ゼブラフィッシュ行動症候群のための大胆、攻撃的、および浅水アッセイ

このプロトコルの全体的な目標は、ゼブラフィッシュの大胆さ、攻撃性、浅瀬行動症候群を観察、分析、解釈するために使用される方法論を標準化することです。直接的には、この方法は進化論、集団構造、および人口動態の質問に答えることができます。学際的な技術と組み合わせることで、薬理学、毒物学、行動遺伝学、内分泌学などの分野に適用することができます。

この手法の主な利点は、大胆さ、攻撃性、浅瀬の組み合わせが、ゼブラフィッシュのよく研究され、簡単に定量化できる多くの行動を網羅していることです。また、各アッセイは、代替の実験上の質問に答えるように変更することができます。まず、ゼブラフィッシュを焦点となる魚と刺激のある魚の適切な比率にランダムに分けます。

すべての魚は、厳密な12〜12時間の明暗サイクルの下でゼブラフィッシュハウジングラックに保管してください。毎日、すべての焦点と刺激の魚にフレークフードを与えます。そして、ブラインシュリンプに餌を与えるのは週に一度、研究以外の日だけです。

次に、実験室に3つのアッセイタンクを設置します。1つは、攻撃性、大胆さ、そして有害な外部刺激の可能性を最小限に抑える場所での浅瀬のためのものです。また、ビデオカメラでタンク全体を撮影するための十分なスペースを確保してください。

ビデオカメラをセットアップして、水槽のラベルを見るのに十分な明瞭さを確保し、焦点となる魚の微妙な行動を区別するようにします。すべてのビヘイビアアッセイレコーディング中は、カメラを同じ位置に維持し、タンクの全景を眺めながら、ディファレンシャルレコーディングの結果としてのビヘイビアスコアリングの意図しない違いを最小限に抑えてください。次に、すべての行動アッセイの日付、魚の数、およびアッセイ番号を追跡するためのラベリングスキームを定義します。

タンクの外側にテープでラベルを付けます view カメラ。この情報をラボノートに記録して、すぐに参照し、将来の品質管理に役立てることができます。最後に、すべてのアッセイの間、および個人がハウジングラックから取り出された直後に使用される順化タンクを設定します。

まず、30 x 15 x 10センチメートルの19リットルの長方形のタンクを入手します。アグレッションタンクの3つの側面を囲む外部の不透明なパーティションをタンクに装備し、望ましくない外部刺激を減らすために前面を露出させて表示します。外部マーキングのあるタンクを4つの等しい長方形の象限に分割します。

シリコンコーキングを使用して、22.5度に傾斜した左下象限内にミラーを固定し、タンクの左端に対して直角三角形を形成します。27.5〜28.5°Cに予め温められた新鮮な老化水を用意し、順応タンクとアグレッションタンク内の水の温度がハウジングラックの摂氏2度以内にあることを確認するために、アグレッションタンクに追加する準備ができています。ハウジングラックからフォーカルフィッシュをカップに入れ、別の順応タンクに移し、10分間順応させます。

ビデオカメラがアグレッションアッセイタンクに焦点を合わせていることを確認し、記録を押します。次に、すぐにカッピングで焦点となる魚を順応タンクからアグレッションタンクに移します。アグレッションタンクを10分30秒間記録します。

次に、アグレッションタンクからフォーカルフィッシュをカップに入れて、順応タンクに戻します。アッセイ完了後に記録を見るときは、魚が水槽に導入されてから30秒待ってから、追加の順応期間として行動をスコアリングします。最後に、1 つのアグレッションアッセイを少なくとも 2 回スコアリングし、反復間でアッセイの一致度が高くなるまでスコアを付けます。

大胆さアッセイを設定するには、まず、高さ15センチ、上部26.5センチ、下部22.5センチ、幅6センチの小さな1.5リットル台形タンクを入手します。タンクの3つの側面に不透明な紙を巻き付け、前面を露出させて見ます。タンクの上部と下部を区切るために、タンクの外側に薄いテープを1枚置きます。

次に、太字タンク内の水の温度がハウジングラックから摂氏2度以内であることを確認します。焦点となる魚をハウジングラックから順応タンクに移し、10分間順応させます。ビデオカメラが大胆さアッセイに焦点を合わせていることを確認し、デバイスの録画を押します。

すぐにフォーカルフィッシュを順応タンクから大胆さタンクに移し、8分30秒間記録します。アッセイが完了した後に記録を見るときは、魚が水槽に導入されてからスコアリングする前に、さらに30秒の順応期間を設けてください。最後に、1つの大胆さアッセイを少なくとも2回スコアリングし、反復間で高い一致度でアッセイがスコアリングされるまでします。

浅瀬アッセイを設定するには、シリコンコーキングで密封された2つのガラス仕切りで分割された3つのコンパートメントを持つ76リットルのタンクを入手します。外部的には、テープを使用して、各刺激ゾーンを指定する各ガラス仕切りから6ポイント35センチメートルの2つの優先ゾーンをマークします。浅瀬タンクの3つの側面の周りに外部の不透明なパーティションを適用し、前面を露出させて表示します。

次に、試験前に少なくとも12時間順応する刺激群を選択し、実験の過程で浅瀬タンクに留まらせます。焦点となる魚をハウジングラックから別の順応タンクに移し、カッピングで10分間順応させます。次に、カッピングにより、焦点となる魚を順化タンクから浅瀬タンクの中央コンパートメントに移します。

10分間のライブスコアリング観察期間の前に、10分間の順応期間を設け、群れをなす魚がターゲットショールを収容するチャンバー内の優先ゾーン内にあると定義します。次に、各プリファレンスゾーンで費やした時間と、中央ボリュームで費やした時間を定量化します。最後に、アッセイが完了したら、魚を別のターミナルタンクに移し、使用したすべての焦点個体の最終目的地タンクとして機能します。

このプロトコルでは、ゼブラフィッシュの攻撃性、大胆さ、浅瀬での行動における一貫した関連性を調べて、行動症候群が存在するかどうかを判断しました。ここで、コンポーネント 1 は攻撃的な行動を表し、コンポーネント 2 は大胆な行動に関連付けられています。アグレッシブな行動と大胆な行動は同じ要素で表されないため、ゼブラフィッシュには大胆なアグレッシブ行動症候群がないと結論付けることができます。

一度習得すれば、1匹のフォーカルフィッシュの全プロトコルを70分で完了することができます。この手順を試行する際には、オブザーバーのバイアスを最小限に抑えるために、自分自身とチームが各ターゲットの動作に慣れ親しむことを忘れないでください。同じビデオ録画を複数回採点することで、結果に対する信頼性も高まります。

この手順に続いて、行動症候群に影響を与える内部および外部要因についての追加の質問に答えるために、薬理学的、遺伝的または生理学的分野の他の方法を実行することができます。このビデオを見た後、ゼブラフィッシュの大胆さ、攻撃性、浅瀬行動症候群を観察、分析、解釈する方法をよく理解できるはずです。ご覧いただきありがとうございます、そしてあなたの実験に頑張ってください!