Name: マウスの小腸リンパ球の単離およびフローサイトメトリーキャラクタリゼーション (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-08T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 14 s
Description: 学ぶマウス小腸リンパ球の単離とフローサイトメトリー解析法。上皮層の除去、組織消化、Peyer斑の処理により、迅速かつ再現性の高い細胞懸濁液を調製し、粘膜免疫学における腸管免疫系の研究に応用できます。

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すべての研究は、実験動物学のためのアメリカ協会（AALAS）によって設定された獣医の基準を満たしているハーバード・メディカルスクールの施設内動物管理使用委員会（IACUC）に従って厳格な審査とガイドライン下で行いました。 共同住宅（オプション）を介して細菌の1水平伝播<ol><li>食品との両方がオートクレーブ処理された水を使用して、無菌の使い捨てケージを組み立てながら（ノトバイオートマウスを用いた場合は特に）外因性の汚染を最小限に抑えるために、無菌テクニックを練習。 </li><li>異なるmicrobiotasを保有し、同じケージでそれらを収容する6週齢のC57BL / 6マウスを個別にマークするために、耳パンチまたはタグを使用してください。マウスは食糞であり、ケージの床から糞を食べることを考えると、微生物が自然にマウスの間で水平方向に送信されます。 </li><li> ≥1週の共同住宅マウスは、分析前に微生物の転送および免疫学的変化のための時間を可能にします。 </li></オール&gt; 小腸上皮内のレイヤおよび固有層からの単一細胞懸濁液の調製<ol><li> 溶液の調製 <ol><li> （小腸あたり）抽出媒体の準備：30ミリリットルRPMI + 93μlの5％をジチオスレイトール（DTT）（w / v）の+ 60μlの0.5 M EDTA + 500μlのウシ胎児血清（FBS）。使用直前にDTTを追加します。 </li><li> （小腸あたり）消化メディアを準備：25ミリリットルRPMI + 12.5 mgのディスパーゼ+ 37.5 mgのコラゲナーゼII + 300μlのFBS。使用直前にディスパーゼおよびコラゲナーゼを追加します。 </li><li> 37°C、37°C​​にprewarmソリューションで行うすべてのインキュベーションのために。 </li></ol></li><li>頸椎脱臼に続いてCO 2窒息によりマウスを安楽死させます。 </li><li>ダウンマウスの背側に配置し、70％エタノールで腹部をスプレー。順次、あちこち腹側正中線に沿って皮膚、その後、腹膜筋膜を切断することにより開腹術を実行するためにハサミを使用して、このようにして腹腔を露出させ、剣状突起に恥骨結合をメートル。 </li><li>幽門括約筋を横断することにより、胃から小腸を分離するためにハサミを使用してください。ゆっくり腸間膜脂肪を離れてからかって、腹膜から小腸を削除します。 <ol><li>完全に小腸を削除するには、回盲接合部で第二切断してください。寒冷に分離小腸を配置し（ すなわち 、4℃）、10％FBSを含むRPMIに細胞生存率を最大にするために。 </li></ol></li><li>緩やかに湾曲鉗子を使用して、脂肪の大部分を削除します。脂肪を除去しようとしたときに、腸組織自体を引き裂くないように注意してください。 </li><li>注射器に取り付けられた18 G送り針を使用して冷PBSの20ミリリットル - 15で腸内容、優しくフラッシュ腸を削除します。 </li><li> PPを切除するためにハサミを使用し、5％FBSを含む冷RPMIに入れます。 PPSは、小腸のantimesenteric側に位置し、多分葉白として表示されます質量。 12のPP - 特定の菌株に応じて、マウスは、通常は8を持っています。 </li><li> 4インチのセグメント - 3に小腸をカット。 </li><li>離れて組織から脂肪をいじめるために鈍いメスを用いて、RPMIで湿らせたペーパータオル上の各小腸セグメントを圧延することにより、残留脂肪を取り除きます。 </li><li>湾曲した鉗子で腸セグメントをカニューレを挿入し、組織の遠位端をつかんで裏返し組織を回します。そして、そっと反転されている組織で、その結果、湾曲した鉗子（近位端で始まる）から組織セグメントを削除するには、ストレートピンセットを使用しています。 </li><li> 30抽出媒体のmlおよび撹拌棒を含むカップに組織セグメントを配置します。カップの蓋を固定し、そして37℃で15分間500rpmで攪拌​​。攪拌を激しくなく、乱流ではないでなければなりません。 </li><li>インキュベーション後、曇って表示されます上皮含有上清から組織片を分離するために鋼製のストレーナーを使用します。この上清は、私が含まれています2.23 - 2.18手順でサンプルを濾過するに進むことにより、所望の場合、さらに、分析することができるntraepithelialリンパ。 </li><li>手動での残留抽出媒体を洗い流すためにRPMIで組織片を攪拌します。 </li><li>乾いたペーパータオルで組織を置き、抽出媒体によって遊離されなかった残余の粘液の除去を容易にするために、端部の上に数回を終了フリップ。 </li><li>消化培地600μlの1.5 mlチューブに組織片を置きます。 </li><li>作品はもはやハサミに固執せず、溶液が均一表示されるまで、組織をミンチするはさみを使用してください。このステップでは、組織の完全な酵素消化を確保することが重要です。 </li><li>消化メディアの25ミリリットルを含むカップにみじん切り小腸を追加します。 37℃で30分間、500rpmで攪拌​​します。途中で消化（ すなわち 、15分で）を介して、アップピペットおよびダウン血清学的ピペットで組織の任意の大きな塊を破壊するために役立ちます。 </li><li>フィルタ消化された組織（またはepith50ミリリットルチューブに100μmのセルストレーナーを介して処理IELs場合はステップ2.12からelial層）。 10％FBSを含むRPMI 20mlでストレーナーを洗浄します。 </li><li> 4℃で10分間、500×gでろ過した溶液を遠心。 </li><li>慎重に10％FBSを含むRPMIの1ミリリットルで上清と再懸濁ペレットをデカント。 </li><li>フィルターを50mlチューブに40μmのセルストレーナーを介して細胞を再懸濁しました。 10％FBSを含むRPMI 20mlでストレーナーを洗浄します。 </li><li>遠心分離機は、4℃で10分間500×gで解決策を濾過しました。 </li><li>慎重に、2％FBSを含むRPMIの1ミリリットルで上清、およびペレットを再懸濁しデカント。 </li></ol>パイエル板からの単一細胞懸濁液の調製<ol><li>転送は25消化メディアのmlおよび撹拌棒をカップにのPPを切除しました。セキュアな蓋、および37℃で10分間、500 rpmでスピン。 </li><li>フィルターを50mlチューブに40μmのセルストレーナーを通してのPPを消化しました。任意の塊のREMA場合で、1mlシリンジからプランジャの平らな端を使用して、ストレーナを介してそれらを押してください。 </li><li> 10％FBSを含むRPMI 10mlでストレーナーを洗浄します。 </li><li>遠心分離機は、4℃で10分間500×gで解決策を濾過しました。 </li><li>慎重に、2％FBSを含むRPMIの1ミリリットルで上清、およびペレットを再懸濁しデカント。 </li></ol>フローサイトメトリー用4.表面染色<ol><li>細胞のアリコート適切な量（ 例えば 、LPLsの200μl）を96ウェル丸底プレートに。 </li><li> 4℃で5分間、500×gで遠心分離します。プレートを反転させて上清を除去。 </li><li> RPMI、2％FBSを含む90μlの再懸濁細胞と1：抗CD16 / 32（FCブロック）の100倍希釈。 4℃で10分間インキュベートします。 </li><li> 10μlのPBSを追加します。 4℃で5分間、500×gで遠心分離します。プレートを反転させて上清を除去。 </li><li> 250μlのPBSで細胞を再懸濁し。 4℃で5分間、500×gで遠心分離します。により上清を除去プレートを反転します。 </li><li>生存性染料と（オプション）ステイン細胞、必要に応じて、製造業者のプロトコルに従うことによって。 </li><li>細胞を固定するために、100μlの1％ホルマリンで細胞を再懸濁します。 4℃の暗所で1時間インキュベートします。 </li><li> 200μlのPBSを追加します。 4℃で5分間、500×gで遠心分離します。プレートを反転させて上清を除去。 </li><li> 250μlのPBSで細胞を再懸濁し。 4℃で5分間、500×gで遠心分離します。プレートを反転させて上清を除去。 </li><li> 200μlのPBSで細胞を再懸濁し。フローサイトメーターを用いて細胞を分析します。 </li></ol>

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</ol>

利益相反は宣言されていません。

我々はLPLs、IELs、およびPP内のリンパ球を含む小腸リンパ球の単離およびフローサイトメトリーの特性評価のためのプロトコルを提示します。微生物叢の変化が小腸管免疫系にどのように影響するかを評価することに興味のある方のために、私たちの詳細異なるmicrobiotasを保有するマウスとの間の生物の水平伝達に関与する簡単な手順。このプロトコルは、小腸に焦点を当てているが、手順が唯一の違いは削除する一切のPPが（結腸パッチが存在するが、これらは通常、肉眼では見えない）が存在しないことであることで、大腸の分析のために同じです。 小腸組織からのリンパ球の最適な分離を達成するためのいくつかの重要なステップがあります。脂肪組織の細心の除去は、リンパ球の生存率と最適な収量を確保するために絶対的に重要です。また、DTTは、抽出に使用される重要な粘液溶解薬であります上皮細胞。その不安定な性質を考えると、我々は≤-20℃で5％溶液の単一使用のアリコートを貯蔵し、未使用のボリュームを再凍結はない示唆しています。 EDTAは、上皮細胞15の除去を助けるために抽出媒体で使用されているが...

小腸の主なタスクは、しばしば、栄養素1の消化吸収であると考えられます。この代謝機能が明らかに必須であるが、小腸内腔2内に見られる環境抗原の継続的な弾幕からホストを保護するのに等しく重要な役割を担っています。腸管外の世界を分離する（ 例えば 、管腔抗原）のみの単一細胞層の厚さである上皮層を持つホストの内部環境から。このように、小腸免疫系は、病原体の侵入に対して強固な応答を実装しながら、食事や共生微生物からの外来抗原があれば、最小限の、免疫応答と粘膜を入力することができ、反応性についてそのしきい値をバランスの手ごわい課題を有しており、その他の「有害な」抗原。これらの抗原に対する過剰または不適切な免疫応答は、病理学的疾患（ 例えば 、inflammaにつながることができます保守党腸疾患、I型糖尿病、多発性硬化症）と3-6を避けなければなりません。 全体的に、消化管は、すべて抗体分泌細胞7 70％以上含有し、体内で最大の免疫器官を表すと考えられています。粘膜固有層（LP）、上皮内層、およびパイエル板（PPS） - -小腸免疫系は、主に3つの区画で構成され、それぞれが、リンパ球2の独特のグループが含まれていること。 LPリンパ球（LPLs）は、主〜20％のB細胞とTCRαβ+ T細胞です。上皮内リンパ球（IELs）はTCRαβ+ T細胞よりもTCRγδ+ T細胞と非常に少数のB細胞が含まれています。そして小腸壁に埋め込まれた二次リンパ器官であるPPSは、〜80％のB細胞を含みます。これらの解剖学的領域のそれぞれはわずかに異なる機能と存在論的基盤を有しているが、彼らはああで機能します病原性の侮辱からホストを保護するためにファッションをarmonized。 さらに、微生物は、特定の微生物および特定の細胞系譜8,9の個体発生の間の同族関係の増加の認識で、腸管免疫系の開発のための重要な決定因子であることが成長の感謝があります。また、腸管免疫系の教育は、解剖学的に離れた部位（ 例えば 、関節炎、多発性硬化症、肺炎）で免疫応答に影響を与えることを考えると、それは以前に10を認識よりも、腸の免疫システムの開発は、より疾患プロセスに関連していることが明らかになってきました-12。同様にそのようなものとして、定量的に腸管免疫系を評価する上での関心は今ホスト共生相互作用を含むように宿主 - 病原体相互作用を超えて拡張しており、多くの全身性疾患の病因。 で現在の方法の変動性を考えます腸管リンパ球の分離、必要な時間のバランスを取ることはますます重要である一方で、収率、生存性、および一貫性のために最適化された方法。パーコール勾配が可変収量と生存率を13につながる、時間と労働集約的でヒューマンエラーへの潜在的になりやすいです伴うプロトコル。ここで、我々はすべての3小腸免疫コンパートメントからのリンパ球の単離および特徴付けのために最適化されたプロトコルを提供します。さらに、粘膜免疫系における微生物誘発性の変化関心の高まりを考えると、我々はこれらの変化を定量的に腸管免疫系にどのように影響するかを評価するためのマウスとの間の微生物の水平方向の伝送を可能にするために使用することができるステップが含まれます。

<table><tbody><tr><td>滅菌手袋</td><td>Kimberly-Clark</td><td>555092</td><td></td></tr><tr><td>滅菌マウスケージ</td><td>Innovive</td><td>MS2-AD</td><td>には、蓋、ケージの底、α-dri寝具が含まれています</td></tr><tr><td>メタルフィーダー</td><td>Innovive</td><td>M-FEED</td><td></td></tr><tr><td>ウォーターボトル</td><td>Innovive</td><td>M-WB-300</td><td></td></tr><tr><td>カードホルダー</td><td>Innovive</td><td>CRD-HLD-H</td><td></td></tr><tr><td>オートクレーブ可能なげっ歯類chow (NIH-31M)</td><td>Zeigler</td><td>4131207530</td><td></td></tr><tr><td>RPMI medium 1640</td><td>Gibco</td><td>11875-119</td><td></td></tr><tr><td>Dithiothreitol (DTT)</td><td>Sigma</td><td>D5545-5G</td><td></td></tr><tr><td>0.5 M EDTA (pH 8.0)</td><td>Ambion</td><td>AM9262</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td><td>GemBio</td><td>100-510</td><td></td></tr><tr><td>Dispase II</td><td>Invitrogen</td><td>17105-041</td><td>プロトコルの濃度は、1.878 U/mg</td></tr><tr><td>コラゲナーゼ、タイプ II</td> の活性レベルに基づいています。<td>Invitrogen</td><td>17101-015</td><td>プロトコルの濃度は、245 U/mg の活性レベルに基づいています</td></tr><tr><td>解剖はさみ</td><td>Roboz</td><td>RS-5882</td><td></td></tr><tr><td>給餌針 (18 G、2" 長さ)</td> <td>Roboz</td><td>FN-7905</td><td></td></tr><tr><td>10 ml シリンジ</td><td>BD</td><td>305482</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>14190-250</td><td></td></tr><tr><td>使い捨てメス (15 ブレード)</td><td>ミルテックス</td><td>4-415</td><td></td></tr><tr><td>湾曲鉗子</td><td>Roboz</td><td>RS-5211</td><td></td></tr><tr><td>ストレート鉗子</td><td>Roboz</td><td>RS-5132</td><td></td></tr><tr><td>多目的カップ、120ml</td><td>VWR</td><td>89009-662</td><td></td></tr><tr><td>攪拌子</td><td>VWR</td><td>58949-062</td><td></td></tr><tr><td>多位置攪拌板、9 ポジション</td><td>VWR</td><td>12621-048</td><td></td></tr><tr><td>ステンレス鋼円錐形ストレーナー、3インチ&nbsp;</td><td>RSVP</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1.5 ml チューブ</td><td>Eppendorf</td><td>0030 125.150</td><td></td></tr><tr><td>100 &mu;m セルストレーナー</td><td>ファルコン</td><td>08-771-19</td><td></td></tr><tr><td>40 &mu;m 細胞ストレーナー</td><td>Falcon</td><td>08-771-1</td><td></td></tr><tr><td>50 ml コニカルチューブ</td><td>Falcon</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>1 ml シリンジ</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>96 ウェルプレート、丸底</td><td>Corning</td><td>3799</td><td></td></tr><tr><td>アンチマウス CD16/32 (Fc ブロック)</td><td>Biolegend</td><td>101320</td><td></td></tr><tr><td>(オプション) 固定可能な生存率色素 eFluor 780</td><td>eBiosciences</td><td>65-0865-18</td><td></td></tr><tr><td>10% ホルマリン、中性緩衝液</td><td>Thermo Scientific</td><td>5725</td><td></td></tr></tbody></table>

マウスの小腸リンパ球の単離およびフローサイトメトリーキャラクタリゼーション

Isolation and Flow Cytometric Characterization of Murine Small Intestinal Lymphocytes

腸 - 体内のあらゆる器官の免疫細胞の最大数が含まれている - 常に外来抗原、微生物および栄養の両方にさらされています。これらの管腔の抗原は、免疫応答を形作る助け、腸内の免疫細胞の教育が全身性疾患の数のために重要であることを増加理解を考えると、腸管免疫系を特徴付ける関心が高まっています。しかし、多くの公開されたプロトコルは、困難かつ時間がかかります。我々は、迅速な再現性があり、かつ面倒なパーコール勾配を必要としない小腸粘膜固有層、上皮内層、およびパイエル板からのリンパ球の単離のためにここに簡略化されたプロトコルを提示します。プロトコルは、小腸に焦点を当てているが、それはまた、結腸の分析に適しています。さらに、我々は特定の科学的QUESに応じて追加の最適化を必要とするかもしれないいくつかの側面を強調表示しましたる。このアプローチは、その後、フローサイトメトリー分析または特徴付けの代替手段を使用することができる生存可能なリンパ球の大量の単離をもたらします。

小腸リンパ球の単一細胞懸濁液のフローサイトメトリー分析は、脾臓細胞（ 図1Aおよび図1B）のような前方類似した側方散乱特性を有する細胞の個別の集団をもたらすべきです。リンパ球は組織が ​​低い前方散乱を有し、他の上皮細胞および死細胞（ 図1C）から分離するのがより困難であるリンパ球集団を生じる、分離の初期段階の間4℃に維持されていない場合に死ぬことを開始することができます。小腸組織が ​​完全にその腸間膜脂肪を清掃されていない場合はまた、リンパ球（ 図1D）の完全な損失が事実上存在します。これらの機能は、（ すなわち 、組織が ​​ウォームアップすることができない）すぐに作業方法を説明し、細部に注意を払って（ すなわち 、腸間膜脂肪の少量でもの除去）サンプルの品質を確保する必要があります。 TypicaLLY、我々は小腸LPLs（ 図1E）のための〜80％ ​​の生存率を得ます。 <p clas...

これらの細胞がさまざまな腸および全身の疾患において重要な役割を果たすという認識が高まっているため、腸リンパ球の定量的特性評価への関心が高まっています。このプロトコルでは、その後のフローサイトメトリー特性評価のために、異なる小腸コンパートメントから単一細胞集団を分離する方法について説明します。

The intestines &#8212; which contain the largest number of immune cells of any organ in the body &#8212; are constantly exposed to foreign antigens, both ...

本手順の全体的な目的は、小腸の異なる区画から単一細胞集団を分離し、その後のフローサイトメトリー解析やその他の特性評価に利用できるようにすることです。この手法は、微生物叢が腸管免疫系の発達にどのように影響するかといった、粘膜免疫学における重要な疑問を解決するのに役立ちます。本技術の主な利点は、迅速で再現性が高く、手間のかかるPercoll密度勾配遠心法を必要としない点にあります。本手順を開始するには、マウスを背側を下にして固定し、腹部を70%エタノールで噴霧します。恥骨結合から剣状突起まで、腹側正中線に沿って皮膚、次いで腹膜筋膜を順に切開して開腹し、腹腔を露出させます。次に、幽門括約筋を切断して、小腸を胃から分離します。小腸を腹膜から慎重に摘出し、腸間膜脂肪を丁寧に取り除きます。小腸を完全に摘出するため、回盲接合部で2回目の切断を行います。細胞生存率を最大化するため、単離した小腸を10% FBS含有の4 °C RPMI培地に入れます。曲型鉗子を用いて大きな脂肪片を慎重に取り除き、その際、腸管組織自体を損傷させないよう注意してください。腸管内容物を除去するため、シリンジに取り付けた18ゲージのフィーディング針を小腸の近位端に挿入し、15〜20 mLの冷PBSで腸管内を穏やかに洗浄します。ハサミを用いて、小腸の腸間膜反対側に位置し、多葉状の白い塊として観察されるパイエル板を切り出します。その後、5% FBSを含む冷RPMI培地にそれらを移します。次に、小腸を3〜4インチのセグメントに切断します。RPMIで湿らせたペーパータオル上で各小腸セグメントを転がし、鈍いメスを用いて組織から残りの脂肪を丁寧に取り除きます。微量な脂肪でも細胞死を招くため、腸間膜脂肪を完全に除去することに細心の注意を払うことが、リンパ球の生存率を確保する上で極めて重要です。その後、曲型ピンセットで腸管セグメントに挿管し、組織の遠位端を把持して組織を裏返しにします。次に、直型ピンセットを用いて近位端から組織セグメントをゆっくりと取り出すことで、組織を反転させます。組織セグメントを、30 millilitersの抽出培地とスターバーが入ったカップに入れます。蓋をしっかりと閉め、37 degrees Celsiusで15分間撹拌します。撹拌は激しく行いますが、乱流にならないようにしてください。15分後、スチールストレーナーを使用して、組織片を白濁した上清を含む上皮層から分離します。RPMI培地の中で組織片を手動で撹拌し、残留した抽出培地を洗い流してください。その後、組織を乾いたペーパータオルの上に置き、数回裏返して、抽出培地で遊離しなかった残留粘液の除去を促進します。その後、組織片を1.5 mLチューブに入れ、600 µLの消化培地を加えます。組織がハサミに付着しなくなり、溶液が均一に見えるまで細切してください。この工程は、組織を完全に酵素消化させるために非常に重要です。組織を、破片がハサミに付着しなくなり、溶液が均質に見えるまで細断することは、細胞の収量および結果の再現性を確保する上で極めて重要です。細断した小腸を 25 milliliters の消化培地が入ったカップに加え、37 degrees Celsius で 30 分間撹拌します。消化の中盤で、セロロジカルピペットを用いてピペッティングを行い、大きな組織の塊をさらに分解させます。次に、消化管組織を100 µmのセルストレーナーでろ過し、15 mLチューブに回収します。ストレーナーを10% FBS含有RPMI培地 20 mLで洗浄します。その後、ろ過した溶液を4 °Cで10分間遠心分離します。上清を慎重にデカンテーションし、ペレットを10% FBS含有RPMI培地1 mLで再懸濁する。再懸濁した細胞を40 µmのセルストレーナーでろ過し、15 mLチューブに回収する。ストレーナーを10% FBS含有RPMI 20 mLで洗浄する。続いて、ろ過した溶液を4 °Cで10分間遠心分離します。上清を慎重に除き、ペレットを2% FBSを含む1 mLのRPMI培地で再懸濁します。この手順では、摘出したパイエル板を、25 mLの消化液と撹拌子を入れたカップに移します。蓋をしっかりと閉め、37 °Cで10分間遠心分離します。その後、消化したパイエル板を40 µmのセルストレーナーでろ過し、15 mLチューブに回収します。塊が残っている場合は、1 mLシリンジのプランジャーの平坦な端を用いて、ストレーナー越しに押し出してください。次に、10% FBSを含むRPMI培地10 mLでストレーナーを洗浄します。ろ過した溶液を4°Cで10分間遠心分離します。その後、上清を慎重に捨て、ペレットを2% FBSを含むRPMI培地1 mLで再懸濁します。小腸リンパ球の単細胞懸濁液をフローサイトメトリーで解析すると、脾細胞と同様の前方散乱光（FSC）および側方散乱光（SSC）特性を持つ独立した細胞集団が得られるはずです。分離の初期段階で組織を4°Cに維持しなかった場合、リンパ球が死滅し始め、その結果、リンパ球集団の前方散乱光が低下し、他の上皮細胞や死細胞との分離が困難になります。さらに、小腸組織から腸間膜脂肪を完全に除去しなかった場合、リンパ球がほぼ完全に消失します。通常、小腸LPリンパ球において80%の生存率が得られます。習熟すれば、4匹のマウスを処理し、4時間以内に染色用の単細胞懸濁液を準備することが可能です。この手順では、すべての腸間膜脂肪を完全に除去し、完全な消化を確実にするために組織を十分に細切することが重要です。この手順に従い、単一細胞懸濁液をフローサイトメトリー以外の目的、例えばin vitro実験、遺伝子発現解析、あるいはこれらの細胞の機能をさらに特性評価するための養子移入などに利用することが可能です。この手法の開発により、粘膜免疫学の研究者がマウスの腸管免疫系の発生および機能的意義を探索する道が開かれました。このビデオを視聴することで、腸間膜脂肪の除去、上皮層の抽出、およびコラゲナーゼによる組織の消化を通じて、小腸の異なる区画から単一細胞懸濁液を分離する方法について十分に理解できるはずです。

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

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