラウレート</td><td>Sigma (米国ミズーリ州セントルイス)</td><td>P7949</td><td></td></tr><tr><td>ガラス底皿</td><td>MatTek (米国マサチューセッツ州アッシュランド)</td><td>P35G-1.5-14-C</td><td>35 mm ペトリ皿、ガラス底</td></tr><tr><td>マウスピース/ラバーチューブ</td><td>Renova Life Inc.(米国メリーランド州カレッジパーク)</td><td>MP-SET</td><td></td></tr><tr><td>ニコチンアミド</td><td>シグマ(米国ミズーリ州セントルイス)</td><td>N0636</td><td>在庫は-20 &#176に保たれています。C</td></tr><tr><td>血管内皮増殖因子</td><td>R&D Systems (ミネソタ州ミネアポリス、米国)</td><td>293-VE</td><td>ストックは-80 &#176に保たれています。C</td></tr><tr><td>アクティビン B</td><td>R&D Systems (ミネソタ州ミネアポリス、米国)</td><td>659-AB</td><td>在庫は-80 &#176に維持。C</td></tr><tr><td>Extendin 4</td><td>Sigma (St. Louis, MO, USA)</td><td>E7144</td><td>Stock kept at -20 &#176;C</td></tr><tr><td>Rspondin-1</td><td>R&D Systems (ミネソタ州ミネアポリス、米国)</td><td>3474-RS</td><td>在庫は-80 &#176に保たれています。C</td></tr><tr><td>Falcon 5 ml ポリスチレン丸底チューブ</td><td>Corning Inc. (米国ニューヨーク州コーニング)</td><td>352054</td><td></td></tr><tr><td>PrecisionGlide Needle 18 G x1 1/2</td><td>Becton Dickson (Franklin Lakes, NJ, USA)</td><td>305196</td><td></td></tr><tr><td>PrecisionGlide Needle 16 G x 1 1/2</td><td>Becton Dickson (Franklin Lakes, NJ, USA)</td><td>305198</td><td></td></tr><tr><td>Costar Ultra-Low Attachment Surface 24 well flat bottom plate&nbsp;</td><td>Corning Inc. (米国ニューヨーク州コーニング)</td><td>3473</td><td></td></tr><tr><td>Costar 96 Black Well Plate</td><td>Corning Inc. (米国ニューヨーク州コーニング)</td><td>3603</td><td>蓋付き平底透明。黒色ポリスチレンTC処理マイクロプレート</td></tr><tr><td>ツァイス LSM510 META NLO Axiovert 200M 倒立顕微鏡</td><td>カールツァイスAG(ドイツ、オーバーコッヘン)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>バイオマークHD&nbsp;</td><td>Fluidigm (米国カリフォルニア州サンフランシスコ)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aria Special Order Research Product Cell Sorter</td><td>Becton Dickson (Franklin Lakes, NJ, USA)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS/BSA</td><td></td><td></td><td>1x PBS 
0.1%(重量/vol)BSA 
ペンストレップ(49単位/ mlペニシリン、49 &mu;g/ml ストレプトマイシン)</td></tr><tr><td>PBS/BSA/Dnase1</td><td></td><td></td><td>1x PBS 
0.1%(重量/vol)BSA 
ペンストレップ(49単位/ mlペニシリン、49 &mu;g / mlストレプトマイシン) 
Dnase 1 (2,400 単位/ml/膵臓)</td></tr></tbody></table>

インビトロコロニーアッセイでトライ強力な前駆細胞を特徴付けるための大人のマウスの膵臓から分離されました

In Vitro Colony Assays for Characterizing Tri-potent Progenitor Cells Isolated from the Adult Murine Pancreas

幹細胞および成体膵臓の前駆細胞は、1型糖尿病を有する患者を治療するための治療ベータ様細胞の潜在的供給源であり得ます。幹細胞および前駆細胞は、成人の膵臓に存在するかどうかしかし、それはまだ不明です。成体マウスで系譜追跡CRE-LOXを用いた研究戦略は、サポートまたはどちらかがベータ細胞がダクト、成人の膵臓前駆細胞が存在することができると推定位置から生成することができるという考えに異議を唱えることは、結果が得られています。これらのインビボ CRE-LOXの系譜トレースの方法は、しかし、幹細胞を定義するために必要な自己再生および多系列分化-2の基準の質問に答えることはできません。この技術的なギャップに対処を開始するために、我々は、膵臓前駆細胞のための3次元コロニーアッセイを考案しました。すぐに私たちの最初の公開後、他の研究室は、独立してオルガノイドアッセイと呼ばれる類似しているが、同一ではない、方法を開発しました。オルガノイドアッセイと比較して、我々の方法が採用します低濃度で細胞外マトリックスタンパク質の包含を可能にする粘性溶液を形成メチルセルロース、。多くの成人臓器幹細胞の場合のようにメチルセルロースを含むアッセイは、容易に検出及び前駆細胞は、小さなサブ集団を構成する際に重要である、単一細胞レベルでの前駆細胞の分析を可能にします。一緒に、いくつかの研究室からの結果は、in vitro自己再生およびマウスからの膵臓前駆細胞様細胞の多系列分化に実証します。現在のプロトコルは、マウスの膵臓前駆細胞を特徴づけるために、2つのメチルセルロースベースのコロ​​ニーアッセイを説明します。 1は、マウスの細胞外マトリックスタンパク質の市販製剤およびラミニンヒドロゲルとして知られている他の人工細胞外マトリックスタンパク質が含まれています。ここに示されている技術は、sの2）単一細胞操作、CD133 +のSox9 / EGFPの膵臓およびソートの1）解離+成体マウスから乳管細胞でありますorted細胞は、3）単一コロニーを、自己再生または分化を評価するために、二次コロニーアッセイにマイクロ流体定量RT-PCRおよびホールマウント免疫染色、および単一細胞懸濁液と再メッキへの一次コロニーの4）解離を使用して分析します。

成人の膵臓前駆細胞は、蛍光活性化セルソーティング（ 図1）によって濃縮することができます。ここで使用されるのSox9 / EGFPトランスジェニックマウスラインが最初GENSAT脳アトラスプロジェクト19の結果として生成され、EGFPレポーターは、上流〜75キロバイトと〜150キロバイトのSox9 20の下流の配列を含む細菌人工染色体の制御下にありました。これらのマウスでは、EGFPは、効率的かつ特異的に22膵管にラベルを付けます。膵臓を調達し、単一細胞懸濁液中に解離し、ビオチンと結合した抗CD133抗体で染色し、STV-APCとコンジュゲート二次抗体で染色することにより行いました。得られた細胞は、適切なゲーティングパラメータ（ 図1）を用いてフローサイトメトリーにより分析しました。異なるゲーティングパラメータを使用して得られた細胞を選別し、ためのメチルセルロースを含有するコ​​ロニーアッセイにプレーティングすることができコロニー形成。以前...

自己再生および成体マウスの膵臓から単離された前駆細胞の分化を検出するためのインビトロコロニーアッセイに考案されています。これらのアッセイでは、膵臓前駆細胞は、メチルセルロースを含む半固形培地中で3次元空間での細胞コロニーを生じます。単一細胞、個々のコロニーの特徴を処理するためのプロトコルが記載されています。

Stem and progenitor cells from the adult pancreas could be a potential source of therapeutic beta-like cells for treating patients with type 1 diabetes. ...

これらのプロトコルの目的は、メチルセルロースを含む半固形培地を用いた培養アッセイにより、成体マウスから単離した膵前駆細胞から増殖した細胞コロニーを特性評価することです。本手法は、成体膵臓における前駆細胞の自己複製能および分化能はどのようなものであるか、という膵前駆細胞生物学分野における重要な疑問への回答に寄与します。これらの手法の主な利点は、個々の前駆細胞の研究が可能であることであり、これは細胞の真の生物学的ポテンシャルを見極める上で重要です。造血幹細胞の研究で用いられていたコロニー形成アッセイが、膵細胞集団にも適用できることに気づいたことで、これらの手法を考案しました。手順のデモンストレーションは、私の研究室の大学院生であるJacob Tremblay、ポストドクのJanine Quijano博士、および技術者のAngela Luo氏が行います。屠殺後できるだけ早く、はさみを用いて腹壁の中線に垂直に切開を加え、腹腔を開きます。ピンセットを用いて脾臓をそっと持ち上げ、ハサミで脾臓と膵臓の脾葉の間の結合組織を切断します。同様に、十二指腸葉と胃葉の結合組織を切断し、0.1%BSAと抗生物質を添加したDPBSを含むペトリ皿に入れ、氷上に置きます。次に、解剖顕微鏡下で、先端の細いピンセットを使用して脂肪組織を除去します。次に、膵臓を組織培養フードに移し、10 mLの冷PBSおよびBSAを含む3枚の100 mmシャーレで順次洗浄します。最後の洗浄後、膵臓を滅菌済みの乾燥シャーレに移してPBSおよびBSAを可能な限り除去し、組織を氷上の別の乾燥シャーレに移します。続いて、スプリングシザーを用いて膵臓を2〜3分間細かく刻み、組織片を2〜3 mLの調製直後の冷PBS BSA DNase I溶液に懸濁させます。10 mLピペットを用いて、組織片を50 mLコニカルチューブに移し、全量が10 mLになるまでPBS BSA DNase Iを加えます。次に、組織に350～450 µLのコラゲナーゼBを加えます。チューブを37 °Cのウォーターバスに8分間置き、3～4分ごとに撹拌します。インキュベーション終了後、16.5ゲージの針を装着した10 mLシリンジを用いて、組織溶液を吸い上げ、室温にて50 mLチューブの壁面に沿って7回噴霧します。その後、組織を再びウォーターバスに戻し、時々撹拌しながらさらに8分間インキュベートし、前述の手順と同様にシリンジで7回繰り返し分注します。最後の機械的破砕の後、細胞懸濁液の10 µL分注液を乾燥したペトリ皿に移し、10倍対物レンズを備えた倒立位相差顕微鏡下で、単一細胞および小規模な細胞クラスターの存在を確認します。次に、チューブを氷上に置き、PBS BSA DNase Iを用いて全量を50 millilitersに合わせます。細胞を遠心分離し、P1000ピペットを使用してペレットを5 millilitersの冷PBS BSA DNase Iに再懸濁します。その後、細胞を70 micronのナイロンメッシュフィルターに通し、続いて40 micronのナイロンメッシュフィルターを通して、新しい50 milliliterポリプロピレン製コニカルチューブに回収します。PBS BSA DNase Iを用いて液量を5 millilitersに調整し、細胞数をカウントします。その後、単一細胞懸濁液を氷上の冷PBS BSA DNase Iで最終濃度2 × 10⁷ cells/milliliterに希釈します。メチルセルロース含有半液体培地で育成した膵島コロニーのホールマウント免疫染色を行うには、まずブンゼンバーナーを用いて、先端が細いガラスパストールピペットを準備します。次に、1 mL ピペットチップの細い端を薄壁ゴムチューブの一端に、もう一端にマウスピースを取り付けます。そして、ガラスパストールピペットをピペットチップの太い端に取り付けます。次に、1%メチルセルロースを含むDMEM/F12培地を10〜50 µL、口ピペットで吸い上げます。コロニーが入ったディッシュを倒立位相差顕微鏡のステージに置き、10倍対物レンズを使用してピックアップに適したコロニーを探します。その後、ピペットの開口部を目的のコロニーの隣に配置し、口でゆっくりと吸引して単一のコロニーをピックアップします。効果的に回収するためには、ガラスピペットの開口部を細胞塊の隣に配置する前に、目的のコロニーに焦点を合わせることが重要です。コロニーを回収したら、ピペットチップを4%パラホルムアルデヒドを含む96ウェルプレートの1つのウェルに入れ、コロニーをウェル内に静置します。すべてのコロニーを回収した後、緩やかに振盪させながら4°Cで一晩固定します。翌朝、コロニーをPBSで室温にて10～30分間、2回洗浄します。ここからは、チップを曲げたプラスチック製のP10ピペットを使用してコロニーを回収してください。2回目の洗浄後、固定したコロニーをパラフィンを満たした1.5 milliliterチューブに入れ、4 °Cで一晩保存します。その後、コロニーを、1ウェルあたり200 µLのブロッキングバッファーを含む底面透明の96ウェルブラックプレートの各ウェルに転移させます。プレートを4 °Cで緩やかに振盪しながら一晩インキュベートします。翌朝、コロニーを目的の一次抗体200 µLを含む新しいウェルに転移し、再び4 °Cで緩やかに振盪しながら一晩培養します。翌朝、コロニーを0.1%Tween 20を含むPBS 200 µLが入った3つの連続したウェルに順次移し、室温で10分間ずつ洗浄します。3回目の洗浄後、コロニーを適切な二次抗体 200 µLが入った清潔なウェルに移し、プレートを室温の暗所で2時間インキュベートします。インキュベーション終了後、先ほどの手順と同様にPBS Tweenでコロニーを3回洗浄し、コロニーをDAPIが入った新しいウェルに移して室温で5分間静置します。次に、免疫染色したコロニーを35 mmのガラスボトムペトリ皿に集め、カバーガラスで覆います。最後に、共焦点顕微鏡でコロニーを撮影します。コロニー形成能はCD133 Sox9/EGFP陽性の管細胞のみに認められるため、適切なゲーティングパラメータを用いて蛍光活性化細胞分取（FACS）を行うことで、成体膵前駆細胞を濃縮することができます。その後、膵臓コロニーを倒立位相差顕微鏡で観察し、その形態に基づいて分類することができます。ハンドピッキング後、これらのコロニーはマイクロ流体qRT-PCR解析を用いて遺伝子発現を、またはホールマウント免疫染色を用いてタンパク質発現を解析することが可能です。実際に、多くの個々のコロニーが導管細胞、内分泌細胞、および腺細胞の系譜マーカーを発現しており、これはこれらのコロニーを形成させる膵臓コロニー形成前駆細胞の大部分が、三分化能を有していることを示しています。熟練すれば、適切に実施することで、解剖、細胞分散、細胞染色およびソート、そしてメチルセルロース含有半凝固培地への細胞播種の手順を6〜7時間で完了させることができます。コロニー形成後、定量RT-PCR、ウェスタンブロット、またはインスリン分泌アッセイなどのその他の手法を用いて、コロニーの遺伝子発現や機能的能力に関するさらなる疑問を検証することが可能です。このビデオを視聴することで、成マウスの膵臓を分散する方法と、メチルセルロース含有半凝固培養で生成された膵前駆細胞コロニーを特性解析する方法について、十分に理解できるはずです。

in-vitro-colony-assays-for-characterizing-tri-potent-progenitor-cells

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

発生生物学

膵臓のような前駆細胞がインスリンを発現するコロニーへの分化を可能にする三次元のクローン原性アッセイが記載されている。単一の前駆細胞が増殖と分化するこの方法は、メチルセルロース、マトリゲルと成長因子を含有する半固体培地を利用しています...

インスリン発現コロニーを形成する前駆細胞の定量アッセイ

現在の研究では、ヒト胚性幹細胞の膵臓の分化誘導の指示分化のアプローチについて説明します。大きな意義のインスリン発現する細胞に膵臓の前駆細胞由来のヒト胚性幹細胞の発見、その内皮細胞の共培養を仲介する成熟である。...

監督分化アプローチで細胞を産生する膵臓インスリンにヒト胚性幹細胞の内皮細胞の共培養を仲介する成熟

単離するためのプロトコルは、ヒト胎児膵臓細胞由来培養し、画像膵島細胞クラスター（ICCは）が記載されている。方法は、組織、文化単層として、または凝集体懸濁液中、および増殖のマーカーと膵臓細胞運命決定のための画像からのICCを生成するために必要な手順を詳しく説明します。...

ヒト胎児膵臓細胞クラスターの単離、培養、およびイメージング

このプロトコルで説明した3次元培養法は、分枝状の臓器へのそれらの大幅な拡大、分化および形態形成などの分散したマウス胎児の膵臓前駆細胞から膵臓の発達を再現。この方法は、画像化、ニッチの機能的干渉や操作に適している。...

分散マウス胚性前駆細胞からin vitro膵臓器官形成

ここでは、in vitroで NKX6-1 +膵臓前駆細胞にヒト胚性幹細胞を区別するために4段階のプロトコルを記述します。このプロトコルは、ヒト多能性幹細胞株の多様に適用することができます。...

NKX6-1への多能性幹細胞の効率的分化<sup&gt; +</sup&gt;膵臓前駆細胞

分離したフローティング e10.5 膵前駆細胞と関連付けられて間充織から 3 D マウス pancreatoids...

マウス膵臓前駆細胞の in Vitroからスキャフォールド フリー、三次元のインスリンを表現する Pancreatoids の生成

このプロトコルは、ヒト歯髄幹細胞(hDpSC)を...

インビトロ 膵臓系統に向けたヒト歯髄幹細胞の誘導

本プロトコルは、平面単層におけるヒト多能性幹細胞(hPSC)に由来する膵臓前駆細胞におけるPDX1およびNKX6.1転写因子の共発現を増加させるための増強された方法を記載する。これは、新鮮なマトリックスを補充し、細胞密度を操作し、内胚葉細胞を解離することによって達成される。...

2D培養系におけるヒト多能性幹細胞の膵臓ベータ細胞前駆体への分化

幹細胞の膵島細胞への分化は、従来の糖尿病治療や疾患モデリングに代わるソリューションを提供します。市販の分化キットと以前に検証された方法を組み合わせて、インスリン分泌性幹細胞由来の膵島を皿で産生するのに役立つ詳細な幹細胞培養プロトコルについて説明します。...

ヒト多能性幹細胞のインスリン産生膵島クラスターへの分化

この記事はセルのようなβ細胞の指示された微分そして機能分析のためのプロトコルを示す。インスリン産生膵細胞を作製する前のヒト多能性幹細胞の最適な培養条件と継代について記述します。6段階の分化は、決定的な内胚葉の形成から、グルコースに反応してインスリンを分泌する機能的なβ細胞様細胞へと進行します。...

ヒト多能性幹細胞から機能的な膵臓インシュリン分泌細胞を生成するための最適化されたプロトコル

私たちは、免疫不全マウスへのヒト幹細胞由来膵幹細胞膵島の筋肉内移植のための低侵襲プロトコルを提供し、 生体内...

マウスにおけるヒト多能性幹細胞由来膵臓内分泌細胞の筋肉内移植

学ぶ インビトロコロニーアッセイ法でマウス膵臓由来前駆細胞の自己更新と分化能を評価する方法。メチルセルロース半固形培地を用いて個々の細胞の生物学的ポテンシャルを解析し、膵臓細胞生物学の理解を深めます。

インビトロコロニーアッセイでトライ強力な前駆細胞を特徴付けるための大人のマウスの膵臓から分離されました

さらに動画を探す