Name: 眼圧の上昇を通じて、網膜虚血再灌流障害のマウスモデル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 37 s
Description: 学ぶ マウスを用いた眼圧上昇による網膜虚血再灌流障害モデルの作成法。前房カニューレ挿入による標的損傷誘導と神経血管単位の機能評価手法を解説し、網膜疾患治療研究への応用可能性を示します。

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（; EJD EY022383とEY022683）とコアグラント（P30EY001765）、イメージングおよび顕微鏡コアモジュールこの作品は、国立衛生研究所から研究助成金によってサポートされていました。

倫理声明：すべての手順はジョンズ・ホプキンス大学施設内動物管理使用委員会によって定められたガイドラインに従って行われました。 注：他の齧歯類の株または種を用いてもよいが、撮影時に使用したマウスは、ジャクソンからC57BL / 6マウスです。他の株または種を使用する場合は、麻酔投与量および傷害のタイムラインは変更になる場合がありますのでご注意ください。株、種、および実験的変動に適応するためにI / Rの条件を適合させることが重要です。 1.麻酔カクテルを準備<ol><li> 50ミリリットルの遠心分離管に1.25ミリリットルのケタミン、0.625ミリリットルキシラジン、0.375ミリリットルアセプロマジン、および22.75ミリリットルのリン酸緩衝生理食塩水を組み合わせます。 注：原稿の残りの部分については、このソリューションはカクテルと呼ぶことにします。 </li><li> 60ミリリットルの注射器および0.20μmのフィルターを使用して、新しい滅菌50ml遠心管にカクテルをフィルタリングします。ラベルや日付、この新しいTUです。 </li><li>完全に麻酔薬の光誘起劣化を防ぐためにアルミホイルでカクテルチューブを包みます。 注：カクテルを室温で保存し、最も早い期限成分の有効期限まで再使用することができます。 </li></ol> 2.麻酔ブースターを準備<ol><li> 50ml遠心管中を4mlケタミンおよび16 mlのリン酸緩衝生理食塩水を組み合わせます。 注：このソリューションは、以後ブースターと呼ばれます。 </li><li> 60ミリリットルの注射器および0.20μmのフィルターを使用して、新しい滅菌50ml遠心管にブースターをフィルタリングします。この新しいチューブにラベルを付け、日付。 注：ブースターは、室温で保存し、最も早い期限成分の有効期限まで再使用することができます。 </li></ol> 3.手術室を準備します<ol><li> 18°Cと21°Cの間、室温を設定します。 </li><li>手術テーブルをオンにして、higheにその表面の熱を調整します番目の温度。 </li><li>手術用アンダーパッドですべての作業表面を覆います。 </li><li>暖めるために手術台の空のケージまたは他の容器を配置します。 </li><li>規模や調理台に耳タガーを配置します。 </li></ol> 4.ヘパリンナトリウムとの平衡塩溶液を準備します<ol><li>平衡塩溶液（HBSS）の500ミリリットルのIVボトルにヘパリンナトリウムの0.5ミリリットルを追加します。 </li><li> 0.1％のヘパリンナトリウムの瓶の中にY-サイトチューブprepiercedプライマリーセットの鋭い端を挿入します。 </li></ol> IVポールを設定する5. <ol><li> IVポールの延長から0.1％のヘパリンナトリウムのボトルをハング、そしてY-サイトチューブprepiercedプライマリーセットのエアフィルターキャップを開きスナップ。 </li><li> 163センチメートル（120ミリメートルHgの）に0.1％ヘパリンナトリウムボトルを高めます。ヘパリンナトリウム点滴のピークまでの卓上からの高さを測定します。 </li><li>手動でY-サイトチューブprepiercedプライマリーセットをフリックすることによりIVチューブ内の気泡を除去します。 </l私&gt; </ol> 6.ヘパリンナトリウムドリップを設定します<ol><li> 5バルブマニホールドにY-サイトチューブprepiercedプライマリーセットを接続します。 </li><li>ルアーオス管継手にルアーの雄を使用し​​て、5ポートマニホールドに30ゲージ½インチの針を接続します。 </li><li> 30ゲージチューブの独自の10インチのセグメントに30ゲージ½インチの針のそれぞれを挿入します。 </li><li>止血剤を使用して、新しい30ゲージ½インチの針から針先端を破壊し、30ゲージのチューブに彼らの平滑末端を挿入します。針先端の無菌性や消毒は、ステップ8.3のために必要となります。 </li><li>テープを使用して、内側のポートに接続された管は外側ポートに接続されたチューブの上に配置されるように、針30ゲージチューブを配置します。この配置は、前房のカニュレーション時に配管のもつれを防ぐことができます。 </li><li> 5バルブマニホールドにし、各ポートに0.1％ヘパリンナトリウムの流れをオンにします。 <ol><li> 0.1％いることを確認してくださいヘパリンナトリウムは、ポートごとに強く流れています。ポートが弱く流れている場合は、ポートを交換するか、無菌注射器から空気でそれをオフにします。 </li><li> 30ゲージ管5バルブマニホールドから気泡を除去するために3分 - 0.1％ヘパリンナトリウム2のフローを可能にします。 </li></ol></li><li> 5バルブマニホールド上のすべてのポートをオフにします。 </li></ol> 7.手術のためのマウスを準備<ol><li>手術室にマウスを持参してください。手術中に動物の脱水を防ぐために、各ケージのために水のボトルを供給してください。 </li><li>各マウスの体重を記録します。 </li><li>グラムの体重あたり0.02ミリリットルカクテルを腹腔内に各マウスを注入します。 </li><li>タグを付けると、各マウスの数を記録します。 </li><li>手術テーブルの上に空の容器にすべてのマウスを置きます。つま先のピンチにペダル引っ込め応答の欠如によって確認されるように、深い麻酔を達成するために、すべてのマウスのための5-10分を許可します。 </li><li>各マウスについての一滴を投与瞳孔拡張および短​​期潤滑用それぞれの目にトロピカミド。 </li><li>各マウスについて、局所麻酔および短期の潤滑にそれぞれの目にプロパラカイン一滴を管理します。 </li><li>麻酔された最初のマウスはカニューレを挿入する最初のマウスになるように、麻酔のためにマウスを配置します。 </li><li>目には約2分を有効に降下することができます。 </li><li>テープにしっかりと引っ張ることにより、テープのストレート4インチ片を準備します。さておき、各マウス用テープの1枚を設定します。 注：テープにしっかりと引っ張っしないと、テープのカールになります。 </li></ol> 8.カニューレを挿入前房<ol><li>手術用顕微鏡下での最初のマウスを配置し、好ましい角膜に顕微鏡の焦点を合わせます。 注：カニューレ挿入は、いずれかの眼の上で実行することができます。右側の支配的な外科医は私を見つけることができます左側の支配的な外科医が右を好むかもしれないが、左目にカニューレを挿入するためにトンが最も簡単。 </li><li> 5バルブマニホールドの最初の0.1％ヘパリンナトリウムポートをオンにします。 </li><li>手術用顕微鏡下で、静かに目をproptoseするためにピンセットを使用しています。小帯繊維と角膜の頂点の間のほぼ中間に前房内に30ゲージのカニューレ針を挿入します。 <ol><li>アイリス、レンズ、または内側の角膜表面を傷や刺さないように注意してください。 </li><li>角膜をもう一度貫通することは避けてください。 </li><li>カニューレと角膜との間の摩擦を克服するために穏やかなひねり運動を使用して、前房に深くカニューレを挿入します。 </li></ol></li><li>テーブルに30ゲージのチューブを固定するためにテープのストリップを使用してください。テープに手を伸ばしながら、挿入されたカニューレの動きを最小限に抑えるために、卓上に対して30​​ゲージのチューブを押してください。 </li><li>手術の開始時間を記録します。 </li><li> VERIF、顕微鏡を用いて漏れが見られないのy。漏れがある場合は、流体の動きは、目の近くに表示されます。 </li><li>視覚的にI / Rの眼は反対側の眼よりも大きいことを観察することにより、眼の膨満を確認します。一緒に、漏れの有無および眼の膨満の存在は、眼圧の正常な上昇を示しています。 </li><li>両眼にヒプロメロースを適用します。ヒプロメロースは、角膜とシールmicroleaksを潤滑するのに役立ちます。持続的な潤滑用（約30分ごとに）必要に応じてヒプロメロースを再適用します。 </li><li>すべての動物がカニューレを挿入されるまで、手順8を繰り返します。 </li></ol> 9.モニター麻酔<ol><li>つま先のピンチを使用して、ウィスカー、または尾の目視観察の目視観察では、各マウスは麻酔をかけたままであることを確認します。マウスはペダル引っ込め応答、ウィスカーけいれん、または尾の動きを示すべき、9.2のステップにすぐ進みます。 </li><li>マウスは、手術、リフト中目覚め始めた場合マウス後ろから腹腔内に下腹部に0.05ミリリットルブースターを注入する尾。ブースターを有効にするために2分 - 1を許可します。 </li><li>マウスは、必要に応じて追加の鎮静、繰り返し手順9を要求する必要があります。 </li></ol> 10.前房からカニューレを削除します<ol><li>各動物について、90分が経過した後、静かに前房からカニューレを引き出します。 </li><li>隣接する動物のカニューレチューブを乱さないように注意しながら、手術台からマウスをUntape。 </li><li>ゼリーを潤滑に両眼を潤滑。 </li><li>その後のカニューレが除去されるように、手術から回復するために手術台に空の容器にマウスを配置します。手術台の熱をオフにしないでください。 </li><li>加熱された手術台に回復のために3時間 - 2、最低でも、許可します。彼らは完全に麻酔から回復するまで頻繁にマウスを観察します。 </li></ol> 11.クリーン式uipment <ol><li>アルコール綿を使用してカニューレを駆除。 注：例えば、オートクレーブのような消毒または滅菌のための他の方法は、置換されていてもよいです。 </li><li>空気で満たさの60mLシリンジを用いて5バルブマニホールド、30ゲージ針、30ゲージチューブ、及びカニューレから0.1％のヘパリンナトリウムを放出します。 </li><li>蒸留水で満たされたの60mLシリンジを用いて5バルブマニホールド、30ゲージ針、30ゲージチューブ、及びカニューレをすすぎます。 </li><li>空気で満たさの60mLシリンジを用いて5ポートマニホールド、30ゲージ針、30ゲージチューブ、及びカニューレから蒸留水を追い出します。 </li><li>カニューレを消毒し、チュービング装置を洗浄した後、再使用のためにこの装置を格納します。 </li><li>ストア、破棄、または他のすべての機器の電源を切ってください。上の手術台の熱を残します。 </li></ol> 12.戻るホームケージにすべてのマウス<ol><li>マウスは（2後 - 3時間）手術から目覚めた後、そのホームケージに各動物を返します。各ケージ用のゲル食品を提供します。その指定された部屋にすべてのケージを返します。 </li><li>手術台の熱をオフにします。すべての廃棄物を捨てて、手術室を拭いてください。 </li></ol> 13.網膜評価を実施<ol><li>必要に応じて、電記録用の組織学的分析や暗い適応マウス用の網膜を収集します。 </li></ol>

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網膜I / IOPの上昇によってR損傷はげっ歯類の網膜神経血管ユニット内の細胞の損傷や機能障害、特に神経変性を、モデ​​リングにおけるその有用性を証明してきました。この手順では、ロバスト制御の組織を提供し、技術的な洗練の面で簡単にアクセス可能です。なお、この、圧力および虚血の持続時間を増加させることは、損傷の重大度24を増加させることができる他のI / R傷害モデルにおいて注目されています。このため、一部の医師は、ここ4,6-10,12提示されたものとは異なる虚血圧と期間を使用することを選択しています。それは自分の特定の実験の目標に対応するために、1は、外科手術用のパラメータを調整することを可能にするという点で、そのため上昇したIOPによって網膜のI / R損傷は、代替網膜のI / Rの技術に勝る利点を提供しています。 それにもかかわらず、代替技術は、げっ歯類の網膜I / R傷害を誘導するために使用されてきました。視神経の束25,26の連結</SUP&gt;単独網膜中心動脈27は、</...

網膜虚血-再灌流（I / R）は、緑内障、糖尿病性網膜症、および網膜血管閉塞1を含む多くのヒト網膜病変を特徴づけます。循環が続いて復活されたときに網膜I / Rで、網膜血管系における血流低下（虚血）は網膜の酸素や他の栄養素に対する過敏症、重度の酸化を沈殿させ、炎症性損傷の状態を作成します（再灌流）2。神経網膜は、網膜神経変性は、I / R誘発損傷のおそらく最も顕著な特徴であることで、これらの変化に対して特に脆弱表示されます。ここで紹介するには、マウスにおける網膜のI / R傷害をモデル化するためのプロトコルです。この手法は、網膜神経血管ユニットのヒトの疾患のための潜在的なメカニズムと治療戦略を検討する研究者を可能にします。 外科的貧血3の神経変性結果を理解しようとしている外科医によって1952年に開拓し、ローデン眼内圧上昇（IOP）によるT網膜I / Rは、虚血発作4の後の神経変性のエンドポイントを標準化する目的で1991年に再確立されました。収縮期血圧の上にIOPを上昇させるために、生理食塩水リザーバの点滴を用いて、これらの研究は、加圧された眼のカニューレは、網膜循環を中断し、それによって神経変性を開始するのに十分であったことを実証しました。上昇したIOPによって網膜のI / Rを使用して、より最近の努力は、I / R誘導性の網膜神経変性5-12のメカニズムを詳しく説明し始めています。複数のグループが炎症13,14、血管透過性15,16、および毛細血管の変性14,17を含む追加の病理学的変化を報告しています。まとめると、これらの研究は、より一般的には、網膜の神経血管疾患のモデルとして上昇したIOPによって網膜のI / R傷害を確立しています。 I / R傷害のメカニズムを特徴づけることは、VAの研究のために不可欠ですscular病気。上昇したIOPによって網膜のI / R傷害は、肺18のI / R傷害を含む多くの低酸素誘導性傷害モデル、の1、心臓19、脳20、肝臓21、腎臓22、および腸23です。これらのモデルは、血管の病気の理解とその臨床的救済を進める上で最も重要でした。眼組織へのI / Rプロセスの調査を拡張することにより、上昇したIOPによって網膜のI / R損傷は、これらに関連する条件のより包括的な絵を描くのに役立ちます。 網膜における臨床神経変性状態と密接に対応して、上昇したIOPによって網膜のI / R傷害は、虚血性病​​因を探索に興味を持って研究者のための貴重なツールを提供します。本明細書に記載されたプロトコルは、ターゲットを絞った扱いやすい、かつアクセス可能です。このような網膜神経細胞の定量化、網膜の厚さの測定、および電気生理学rと、神経変性にエンドポイントによっても補完されます網膜神経細胞機能のecording。このモデルは、神経血管問い合わせを進める上で、その有用性を証明していて、それは視覚的な医学研究の基礎プロトコルとして地位を獲得中の約束を示しています。

<table><tbody><tr><td>ヘパリンナトリウム注射剤、USP</td><td>Abraxis Pharmaceutical Products</td><td></td><td>1,000 USP/ml</td></tr><tr><td>BSS 滅菌灌漑液</td><td>Alcon Laboratories, Inc.</td><td>9007754-0212</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>SC-2 kgデジタルポケットスケール</td><td>アメリカン体重計株式会社</td><td>SC-2 kg</td><td></td></tr><tr><td>トロピカミド点眼液 USP 1%</td><td>バウシュ + ロム</td><td></td><td>1% (10 mg/ml)</td></tr><tr><td>プロパラカイン 塩酸塩点眼液 USP、0.5%</td><td>バウシュ + ロム</td><td></td><td>0.5% (5 mg/ml)</td></tr><tr><td>INTRAMEDIC ポリエチレン チューブ</td><td>ベクトン ディキンソン アンド カンパニー</td><td>427400</td><td>内径: 427400</td></tr><tr><td>30 G 1/2 プレシジョングライド ニードル</td>ズ <td>ベントン ディキンソン アンド カンパニー</td><td></td><td></td>305106</tr><tr><td>BC 1 ml TB シリンジ、スリムチップ、皮内ベベル針付き、26 G x 3/8</td><td>ベントン ディキンソン アンド カンパニー</td><td>309625</td><td></td></tr><tr><td>BD 60 ml シリンジ ルアーロック チップ</td><td>ベントン ディキンソン アンド カンパニー</td><td>309653</td><td></td></tr><tr><td>ツァイス OPMI Visu 200/S8 顕微鏡</td><td>カール ツァイス AG</td><td>000000-1179-101</td><td></td></tr><tr><td>滅菌シリンジ フィルター</td><td>コーニング インク</td><td>CLS431224</td><td>0.20 & マイクロ;m</td></tr><tr><td>Durasorb Underpads</td><td>Covidien</td><td>1038</td><td>23 x 24 インチ</td></tr><tr><td>アルコール準備</td><td>Covidien</td><td>6818</td><td>2 プライ、中</td></tr><tr><td>学生 デュモン #5 鉗子</td><td>ファイン サイエンス ツール</td><td>91150-20</td><td></td></tr><tr><td>ハートマン ヘモスタット</td><td>ファイン サイエンス ツール</td><td>13002-10</td><td></td></tr><tr><td>プライマリ セット、マクロボア、プリピアス Y サイト、80 インチ</td><td>Hospira</td><td>12672-28</td><td></td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水 pH 7.4 (1x)</td><td>Invitrogen</td><td>10010-049</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>蒸留水</td><td>Invitrogen</td><td>15230-204</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>C57BL/6J マウス</td><td>ジャクソン研究所</td><td>664</td><td></td></tr><tr><td>AnaSed 注射剤:キシラジン滅菌液</td><td>LLOYD, Inc.</td><td></td><td>20 mg/ml</td></tr><tr><td>潤滑ゼリー、水溶性静菌</td>性 <td>MediChoice</td><td></td><td>3-Gram Packet</td></tr><tr><td>NAMIC 血管造影圧力モニタリング マニホールド</td><td>Navilyst Medical, Inc.</td><td>70039355</td><td>5バルブマニホールド メス7ポート付</td></tr><tr><td>ゴニオソフト ヒプロメロース 2.5%点眼用粘液 ヒドロキシプロピルメチルセルロース</td><td>OCuSOFT, Inc.</td><td></td><td>2.5% (25 mg/ml)</td></tr><tr><td>Ketaset CIII: Ketamine Hydrochloride</td><td>Pfizer, Inc.</td><td></td><td>100 mg/ml</td></tr><tr><td>トランスパル I.V.スタンド&nbsp;</td><td>プライヤー製品</td><td>372</td><td>自家製の60cmステンレス鋼エクステンションを装備</td></tr><tr><td>アセプロマジン:アセプロマジンマレイン酸注射、USP</td><td>Vet One</td><td></td><td>10 mg / ml</td></tr><tr><td>Vトップ手術テーブル/調整可能な油圧</td><td>VSSI</td><td>100-4041-21</td><td></td></tr>チューブ<tr><td>フィッティングルアーオスからルアーオス</td>ワー<td>ナーインスツルメンツ</td><td>64-1579</td><td></td></tr></tbody></table>

眼圧の上昇を通じて、網膜虚血再灌流障害のマウスモデル

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

網膜虚血 - 再灌流（I / R）は、緑内障、糖尿病性網膜症、および網膜血管閉塞を含む複数の眼症状、内細胞損傷に寄与する病態生理学的プロセスです。 I / R傷害の齧歯類モデルは、特に網膜神経血管部における神経変性損傷に関して、人間のI / R傷害のためのメカニズムと治療戦略に重要な洞察を提供しています。ここで紹介するには、眼圧（IOP）の上昇を通じて、マウスにおける網膜のI / R傷害を誘導するためのプロトコルです。このプロトコルでは、眼の前房は、高い生理食塩水溜りの点滴を流れる針でカニューレを挿入します。収縮期動脈圧の上にIOPを発生させるために、この点滴を使用して、施術者は、一時的に内網膜の血流（虚血）を停止します。循環がカニューレの除去により（再灌流を）復活された場合、深刻な細胞の損傷は、網膜神経変性に最終的に得られ、すさまじいです。最近のスタッドIEは、このモデルの追加要素として炎症、血管透過性、および毛細血管の変性を示しています。このような網膜動脈結紮などの代替網膜のI / R方法論と比較して、上昇したIOPによって網膜のI / R損傷はにおけるニューロン病因と治療を調べるための貴重なツールとしての地位を提示し、その解剖学的特異性、実験的な従順、および技術的なアクセシビリティの利点を提供しています網膜神経血管ユニット。

上昇したIOPによって網膜のI / Rの神経変性作用は、一般に、2つの標準的なアプローチを用いて評価されています。ニューロン核のNeuNの免疫標識は、I / R傷害（ 図1）以下の重要な神経細胞の損失を明らかにしました。 I / Rが、パラホルムアルデヒドで固定し、神経細胞マーカーのNeuNで標識され、そして全マウントした後に簡単に説明すると、目が7日を摘出します。画像は、共焦点顕微鏡を用いて撮影し、そしてのNeuNで標識された細胞11を計数することによって定量しました。神経節細胞層のニューロン数の減少は、I / R誘導性細胞死を示します。 網膜神経細胞の機能の障害が電図（ 図2）を使用して文書化されています。簡単に言えば、7日間I / R後、暗所視電図は、複数のフラッシュ強度で記録しました。 A及びB波の振幅は、画像解析ソフトウェアを用いて...

この記事では、マウスにおける高眼圧によって網膜虚血再灌流障害を誘導するための手順を説明します。高眼圧による網膜虚血 - 再灌流障害は、網膜神経血管ユニットのヒトの疾患のための潜在的な細胞機構と治療法を検討する研究者を可能にする、網膜に妥協酸素と栄養配信を特徴とするヒトの病態をモデル化するのに役立ちます。

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

本手法の全体的な目的は、網膜虚血再灌流傷害およびその病理学的結果の実験モデルを提供することです。この方法は、網膜虚血再灌流の根底にあるメカニズムの調査や、関連する病理を治療するための潜在的な治療アプローチの評価に一般的に用いられています。本手法の主な利点は、周囲組織への損傷を最小限に抑えつつ、眼構造に高度に標的を絞った傷害を誘発できることです。本手法の有用性は、炎症、酸化ストレス、および網膜神経血管ユニットにおける機能不全を含む、網膜虚血再灌流傷害の多様な発現形態の理解と解析にまで及びます。カニューレ留置の外科的手技は視覚的なガイドなしに再現することが困難であるため、本手法のビデオデモンストレーションは極めて重要です。処置を開始する前に、テーブル上の空のケージを温めておいてください。次に、あらかじめ穿刺されたプライマリセットのYサイトチューブの鋭い端を0.1%ヘパリンナトリウムボトルに挿入し、ヘパリンナトリウムボトルの底部をIVポールエクステンションに吊り下げます。チューブのエアフィルターキャップをパチンと開けます。その後、テーブルトップからヘパリンナトリウム点滴の頂点まで163 centimetersの高さにヘパリンナトリウムボトルを上げ、120 mililiters of mercuryのヘパリンナトリウム流体圧を発生させます。一次セットの事前穿刺済みYサイトチューブを開き、ヘパリンナトリウムをチューブ内に充填させ、一次セットの事前穿刺済みYサイトチューブを5バルブマニホールドに接続します。次に、ルアーオス-ルアーオスチューブフィッティングを使用して、30ゲージの0.5インチ針を5ポートマニホールドに接続します。それぞれの針を、30ゲージチューブの10インチのセグメントに挿入します。次に、止血鉗子を使用して、新品の30ゲージ・1/2インチ針の先端を折断し、その鈍端を30ゲージチューブの開放端に挿入します。続いて、テープを用いて針チューブを配置し、前房カニュレーション中のチューブの絡まりを防ぐため、内側ポートに接続されたチューブが外側ポートに接続されたチューブの上に位置するようにします。ここで、0.1% Heparin sodiumのフローを5路バルブマニホールドおよび各個別のポートへ2〜3分間流し、気泡を除去します。次に、5方バルブマニホールドのすべてのポートを閉じます。カニュレーションを行うために、麻酔投与後、すべてのマウスを手術台上の保温ケージに入れ、5〜10分後に足指へのピンチ刺激に対する反応がないことを確認し、深い麻酔状態にあることを確かめます。その後、瞳孔散大のためにトロピカミドを1滴、局所麻酔のためにプロパラカインを1滴を各マウスの眼に投与し、最初に麻酔をかけたマウスから順にカニュレーションを行えるよう、麻酔の順にマウスを配置します。点眼薬の効果が現れるまで、4インチの直線的なテープを4本準備します。テープをちぎる前にしっかりと引っ張り、動物1匹につき1本のテープを用意して脇に置いておきます。テープをしっかりと引っ張らないと、テープが丸まってしまうので注意してください。1匹目のマウスの準備ができたら、動物を手術用顕微鏡の下に配置します。次に、5バルブマニホールドの最初の0.1%Heparin sodiumポートを開き、ピンセットを用いて一方の眼をそっと突出させます。続いて、30ゲージのカニューレ針を、毛様帯線維と角膜頂点のほぼ中間辺りの前房に挿入します。この際、角膜を二度突き刺さないよう注意してください。カニューレを前房の深部まで挿入する際は、緩やかにねじるようにして挿入してください。次に、テープを取り出す間のカニューレの動きを最小限に抑えるため、30ゲージのチューブをテーブルトップに押し付け、テープを使用してチューブをテーブルに固定します。チューブが固定されたら、手術の開始時間を記録してください。顕微鏡を用いて、漏出がないこと、および虚血再灌流側の眼が対側眼よりも大きいことを確認し、眼球拡張が認められることを確定させます。その後、角膜を潤滑させ、微小な漏出箇所を密封するため、実験終了まで30分ごとに両眼にヒプロメロースを塗布します。処置中に動物が動いた場合は、尾を持ち上げ、ケタミンの追加投与を腹腔内に行います。1匹目の動物にカニューレを挿入してから90分後、前房からカニューレをゆっくりと引き抜き、両眼に潤滑ジェリーを塗布します。以降のカニューレ除去後は、動物が完全に回復するまで、各マウスを手術台上のケージに戻します。すべてのカニューレを除去した後、アルコール綿で消毒します。次に、空気を充填した60 milliliterシリンジを用いて、5方活栓マニホールド、30 gauge針、30 gaugeチューブ、およびカニューレからHeparin sodiumを押し出します。続いて、蒸留水を充填した60 milliliterシリンジですべての器具を洗浄します。最後に、60 millilitersの空気ですべての材料から蒸留水を押し出し、消毒および洗浄済みの機器を後で使用するために保管します。虚血再灌流傷害から7日後、共焦点顕微鏡イメージングによる神経細胞核のNeuN免疫標識により、虚血再灌流の負荷に伴う顕著な神経細胞の消失が明らかになりました。実際に、対照群と虚血再灌流群の眼におけるNeuN陽性細胞を手動で定量化したところ、傷害後の神経節細胞層のニューロン数の減少が示され、虚血再灌流に起因する細胞死の存在が示唆されました。また、網膜電図で記録されたa波およびb波の振幅の低下は、対照である非傷害眼と比較して、虚血再灌流による網膜神経機能の障害が発生していることを示しています。この手法を習得すれば、マウスが麻酔から回復するまでの最後の2時間を待機時間として含め、10匹の動物に対して約5時間で実施することが可能です。この処置を行う際は、深い麻酔状態を維持することが重要です。効果的な鎮静により、動物の動きによるカニューレの脱落を防ぐことができるためです。この手順に続き、網膜機能に関するさらなる疑問を解決するために、網膜電図などの他の手法を実施することができます。この技術により、眼科、神経科学、血管生物学の分野の研究者は、げっ歯類における網膜の神経血管病理および治療的介入を探索することが可能になりました。このビデオを視聴することで、前房カニュレーションを通じて標的となる網膜損傷を誘発する方法について、十分な理解を得ることができます。外科用器具の取り扱いは非常に危険であるため、本手順の実施中は、適切な鋭利物廃棄容器の使用などの予防措置を常に講じることを忘れないでください。

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Medicine

医学

緑内障は、世界の失明の主要原因の一つです。高眼圧は、主要な危険因子です。レーザー光凝固誘発高眼圧症は十分に確立された動物モデルの一つです。このビデオでは、ラットでのアルゴンレーザー光凝固術によって高眼圧症を誘発する方法を示します。...

SDラットにおけるレーザー誘起慢性高眼圧症モデル

出典:Lani-Louzada, R., et al., げっ歯類の外科的に誘発された緑内障のための辺縁血管神経叢の全円焼灼。J. Vis. Exp.

ラットモデルにおける眼圧上昇の誘導

慢性高眼圧症は、マウスの目に小柱網のレーザー光凝固を使用して誘導される。眼圧（IOP）は、レーザー治療後数ヶ月上昇する。視力と実験動物のコントラスト感度の低下は微細運動テストを使用して監視している。...

ビジュアル欠陥を特徴づけるために慢性高眼圧症のレーザー誘起マウスモデル

げっ歯類の網膜は、長い脳へのアクセス可能なウィンドウとして認識されている。この技術的な論文では、虚血性損傷後の中枢神経系内の血管再生の故障につながるメカニズムを研究するために、酸素誘発性網膜症のマウスモデルを採用しているプロトコルを提供する。説明したシステムはまた、網膜およびCNS内の機能の血管の成長を促進するための戦略を探求するために利用することができる。...

マウス網膜を使用してCNSにおける血管再生の評価

ここでは、緑内障に観察される網膜神経節細胞の損失をもたらすマウスの眼の高眼圧症を誘発するためのプロトコルを提示します。磁性マイクロビーズは、前房に注入し、房水の流出を阻止するために磁石を使用して、虹彩角膜角に引き寄せられます。...

磁気マイクロビーズ閉塞モデルマウスにおける緑内障高眼圧症依存誘導すること

慢性的な高眼圧症は、ラットおよびマウス、緑内障と網膜神経節細胞の構造と機能の劣化につながる circumlimbal...

ラットおよびマウスの Circumlimbal 縫合による緑内障のモデル

ここでは、シリコーンオイルのカメラインジェクションによるマウス目の眼圧高血圧および緑内化神経変性を誘導するプロトコルと、眼圧の上昇を戻すための前房からのシリコーンオイル除去の手順を提示する。通常。...

マウスにおける可逆シリコンオイル誘発眼圧モデル

酸素誘導網膜症(OIR)は、未熟児網膜症や糖尿病網膜症の増殖などの虚血性網膜症をモデル化し、新血管疾患の抗血管新生薬の評価における概念実証研究のモデルとして使用することができます。OIRは、定量化できるレチナにおける堅牢で再現性の新生血管化を誘導する。...

げっ歯類における虚血性網膜症の酸素誘導網膜症モデル

ここでは、単純な縫合糸とクランプを用いた一過性両側共通頸動脈閉塞によるレチナル虚血のマウスモデルについて述べている。このモデルは、心血管異常によって引き起こされる虚血の病的メカニズムを理解するのに有用である。...

一過性両側性頸動脈閉塞による虚血性筋炎損傷のマウスモデル

このプロトコルは、マウス網膜フラットマウントの調製および免疫蛍光染色および分析のための詳細な方法を記載する。マウスの仔に対するフルオレセイン眼底造影(FFA)の使用および画像処理についても詳細に説明されている。...

酸素誘発網膜症マウスモデルにおける網膜血管の動的成長のモニタリング

このプロトコルは、前房カニューレ挿入と眼圧上昇を介して網膜虚血を誘発することにより、マウスの眼の網膜虚血再灌流損傷をモデル化し、続いて眼圧の正常化により再灌流を開始します。...

マウス眼モデルにおける網膜虚血-再灌流障害の誘導

学ぶ マウスを用いた眼圧上昇による網膜虚血再灌流障害モデルの作成法。前房カニューレ挿入による標的損傷誘導と神経血管単位の機能評価手法を解説し、網膜疾患治療研究への応用可能性を示します。

眼圧の上昇を通じて、網膜虚血再灌流障害のマウスモデル

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