Name: 筋フィラメントのCaの評価 2+感度基礎心臓興奮収縮連関 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 29 s
Description: 学ぶ筋フィラメントCa²⁺感度評価法。ラット心筋細胞を用いてFura-2 AM蛍光測定とサルコメア短縮解析により、心不全や高血圧における心臓興奮収縮連関の異常を評価します。

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この研究は教育科学技術省（2013068067）から資金提供を受け、韓国の国立研究財団（NRF）を介して基礎科学研究開発プログラムによってサポートされていました。脳韓国21大学院教育の韓国省の計画、科学技術、ソウル国立大学病院、高血圧の韓国学会（2013）、SKテレコム研究基金（なし。3420130290）と中国の国家自然科学基金からのことで（NSFC 31460265; NSFC 81260035）。

プロトコルは健康の国連国立研究所によって公開実験動物の管理と使用に関する指針に従っている（NIH公開番号85-23、1996年改訂）。これは、ソウル大学（IACUC承認番号：SNU-101213から1）の施設内動物管理使用委員会（IACUC）によって承認されました。 1.バッファーの調製（表材料および装置） <ol><li> NaCl、135;のKCl、5.4;のMgCl 2、3.5;グルコース、5; HEPES、5;のNa 2 HPO 4、0.4;タウリン、20; pH値：MMにおける実験（当日に新鮮な分離溶液300mlを準備7.4 NaOHで）。 </li><li> CaCl 2 0.2; MgSO 4を5;のKCl 5.4、NaClを120ナトリウム-ピルビン酸5; 5.5グルコース、タウリン20; HEPES 10;マンニトール29; pHは7.4：MMにおける実験（当日に新鮮なストレージソリューションの100ミリリットルを準備）NaOHで。 </li><li> ;のKCl、4;のNaH 2 PO 4、0.33;上記MgCのNaCl、141.4：mMの中の灌流液の1Lを（準備L 2は、1。 HEPES、10;グルコース、5.5; CaCl 2、1.8;マンニトール、14.5; NaOHでpHを7.4）。 </li><li>分離を25 mlのコラゲナーゼ（1 mg / mlで）、プロテアーゼ（0.1 mg / mlで）、ウシ血清アルブミン（BSA、1.67mg / mlで）、およびCa 2+（0.05ミリモル）を添加することによって、コラゲナーゼ溶液1を30mlの調製溶液。 </li><li>分離溶液16.7 mlに、BSA（1.67 mg / mlで）、およびCa 2+（0.05ミリモル）を、コラゲナーゼ（1mg / ml）を添加することによって、コラゲナーゼ溶液2を20ミリリットルを準備します。 </li><li>分離溶液40mlにBSAを0.4gを添加することにより、BSA溶液40mlを調製します。 2ビーカーに10ミリリットルと30ミリリットルを区切ります。 BSA溶液中の最終Ca 2+濃度を1mMになるようにBSA溶液を30mlまでのCa 2+を加えます。 </li></ol>左心室（LV）筋細胞の単離2.準備<ol><li>調製および単離の部屋に動物施設からクリーンな輸送ケージに8-12週齢、雄のSprague-Dawley（SD）ラットを転送します。 </li><li> H37℃。に2水浴を食べます 注：水のいずれかを使用水浴 - ジャケット付きリザーバとランゲンドルフ灌流システムの灌流チューブを。単一の筋細胞を分離するために、心筋組織のトランクを攪拌する他の水浴を使用してください。 </li><li>それぞれ、30ミリリットルと20ミリリットルにボリュームを補うために5ミリリットル及びコラゲナーゼ溶液1と16.7ミリリットルコラゲナーゼ溶液2の25ミリリットルに（のCa 2+なし）BSA溶液の3.3ミリリットルを追加します。 </li><li>それぞれ、ランゲンドルフ灌流システムにおける分離溶液（100ml）およびコラゲナーゼ溶液1（30mL）でカラム1（コロ1）および列2（コロ2）を追加する（ 図1A）。 </li><li>ランゲンドルフ灌流システム（ 図1A）中の酸素接続管を介して、大佐1とCol.2で分離ソリューションおよびコラゲナーゼ溶液1に酸素。同様に、含酸素コラゲナーゼ溶液2とを経由して 100％のO 2との振盪水浴中のBSA溶液酸素接続チューブ。 </li></ol> LV筋細胞の3分離<ol><li>ペントバルビタールナトリウム（30mg / kg）の腹腔内注射を介して、SDラットを麻酔し、ピンチつま先と撤退反射の欠如によって麻酔状態を確認。 </li><li>解剖トレイにラットを移動します。仰臥位では、テープで本体の側面に4脚を固定します。 </li><li>心を傷つけないように確実に、胸を開くために手術用ハサミで胸部半ば軸切開を適用します。接続血管（ 例えば、スーペリア、下大静脈、肺血管、および大動脈）と心膜膜13から心臓を解剖するためにきれいなハサミの別のペアを使用してください。 </li><li>細かい鉗子で大動脈をクランプ、 - （8ミリメートル5）、および急速に1分（ 図1A）内ランゲンドルフ灌流システムのカニューレを取り付けるのに十分な長さの大動脈の一部を残します。大動脈の上にしっかりと縫合糸4/0を接続します。 </li><li&gt;は大佐1のバルブの電源をオンにし、10分間予熱したと酸素分離液（灌流速度：12〜14ミリリットル/分）で分離された心臓を灌流。 、大佐1のバルブをオフにし大佐2のバルブをオンにして、8のためのコラゲナーゼ溶液1で心臓を潅流 - 10分。 </li><li>大動脈を切断することにより、消化心のマウントを解除し、新鮮な分離溶液（ 図1Bi）を含むフラスコに鉗子で大動脈を保持することによって、それを転送します。小さ ​​な断片（〜22ミリメートル、 図1Bii）に（中隔を含む）、LV自由壁の大部分をカットする細かいハサミやピンセットを使用してください。 </li><li>予熱したと酸素新鮮なコラゲナーゼ溶液2（ 図1Biii）を含むフラスコにピースを転送します。 10分間振ります。筋細胞を含むコラゲナーゼ溶液2に酸素を提供してください。 </li><li>吸引電球でドロッパーを用いて10 mlの遠心チューブにサスペンションおよびCa 2+を追加- -筋細胞を移動（BSA溶液を含みます1：ボリューム内の1）。 2分間の30グラムで遠心分離し、上清を捨てます。 BSA溶液5ml中の筋細胞ペレットを再懸濁します。上清を遠心分離し、廃棄します。 </li><li>筋細胞ペレットを分散し、RT（ 図1Biv-VI）で予備酸素ストレージソリューションの10ミリリットルで筋細胞を維持します。 </li><li>フラスコ内の残りのLV組織と - （3.9 3.7ステップ）の手順を繰り返します。 LV組織のほとんどは筋細胞の良好な収率を得るために消えるまで再び - （3.9 3.7ステップ）の手順を繰り返してください：注意してください。 </li><li>実験の終了まで室温で6-8時間のためのストレージソリューションに筋細胞を保管してください。 </li></ol>細胞内Ca 2+過渡状態と筋細胞の収縮の4同時測定<ol><li>アセトキシメチルエステルのFura-2 AM（2μM）でロードLV筋細胞。 注：ダークチューブ（ 図1Bvii）にロードされた筋細胞を持つすべてのロード手順と実験を行います。 <ol><li> CENTR10秒間2000×gで筋細胞懸濁液（1ml）にifuge。上清を捨て、低Ca 2+濃度（250μM、表材料および装置）とのタイロード溶液の1ミリリットル中の筋細胞ペレットを再懸濁。 </li><li>軽く筋細胞懸濁液を分散させる、のFura-2AMとポロキサマー407（2μl）を追加し、室温で混合物を維持- 15分間（20〜24 Oの C）（ 図1Bvii）。 </li><li>遠心分離は、混合物を5秒間、上清を廃棄し、500μMのCa 2+を含む灌流液の1ミリリットルで筋細胞ペレットを分散させます。 10分後、5秒間混合物を遠心分離し、上清を捨てます。 </li><li>新鮮な灌流液（500μMのCa 2+、1ミリリットル）を追加し、フラ- 2AM保つ-レコーディングのために、この溶液中にロードされた筋細胞ペレットを。 </li></ol></li><li> LV筋細胞の収縮と細胞内Caの測定2+ <ol><li>記録する前に、通る灌流チューブを埋めます36 O℃に予熱したあるタイロード溶液、水ジャケット</li><li> 8分 - 5のための倒立蛍光顕微鏡のチャンバーにロードされたLV筋細胞サスペンション - フラ2 AMの数滴を置きます。ゆっくりタイロード溶液（2.2ミリリットル/分）を灌流。 </li><li>フィールド刺激（2 Hz）を開始するデジタル刺激装置の前面パネルにある「スタート」ボタンを押してください。 注：出力電圧（10 V、5ミリ秒の持続時間）は、チャンバの両側に位置する白金線を介してチャンバ内の筋細胞に適用されます。 <ol><li>その記録のための契約を安定（ハイパーまたはハイポ収縮が表示されていないもの）筋細胞を選択します。 </li></ol></li><li>ビデオベースの筋節検出システムの水平位置に選択肢の筋細胞を調整し、サルコメアの最適な画像を得るために顕微鏡の焦点を調整します。明確な筋節が明らかに平均するまで観察されている領域に紫の長方形のボックスを配置しますサルコメア長（赤ピーク）の特異鋭いピーク（ 図2A、下の画像）が表示されます。 </li><li>フィールド刺激（ 図2AおよびB）に応答して、筋節長の変化を記録します。 注：1にロード筋細胞を使用してください - 2時間。 </li><li>ビデオベースの筋節検出システムのフィールドが筋細胞（ 図2A）の大きさになるようにカメラの絞りを調整します。 510 nmの（買収周波数千ヘルツ）で360ナノメートル/ 380 nmでの励起および発光で筋細胞を刺激します。録音サルコメア短縮とフィールド刺激（ 図2B）とFURA2 AM比。 </li></ol></li></ol>筋フィラメントのCa 2+感受性の5評価<ol><li>サルコメアの長さと定常状態での Ca 2+過渡電流の平均（10から20までのトレース）と（両方の測定値と同じ筋細胞の筋節長対のFura-2比の位相面のループをプロットsおよびデルタ変化; 図2C）。 </li><li>各プロットでは、50％の弛緩（EC 50、 図2C）でフラ-2比を定義します。各介入のループおよびEC 50の両方を比較してください。 </li></ol>

<ol><li>Bers, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+excitation-contraction+coupling%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cardiac excitation-contraction coupling.</a> Nature. 415 (6868), 198-205 (2002).</li>
<li>Eisner, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrative+analysis+of+calcium+cycling+in+cardiac+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Integrative analysis of calcium cycling in cardiac muscle.</a> Circ Res. 87 (12), 1087-1094 (2000).</li>
<li>Palmiter, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+regulating+the+myofilament+response+to+Ca2%2B%3A+implications+of+mutations+causal+for+familial+hypertrophic+cardiomyopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+Res+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms regulating the myofilament response to Ca2+: implications of mutations causal for familial hypertrophic cardiomyopathy.</a> Basic Res Cardiol. 92 (S1), 63-74 (1997).</li>
<li>Missiaen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abnormal+intracellular+Ca2%2B+homeostasis+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Calcium%22%5BJournal%5D)">Abnormal intracellular Ca2+ homeostasis and disease.</a> Cell Calcium. 28 (1), 1-21 (2000).</li>
<li>Trafford, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel%2C+rapid+and+reversible+method+to+measure+Ca+buffering+and+time-course+of+total+sarcoplasmic+reticulum+Ca+content+in+cardiac+ventricular+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Arch%22%5BJournal%5D)">A novel, rapid and reversible method to measure Ca buffering and time-course of total sarcoplasmic reticulum Ca content in cardiac ventricular myocytes.</a> Pflugers Arch. 437 (3), 501-503 (1999).</li>
<li>Berlin, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrinsic+cytosolic+calcium+buffering+properties+of+single+rat+cardiac+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Intrinsic cytosolic calcium buffering properties of single rat cardiac myocytes.</a> Biophys J. 67 (4), 1775-1787 (1994).</li>
<li>Robertson, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+time-course+of+Ca2%2B+exchange+with+calmodulin%2C+troponin%2C+parvalbumin%2C+and+myosin+in+response+to+transient+increases+in+Ca2%2B%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">The time-course of Ca2+ exchange with calmodulin, troponin, parvalbumin, and myosin in response to transient increases in Ca2+.</a> Biophys J. 34 (3), 559-569 (1981).</li>
<li>Schober, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myofilament+Ca2%2B+sensitization+increases+cytosolic+Ca2%2B+binding+affinity%2C+alters+intracellular+Ca2%2B+homeostasis%2C+and+causes+pause-dependent+Ca2%2B-triggered+arrhythmia%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Myofilament Ca2+ sensitization increases cytosolic Ca2+ binding affinity, alters intracellular Ca2+ homeostasis, and causes pause-dependent Ca2+-triggered arrhythmia.</a> Circ Res. 112 (2), 170-179 (2012).</li>
<li>Briston, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Balanced+changes+in+Ca+buffering+by+SERCA+and+troponin+contribute+to+Ca+handling+during+%CE%B2-adrenergic+stimulation+in+cardiac+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Balanced changes in Ca buffering by SERCA and troponin contribute to Ca handling during β-adrenergic stimulation in cardiac myocytes.</a> Cardiovasc Res. 104 (2), 347-354 (2014).</li>
<li>Patel, B. G., Wilder, T., John Solaro, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+control+of+cardiac+myofilament+response+to+calcium+by+S-glutathionylation+at+specific+sites+of+myosin+binding+protein+C%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">Novel control of cardiac myofilament response to calcium by S-glutathionylation at specific sites of myosin binding protein C.</a> Front Physiol. 4, 336(2013).</li>
<li>Jin, C. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myofilament+Ca2%2B+desensitization+mediates+positive+lusitropic+effect+of+neuronal+nitric+oxide+synthase+in+left+ventricular+myocytes+from+murine+hypertensive+heart%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Myofilament Ca2+ desensitization mediates positive lusitropic effect of neuronal nitric oxide synthase in left ventricular myocytes from murine hypertensive heart.</a> J Mol Cell Cardiol. 60, 107-115 (2013).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+L-type+Ca2%2B+channel+activity+by+neuronal+nitric+oxide+synthase+and+myofilament+Ca2%2B+sensitivity+in+cardiac+myocytes+from+hypertensive+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Calcium%22%5BJournal%5D)">Modulation of L-type Ca2+ channel activity by neuronal nitric oxide synthase and myofilament Ca2+ sensitivity in cardiac myocytes from hypertensive rat.</a> Cell Calcium. 58 (3), 264-274 (2015).</li>
<li>Louch, W. E., Sheehan, K. A., Wolska, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+in+cardiomyocyte+isolation%2C+culture%2C+and+gene+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Methods in cardiomyocyte isolation, culture, and gene transfer.</a> J Mol Cell Cardiol. 51 (3), 288-298 (2011).</li>
<li>Spurgeon, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytosolic+calcium+and+myofilaments+in+single+rat+cardiac+myocytes+achieve+a+dynamic+equilibrium+during+twitch+relaxation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cytosolic calcium and myofilaments in single rat cardiac myocytes achieve a dynamic equilibrium during twitch relaxation.</a> J Physiol. 447, 83-102 (1992).</li>
<li>Preston, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+effects+of+the+DCM+mutant+Gly159Asp+troponin+C+in+skinned+muscle+fibres%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Arch%22%5BJournal%5D)">Functional effects of the DCM mutant Gly159Asp troponin C in skinned muscle fibres.</a> Pflugers Arch. 453 (6), 771-776 (2007).</li>
<li>Willott, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+in+Troponin+that+cause+HCM%2C+DCM+AND+RCM%3A+what+can+we+learn+about+thin+filament+function%3F%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Mutations in Troponin that cause HCM, DCM AND RCM: what can we learn about thin filament function?</a> J Mol Cell Cardiol. 48 (5), 882-892 (2010).</li>
<li>Yasuda, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+to+study+contraction+characteristics+of+a+single+cardiac+myocyte+using+carbon+fibers%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">A novel method to study contraction characteristics of a single cardiac myocyte using carbon fibers.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 281 (3), H1442-H1446 (2001).</li>
<li>Sears, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+neuronal+nitric+oxide+synthase+isoform+regulates+myocardial+contraction+and+calcium+handling%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Cardiac neuronal nitric oxide synthase isoform regulates myocardial contraction and calcium handling.</a> Circ Res. 92 (5), e52-e59 (2003).</li>
<li>Ashley, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+nitric+oxide+synthase+1+regulates+basal+and+beta-adrenergic+contractility+in+murine+ventricular+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Cardiac nitric oxide synthase 1 regulates basal and beta-adrenergic contractility in murine ventricular myocytes.</a> Circulation. 105 (25), 3011-3016 (2002).</li>
<li>Zhang, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+phospholamban+phosphorylation+is+associated+with+impaired+relaxation+in+left+ventricular+myocytes+from+neuronal+NO+synthase-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Reduced phospholamban phosphorylation is associated with impaired relaxation in left ventricular myocytes from neuronal NO synthase-deficient mice.</a> Circ Res. 102 (2), 242-249 (2008).</li>
<li>Roe, M. W., Lemasters, J. J., Herman, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+Fura-2+for+measurements+of+cytosolic+free+calcium%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Calcium%22%5BJournal%5D)">Assessment of Fura-2 for measurements of cytosolic free calcium.</a> Cell Calcium. 11 (2-3), 63-73 (1990).</li>
<li>Grynkiewicz, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+generation+of+Ca2%2B+indicators+with+greatly+improved+fluorescence+properties%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">A new generation of Ca2+ indicators with greatly improved fluorescence properties.</a> J Biol Chem. 260 (6), 3440-3450 (1985).</li>
</ol>

著者らは、競合する金銭的利益はないと宣言している。

ここでは、単一の孤立心筋細胞における筋フィラメントのCa 2+感受性の変化を評価し、電気生理学的特性、細胞内Ca 2+過渡電流、および筋フィラメント動態と一緒に、このパラメータを測定することの重要性を強調するためのプロトコルを記述します。パラメータの一つまたは二つの記録は、心臓の収縮と弛緩のメカニズムを解明しない場合があるからです。個別に1筋細胞の収縮と細胞内Ca 2+のプロファイルを測定する従来の方法とは異なり、本方法は、同じ心筋細胞に同時に両方のパラメータを調べます。 多数の方法は、一般的に、筋肉や筋細胞15,16,17、 例えば、肌の筋細胞における外因性のCaとの間の相互作用の検討2+およびサルコメア/セル長/緊張の筋フィラメントのCa 2+感受性を評価するために使用されています（膜を透過するようなサポニンまたはβ-ESINなどの界面活性剤で処理されました）。長さ）は、フォ...

心臓の興奮収縮（EC）カップリングは、心筋の機械的特性を分析するための基本的なスキーム、 すなわち、心臓1,2の収縮機能です。 ECカップリングは、筋細胞膜のイオンチャネル（ 例えば、パッチクランプ技術によって測定することができる電位依存性Na +チャネル）の活性に対する二次膜の脱分極によって開始されます。 LTCCs を経由して 、その後の電位依存性L型の活性化のCa 2+チャネル（LTCCs）およびCa 2+流入は、ナノモル（nMでから細胞質ゾルCa 2+濃度を増加させ、リアノジン受容体（RyRs）を介してのCa 2+放出の大部分をトリガ）（μM）レベルをマイクロモル。細胞質ゾルの Ca 2+におけるこのような増加は、細いフィラメント中のトロポニンC（TnCの）へのCa 2+結合を促進し、誘発フィラメント複合体の立体構造変化をアクチン-ミオシン相互作用を容易にし、myocardiを達成しますアルは3を収縮しました。逆に、細胞質ゾルCa 2+が SR中のCa 2+ -ATPaseを介して筋小胞体（SR）（SERCA2aの）に戻し再取り込まれる又はNa + / の Ca 2+交換器と原形質膜を介して筋細胞の外に押し出され、 Ca 2+ ATPアーゼ1,2。その結果、細胞質ゾルのCaの減少は2+アクチン-ミオシンと筋細胞弛緩1-3の解離の結果、元の状態に戻し細いフィラメントの立体構造変化を扇動します。ほとんどの哺乳動物の心臓細胞における1細胞質ゾルのCa 2+の除去の90％ -それは70を占めるので、この方式では、SERCA2aの活性は、一般に、心筋弛緩の速度を決定すると考えられます。このように、などLTCC、のRyRとのSERCA2a、による異常のCa 2+ハンドリングが疾患のある心臓1-4で損なわれた収縮と弛緩のための主要なメカニズムと考えられてきました。 、2+総細胞内Caの約1％のECカップリング勘定のメッセンジャーおよびCa 2+の大部分として機能する細胞内Ca 2+バッファ5,6にバインドされている無料のサイトゾルの Ca 2+。これは、様々なのCa 2+緩衝液は、 例えば、膜リン脂質、ATP、クレアチンリン酸、カルモジュリン、パルブアルブミン、筋原繊維のTnC、ミオシン、SERCA2aの、かつSRのカルセケストリン心筋細胞に豊富であるという事実にある。5,6,7。これらの中でも、SERCA2aのとTnCのは、支配的なのCa 2+バッファ5,6,7です。また、Caは2+、そのバッファへの結合は単収縮時の動的なプロセスであり、追加の原因を結合のCa 2+の変化（ 例えば、Ca 2+を 30〜50％が2+トランジェント7のTnCに結 ​​合し、カルシウムの間にそれから解離します）濃細胞内Ca 2+の変更で、細胞質ゾルに遊離Ca 2+の結果を「解放」entration。その結果、細胞内Ca 2+レベルの摂動は、収縮不全および不整脈8,9の前駆体である異常な筋フィラメントの動きを誘導します。 （生理学的および病理学の両方）は、多くの要因が筋フィラメントのCa 2+バッファリングと筋フィラメントのCa 2+感受性8-10に影響を与える筋フィラメントタンパク質の転写後修飾の源とすることができます。最近では、のCa 2+トランジェント、異常のCa 2+放出、および不整脈8のポーズ依存増強を誘発、筋フィラメントタンパク質における突然変異は、Ca 2+結合親和性および細胞内Ca 2+ハンドリングを向上させることが報告されました。この考え方に沿って、我々はまた、神経型一酸化窒素合成酵素のアップレギュレーションに対する二次性高血圧ラット心臓における筋フィラメントのCa 2+の脱感作が上昇、拡張期と収縮期のCa 2+レベルに関連付けられていることが示されています今度は、のCa 2+依存性不活性化12 LTCCの脆弱性を増加させる11、。したがって、筋フィラメントのCa 2+感受性は、細胞内Ca 2+ホメオスタシスと筋細胞収縮機能の「アクティブ」な調節因子です。これは、筋フィラメントおよびCa 2+の間の相互作用、筋細胞、ECカップリング及び心臓機能の徹底的な調査のためのタンパク質の取り扱いを分析することが必要となってきています。 ここでは、孤立した心筋細胞における筋フィラメントのCa 2+感受性の変化を評価するプロトコルを記述します。細胞内Ca 2+プロファイル、筋フィラメントのCa 2+感受性および収縮の包括的な分析は、新規メカニズムを根底にある心筋の力学を発掘します。

<table><tbody><tr><td>Sprague Dawley rat</td><td>Koatech</td><td></td><td>8-12 weeks</td></tr><tr><td>Pentobarbital Sodium</td><td>Hanlim Pharmaceutical (Korea)</td><td>AHN901</td><td>保険コード:645301220</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma</td><td>S9625</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma</td><td>P4504</td><td></td></tr><tr><td>NaH2PO4</td><td>Sigma</td><td>S8282</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>シグマ</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>グルコース</td><td>シグマ</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>CaCl<サブ>2</サブ></td><td>Biosesang</td><td>C2002</td><td></td></tr><tr><td>MgCl<サブ>2</サブ></td><td>Biosesang</td><td>M2001</td><td></td></tr><tr><td>マンニトール</td><td>シグマ</td><td>M4125</td><td></td></tr><tr><td>MgSO<サブ>4</サブ>シ</td><td>グマ</td><td>M5921</td><td></td></tr><tr><td>ナトリウムピルビン酸</td><td>シグマ</td><td>P2256</td><td></td></tr><tr><td>タウリン</td><td>メルク</td><td>8.08616.1000</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>71649</td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児アルブミン</td><td></td><td>Σ A7906</td><td></td></tr><tr><td>コラゲナーゼ 2型</td><td>Worthington</td><td>LS004177</td><td></td></tr><tr><td>Protease</td><td>Sigma</td><td>P6911</td><td></td></tr><tr><td>Fura-2 (AM)</td><td>Molecular Probes</td><td>F1221</td><td></td></tr><tr><td>Pluronic F127 20% solution in DMSO</td><td>Invitrogen</td><td>P3000MP</td><td></td></tr><tr><td>振とう水浴</td>Chang <td>Shin</td>科学<td>モデル:C-108</td><td></td></tr><tr><td>IonWizard Softwae Suite</td><td>IonOptix Ltd</td>実験<td>ビルダー</td><td>筋細胞のECカップリングデータの取得と分析</td></tr> 筋<tr><td>細胞 カルシウム&収縮性記録システム</td><td>IonOptix Ltd</td><td></td><td></td></tr><tr><td>循環水浴</td><td>BS-Tech</td><td>BW2-8</td><td></td></tr><tr><td>筋細胞蛍光顕微鏡</td><td>Nikon</td><td>DIATPHOTO 200</td><td></td></tr><tr><td>MyoCam-S Power</td><td>IonOptix</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fluorescence &ビデオ検出</td><td>IonOptix</td><td>MyoCam-S</td><td></td></tr><tr><td>CFA300</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PMT400</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>蛍光 &システムインターフェース</td><td>IonOptix</td><td>FSI700</td><td></td></tr><tr><td>励起光源</td><td>IonOptix</td><td>mSTEP</td><td></td></tr><tr><td>高輝度ARCランプ 電源</td><td>ケアン Reseach</td><td></td><td></td></tr><tr><td>フィルターホイールコントローラー</td><td>IonOptix</td><td>GB/MUS200</td><td></td></tr><tr><td>デジタル刺激装置</td><td>メディカルシステム コーション</td><td>S-98 マルチモード</td><td></td></tr><tr><td>Compositions of Experimental Solution</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>会社名</td><td>カタログ番号</td><td>コメント</td></tr><tr><td>単離液(pH:7.4、NaOH)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma</td><td>S9625</td><td>濃度(mmol)135</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma</td><td>P4504</td><td>濃度 (mmol) 5.4</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma</td><td>H3375</td><td>濃度 (mmol) 5</td></tr><tr><td>グルコース</td><td></td><td>ΣG8270</td><td>濃度 (mmol) 5</td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>Biosesang</td><td>M2001</td><td>濃度 (mmol) 3.5</td></tr><tr><td>タウリン</td><td>シグ</td><td>マ CB2742654</td><td>濃度 (mmol) 20</td></tr><tr><td>Na2HPO4&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>71649</td><td>濃度 (mmol) 0.4</td></tr><tr><td>保存液 (pH: 7.4, NaOH)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma</td><td>S9625</td><td>濃度 (mmol) 120</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma</td><td>P4504</td><td>濃度 (mmol) 5.4</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Σ</td><td>H3375</td><td>濃度 (mmol) 10</td></tr><tr><td>グルコース</td><td>Σ</td><td>G8270</td><td>濃度 (mmol) 5.5</td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Biosesang</td><td>C2002</td><td>濃度 (mmol) 0.2</td></tr><tr><td>マンニトール</td><td>Σ</td><td>M4125</td><td>濃度 (mmol) 29</td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>Σ</td><td>M5921</td><td>濃度 (mmol) 5</td></tr><tr><td>ピルビン酸ナトリウム Σ</td><td></td><td>P2256</td><td>濃度 (mmol) 5</td></tr><tr><td>タウリン</td><td>Σ</td><td>CB2742654</td><td>濃度 (mmol) 20</td></tr><tr><td>灌流液 (チロード溶液, pH: 7.4, NaOH)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma</td><td>S9625</td><td>濃度 (mmol) 141.4</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Σ</td><td>P4504</td><td>濃度 (mmol) 4</td></tr><tr><td>NaH2PO4</td><td>Sigma</td><td>S8282</td><td>濃度 (mmol) 0.33</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma</td><td>H3375</td><td>濃度 (mmol) 10</td></tr><tr><td>グルコース</td><td>Sigma</td><td>G8270</td><td>濃度 (mmol) 5.5</td></tr><tr><td>CaCl2</sub</td><td>>Biosesang</td><td>C2002</td><td>濃度 (mmol) 1.8&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;Fura 2AMローディングの場合、CaCl2濃度は0.25 mMおよび0.5 mM</td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>Biosesang</td><td>M2001</td><td>濃度(mmol)1</td></tr><tr><td>マンニトール</td><td>Sigma</td><td>M4125</td><td>濃度(mmol)14.5</td></tr><tr><td>Collangenase溶液1</td><td></td><td></td><td></td></tr>分離<tr><td>溶液(30mL)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児アルブミン(BSA溶液5 ml)</td><td></td><td></td><td>濃度 (mmol) 1.67 mg/mL</td></tr><tr><td>コラゲナーゼ 2 型</td><td>Worthington</td><td>LS004177</td><td>濃度 (mmol) 1 mg/mL</td></tr><tr><td>プロテアーゼ</td><td></td><td>ΣP6911</td><td>濃度 (mmol) 0.1 mg/mL</td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Biosesang</td><td>C2002</td><td>濃度 (mmol) 0.05 mM</td></tr><tr><td>コランゲナーゼ溶液 2</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>単離溶液 (20mL)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児アルブミン(BSA溶液3.3 mL)</td><td></td><td></td><td>濃度(mmol)1.67 mg / mL</td></tr>コ<tr><td>ラゲナーゼ2型</td><td>ワージントン</td><td>LS004177</td><td>濃度(mmol)1 mg / mL</td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Biosesang</td><td>C2002</td><td>濃度(mmol)0.05 mM</td></tr><tr><td>BSA溶液</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>分離溶液(40mL)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児アルブミン</td><td></td><td>ΣA7906</td><td>濃度(mmol)400mg</td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Biosesang</td><td>C2002</td><td>濃度(mmol)1mM</td></tr></tbody></table>

筋フィラメントのcaの評価<sup&gt; 2+</sup&gt;感度基礎心臓興奮収縮連関

Assessment of Myofilament Ca2+ Sensitivity Underlying Cardiac Excitation-contraction Coupling

心不全や不整脈は、世界中の死亡率および罹患率の主要な原因です。しかし、疾患のある心臓における病因および心筋機能不全のメカニズムは完全には明らかにされないままです。最近の説得力のある証拠は、筋フィラメントの変化は、Ca 2+感度心筋細胞における細胞内Ca 2+恒常性およびイオンチャネルの活動に影響を及ぼしていること健康と病気の心の中で心臓の活動電位と収縮を担う不可欠なメカニズムを示しています。実際、心臓の活動電位の基礎となるイオンチャネルやトランスポーターの活動（ 例えば Na +、 の Ca 2+およびK +チャネルおよびNa + -Ca 2+交換体）と細胞内Ca 2+のタンパク質（ 例えば 、リアノジン受容体およびCaの取り扱い筋小胞体（SERCA2aの）またはホスホランバンおよびそのリン酸化）2+ -ATPaseは、従来evaluするために測定されます心臓の興奮収縮（EC）カップリングの基本的なメカニズムを食べました。筋フィラメントが収縮と弛緩の機能単位であり、筋フィラメントの Ca 2+感受性が筋原繊維性能の実装では不可欠であるのに対し、膜と細胞内Ca 2+変化の両方の電気的活動は、ECカップリングのトリガ信号です。それが研究の焦点でない限り、それにもかかわらず、いくつかの研究では、心筋の機能解析に筋フィラメントのCa 2+感受性を組み込みます。ここでは、サルコメア短縮/再延長とのFura-2 AM（レシオメトリック検出）およびラット心臓から心筋細胞における筋フィラメントのCa 2+感受性の変化を評価を使用して、細胞内Ca 2+レベルを測定プロトコルを記述します。主な目的は、筋フィラメントのCa 2+感受性が機構的な分析のためのECカップリングに考慮されるべきであることを強調することです。私の総合的な調査翻訳および治療 ​​的価値のより効果的な戦略を設計するための貴重な情報を提供する健康と病気の心の中で筋細胞の収縮性を根底チャネル、イオントランスポーター、細胞内Ca 2+の取り扱い、および筋フィラメントの Ca 2+感受性に。

LV筋細胞は、正常と高血圧ラット心臓から単離されます。フィールドの刺激に応答して、明確な条線（サルコメアを表す）、安定した収縮との棒状筋細胞は、最適な筋細胞であると考えられていると録音（ 図2A）のために選択されています。 Fのigure 2Aに示す例では、フラ2 AMは、LV筋細胞が水平に配置され、筋細胞、記録フィールドの大部分を占めるように、カメラの絞りが調整され、最小限の背景領域が含まれる-loaded。記録フィールドでは、（記録プログラムを通して）をクリックすると、パソコンの画面上では、このボックスをドラッグすることによって、紫色のボックスの大きさを調整します。平均筋節長は1鋭い赤のピークを示す場合には、（ 図2A、下の画像）を記録を開始。 サルコメア長と細胞内Ca 2+ transie両方<html> NTS（フラ-2...

この論文は、ラットの心臓から分離された心筋細胞における収縮中のミオフィラメントCa2+感度の変化を評価するプロトコルについて説明しています。心臓電気生理学、収縮期/拡張期サイトゾルCa2+レベル、収縮/弛緩とともに、この測定は、健康な心臓と病気の心臓の心臓の興奮-収縮結合を媒介するメカニズムを支えるために不可欠です。

筋フィラメントのCaの評価<sup&gt; 2+</sup&gt;感度基礎心臓興奮収縮連関

Heart failure and cardiac arrhythmias are the leading causes of mortality and morbidity worldwide. However, the mechanism of pathogenesis and myocardial ...

この手順の全体的な目的は、筋フィラメントのカルシウム感受性を評価し、健康な心臓および疾患心における収縮の根底にあるメカニズムへの理解を深めることです。本手法は、心不全や心充血に関連する疑問の解明に寄与します。この技術の主な利点は、イオンチャネル、イオン輸送体、および細胞間カルシウムハンドリングと併せて検討することで、健康な状態および心疾患におけるマウス心臓の収縮性のメカニズムを包括的に理解できることです。本手順を開始するために、2つの恒温槽を37°Cに加熱します。5 mLのカルシウムフリーBSA溶液を25 mLのコラゲナーゼ溶液1に、また3.3 mLのカルシウムフリーBSA溶液を16.7 mLのコラゲナーゼ溶液2にそれぞれ加えます。次に、ランゲンドルフ灌流システムのカラム1に100 mLの単離溶液を、カラム2に30 mLのコラゲナーゼ溶液1を加えます。ランゲンドルフ灌流装置の酸素接続チューブを用いて、分離液およびコラゲナーゼ溶液1（カラム1およびカラム2）に酸素を供給します。同様に、振盪恒温水槽内のコラゲナーゼ溶液2およびBSA溶液に、酸素接続チューブを介して100%酸素を供給します。このステップでは、SDラットにペントバルビタールナトリウムを腹腔内投与して麻酔をかけた後、足指へのピンチ刺激による逃避反射の消失を確認し、麻酔状態を確認します。その後、ラットを解剖トレイに移します。仰臥位にし、4本の脚をテープで体の側面に固定します。次に、微細鑷子で大動脈をクランプし、直ちにLangendorff灌流システムのカニューレを装着します。その後、大動脈を縫合糸でしっかりと結紮します。1番目のカラムのバルブを開き、あらかじめ加温し酸素を飽和させた分離液で、単離した心臓を10分間灌流させます。続いて、2番目のカラムのバルブを開き、コラゲナーゼ溶液1で心臓を8〜10分間灌流させます。その後、大動脈を切断して消化した心臓を取り出し、新鮮な単離溶液が入ったフラスコに移します。微細剪刀とピンセットを用いて、中隔を含む左心室（LV）自由壁の大部分を小さく切り刻みます。次に、これらの組織を、あらかじめ加温し酸素供給を行った新鮮なコラゲナーゼ溶液2を含むフラスコに移します。その後、10分間振盪し、コラゲナーゼ含有溶液中の心筋細胞を酸素供給状態で維持します。続いて、心筋細胞懸濁液を10 mL遠心チューブに移し、カルシウム含有BSA溶液を加えます。これを2分間遠心分離します。2分後、上清を捨て、心筋細胞ペレットを5 mLのBSA溶液で再懸濁します。その後、再び遠心分離を行い、上清を捨てます。次に心筋細胞ペレットを分散させ、実験終了まで心筋細胞を10 mLの事前酸素飽和保存液に入れ、室温で保持します。次に、LV心筋細胞に2 µMのacetoxymethyl ester Fura-2AMをロードします。心筋細胞懸濁液1 mLを10秒間遠心分離します。その後、上清を捨て、低カルシウム濃度のTyrode溶液1 mLで心筋細胞ペレットを再懸濁します。続いて、Fura-2AMと2 µLのpoloxamer 407を筋細胞に添加します。筋細胞懸濁液を穏やかに分散させ、混合液を室温で15分間保持します。15分後、混合液を5秒間遠心分離します。上清を捨て、500 µMのカルシウムを含む灌流液1 mLで心筋細胞ペレットを分散させます。10分後、混合物を5秒間遠心分離し、上清を捨てます。次に、新鮮な灌流液を加え、Fura-2AMをロードした心筋細胞ペレットを記録に使用するまでこの溶液中に保持します。記録を開始する前に、ウォータージャケットを通過する灌流チューブに36 °CのTyrode溶液を満たします。続いて、Fura-2AMをロードしたLV心筋細胞懸濁液を数滴、倒立蛍光顕微鏡のチャンバーに滴下し、5〜8分間待機します。その後、Tyrode溶液を2.2 mL/minでゆっくりと灌流させます。次に、デジタル刺激装置のフロントパネルにあるスタートボタンを押し、2 Hzで電場刺激を開始します。記録用に、安定して収縮する心筋細胞を選択してください。ここでは、偽手術群および高血圧ラットの左心室心筋細胞における、サルコメア短縮およびFura-2比測定の生データ波形を示しています。ここでは、サルコメア長とFura-2信号の平均トレースを示します。また、2つのグループにおけるサルコメア長に対するFura-2比の位相平面プロットを示します。軌跡ループは右側にシフトしており、高血圧群ではEC50が高くなる傾向にあります。これは、筋フィラメントのカルシウム脱感作を示唆しています。本手順を試みる前に、Fura-2AMのローディングを行わずに心筋細胞の収縮を検出し、分離した心筋細胞（cortium）をテストすることが重要です。さらに、オーバーロードを避けるため、Fura-2AMローディング後にも必ず心筋細胞の収縮を確認してください。本手順に続いて、さらなる疑問を解消するために、パッチクランプ法などの他の手法を実施することができます。例えば、A型Ca²⁺チャネル活性、すなわち、実質的には心筋細胞の興奮収縮連関などが挙げられます。本手法の開発により、今後の心臓生理学の研究者がヒトの心疾患に関するさらなる知見を探求するための道が開かれました。日常的に習得することで、筋フィラメントのカルシウムチャネル活性を分析する方法について十分な理解を得ることができるはずです。健康な心臓および疾患心における心筋の興奮収縮連関を媒介するメカニズムをより深く理解するために。

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Research

JoVE Journal

Biology

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筋フィラメントのCaの評価

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