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DOI: 10.3791/54218-v
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This article presents a method to visualize mitosis in live zebrafish embryos using fluorescently labeled chromatin and cell-membrane proteins. The technique allows researchers to monitor chromosome segregation fidelity and investigate the implications of mitotic defects on development and tumor formation.
有糸分裂はすべての生物にとって重要であり、欠陥はしばしば癌や発達障害を引き起こします。このイメージングプロトコルとゼブラフィッシュをモデルシステムとして使用することで、研究者は生きた脊椎動物の有糸分裂と、有糸分裂プロセスに欠陥がある場合に生じる多数の欠陥を視覚化することができます。
この手順の全体的な目標は、蛍光標識されたクロマチンと、高解像度の共焦点顕微鏡を使用して捕捉される細胞膜タンパク質を使用して、生きたゼブラフィッシュの胚における有糸分裂中の染色体分配の忠実度を監視することです。この方法は、有糸分裂障害がどのようにして発生障害を引き起こしたり、生きた脊椎動物に腫瘍が形成されたりするのかなど、有糸分裂分野の重要な質問に答えるのに役立ちます。この手法の主な利点は、生きた脊椎動物生物の有糸分裂を観察しているため、物理学的に関連性のあるデータを収集できることです。
成魚を繁殖させ、卵にH2Aを注入した後。F/Z-EGFP および/または pCS2 mCherry-CAAX RNA をイメージングの約 2 時間前に、蛍光解剖顕微鏡を使用して GFP 陽性胚を同定します。明るい緑色のGFP発現胚を、E3ブルー培地を用いた新しい100×15mmのシャーレに移します。
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