Name: マクロファージコロニー刺激因子分化したヒト単球由来マクロファージの文化 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-06-30T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 46 s
Description: 学ぶM-CSF誘導分化によるヒト単球由来マクロファージの培養法。リーカファレーシスと遠心エルトリエーションで単球を精製し、一括分化で均一なマクロファージを得ます。ドナー依存性を低減し、実験の再現性を向上させます。

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国立衛生研究所臨床センター輸血医学部門は、溶出物を用いた単球を提供しました。この研究は、国立衛生研究所の国立心臓・肺・血液研究所の学内研究プログラムの支援を受けました。

白血球搬出は、保健機関審査委員会の国立研究所によって承認されたヒト被験体の研究プロトコルの下で行いました。 1.単離と単球の凍結保存<ol><li>人間のドナーの白血球搬出によって単核細胞を得る、および参考文献7,8に記載されているように、単核細胞の連続向流遠心水簸によって単球を豊かにします。製造業者が指定する水簸バッファに- （90％単球約80）約100×10 6簸細胞を得ます。血球計数器を用いて細胞を数えます。 </li><li> 300×gで15ミリリットルポリプロピレンチューブで遠心分離した単球 室温で5分間。 </li><li>上清を除去し、穏やかに90％FBS / 10％ジメチルスルホキシド、50×10 6細胞/ mlの最終濃度を達成するようにジメチルスルホキシド、続いFBSで細胞を再懸濁します。 </li><li>細胞懸濁液tの各ミリリットルを加えます個々のクライオバイアルO。 </li><li>セル冷凍コンテナ内のクライオバイアルを置き、に転送-80℃のフリーザー24時間長期保存のために液体窒素クライオバイアル貯蔵タンクに移す前に。 </li></ol>単球からマクロファージへの2分化<ol><li>すぐに37℃の水浴に移し、細胞懸濁液は、約70％を解凍したときにすぐに除去することによって細胞のクライ​​オバイアルを解凍します。 </li><li>すぐに室温で完全に融解時、37の50ミリリットルに1ミリリットルをクライオバイアル内容を転送°Cは、2 mMのL-グルタミン、50 ngの/ mlのM-CSF、25 ngの/ mlのロズウェルパーク記念研究所（RPMI）1640培地を温めインターロイキン10（IL-10）、及び10％FBS（完全培地）。 </li><li>移送2 75cm 2のプラスチック製の細胞培養フラスコのそれぞれへの単球の懸濁液を25ml。 </li><li> 48時間、5％CO 2/95％空気で37℃で細胞培養インキュベーター中で培養物をインキュベートします。 </li><li>立方をすすぎますRPMI 1640培地を穏やかに任意の緩く付着した細胞を取り除く回避するために、培養培地を除去し、（37℃に予め温めておいた）mlの10でltures 3回。 </li><li>単球が分化し、コンフルエントになるまで十分に増殖するまで2日毎に培地を交換し、新鮮な完全培地を追加し、すすぎに続いて。これは文化の約1週間が必要です。 </li></ol> 3.収穫マクロファージ実験を開始します<ol><li> 10mlのフラスコ中で3回分化マクロファージリンス予め温めた37℃の0.25％トリプシン-エチレンジアミン四酢酸（EDTA）溶液10 mlで添加する前に、Ca 2+及びMg 2+ を含まない37℃のダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水を予熱しました。 </li><li>マクロファージの約90％は四捨五入と切り離されている必要があり、その時点で15分 - 10のための細胞培養インキュベーターにフラスコを置きます。フラスコの顕微鏡検査することによってこれを確認してください。 </li><li> 10％FBSを含むRMPI 1640培地10 mlのSへの追加トップトリプシン処理。 </li><li> 5分間の遠心分離器、50ミリリットルのポリプロピレンチューブにフラスコから300×gでのマクロファージ細胞懸濁液を移し、上清を捨てます。 </li><li>静かに完全培地の1ミリリットル中にマクロファージを再懸濁します。 </li><li> 10μlのトリパンブルー溶液を用いてマクロファージ細胞懸濁液10μlを混合し、血球計数器を使用して、マクロファージ細胞数および生存率（典型的には&gt; 95％）を決定します。 </li><li>細胞数に基づいて、（通常は約15から18×10 5マクロファージ）、目的の播種細胞密度を達成するために追加の完全培地を追加します。注：12ウェルプレートのウェル当たり1.5ミリリットル培地中で1×10 5マクロファージを、近コンフルエント文化を生成します。 </li><li>播種後、細胞の付着を可能にするために、5％CO 2/95％空気で37℃で細胞培養インキュベーターで一晩マクロファージインキュベートします。次に、目的の実験を開始します。 </li></ol>

<ol><li>Dey, A., Allen, J., Hankey-Giblin, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ontogeny+and+polarization+of+macrophages+in+inflammation%3A+blood+monocytes+versus+tissue+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Ontogeny and polarization of macrophages in inflammation: blood monocytes versus tissue macrophages.</a> Front. Immunol. 5, 683(2014).</li>
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<li>Ong, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+cholesterol-rich+microdomains+generated+by+human+macrophages+and+their+potential+function+in+reverse+cholesterol+transport%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Extracellular cholesterol-rich microdomains generated by human macrophages and their potential function in reverse cholesterol transport.</a> J. Lipid Res. 51, 2303-2313 (2010).</li>
<li>Hashimoto, S., Yamada, M., Motoyoshi, K., Akagawa, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+macrophage+colony-stimulating+factor-induced+growth+and+differentiation+of+human+monocytes+by+interleukin-10%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Enhancement of macrophage colony-stimulating factor-induced growth and differentiation of human monocytes by interleukin-10.</a> Blood. 89, 315-321 (1997).</li>
<li>Hashimoto, S. I., Komuro, I., Yamada, M., Akagawa, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-10+inhibits+granulocyte-macrophage+colony-stimulating+factor-dependent+human+monocyte+survival+at+the+early+stage+of+the+culture+and+inhibits+the+generation+of+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">IL-10 inhibits granulocyte-macrophage colony-stimulating factor-dependent human monocyte survival at the early stage of the culture and inhibits the generation of macrophages.</a> J. Immunol. 167, 3619-3625 (2001).</li>
<li>Lund, P. K., Joo, G. B., Westvik, A. B., Ovstebo, R., Kierulf, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+monocytes+from+whole+blood+by+density+gradient+centrifugation+and+counter-current+elutriation+followed+by+cryopreservation%3A+six+years%27+experience%5BTitle%5D)+AND+%22Scand.+J.+Clin.+Lab.+Invest%22%5BJournal%5D)">Isolation of monocytes from whole blood by density gradient centrifugation and counter-current elutriation followed by cryopreservation: six years' experience.</a> Scand. J. Clin. Lab. Invest. 60, 357-365 (2000).</li>
<li>Weiner, R. S., Normann, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+integrity+of+cryopreserved+human+monocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Natl.+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Functional integrity of cryopreserved human monocytes.</a> J. Natl. Cancer Inst. 66, 255-260 (1981).</li>
<li>Hansen, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retention+of+phagocytic+functions+in+cryopreserved+human+monocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Leukoc.+Biol%22%5BJournal%5D)">Retention of phagocytic functions in cryopreserved human monocytes.</a> J. Leukoc. Biol. 57, 235-241 (1995).</li>
<li>Seager Danciger, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+large+scale+isolation%2C+culture+and+cryopreservation+of+human+monocytes+suitable+for+chemotaxis%2C+cellular+adhesion+assays%2C+macrophage+and+dendritic+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Method for large scale isolation, culture and cryopreservation of human monocytes suitable for chemotaxis, cellular adhesion assays, macrophage and dendritic cell differentiation.</a> J. Immunol. Methods. 288, 123-134 (2004).</li>
<li>Jin, X., Xu, Q., Champion, K., Kruth, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endotoxin+contamination+of+apolipoprotein+A-I%3A+effect+on+macrophage+proliferation--a+cautionary+tale%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Endotoxin contamination of apolipoprotein A-I: effect on macrophage proliferation--a cautionary tale.</a> Atherosclerosis. 240, 121-124 (2015).</li>
</ol>

著者らは開示するものは何もない。

定義されたマクロファージの種類を生成することは、マクロファージの生物学を研究する研究者によって得られた相反する結果のいくつかを明確にすることができます。初代ヒトマクロファージを生成するために、さまざまな培養条件および分化因子の使用は、非常に異なるマクロファージタイプに研究者によって理解されなくてもよいことを導くことができます。例えば、マクロファージは、時には何血清、単独でヒト血清、FBS単独でM-CSF、またはM-CSFまたはGM-CSFを含むFBSを補充したヒト血清を使用していないヒト単球から生成されます。以前、我々はまた、観察しているように報告したように、単球が追加された分化せずに、無血清またはFBSで一週間培養した要因は、生存3残りません。上記のように、単球を単独で、ヒト血清とともに培養またはFBSを加えたGM-CSFを用いて分化した単球の「目玉焼き」形態の特性を示すマクロファージを生成するM-CSFを補充しました。このように、ヒト血清M-の存在下で、単球は、M-CSFと区別されているにもかかわらず、より細長い形態を示すCSF型マクロファージが得られません。 <p class="jove_conten...

培養マクロファージの研究は、アテローム性動脈硬化性プラークで発生するような炎症におけるこれらの細胞の機能を理解するための有用なモデルです。マクロファージが関与するヒトの疾患に研究の焦点が当てられている場合、種の違いを避けるためには、ヒト以外のマクロファージではなく、ヒトの一次マクロファージを研究することが有用です。また、細胞形質転換の影響は、マクロファージ細胞株ではなく初代マクロファージを使用することで回避できます。この目的のために、ヒト血液から単離された単球から分化したマクロファージは、一次ヒトマクロファージを得る手段として役立つ。
組織マクロファージは、組織内に常在するか、または組織に移動してマクロファージ1に分化する単球に由来するかもしれません。ヒト単球由来マクロファージには、形態だけでなく遺伝子発現や細胞機能も異なる2種類のマクロファージが定義されている2。これらの2つのタイプは、M-CSF+ウシ胎児血清(FBS)の存在下でマクロファージに分化した単球と、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(GM-CSF)+FBS2-6の存在下でマクロファージに分化した単球から得られます。我々の経験(未発表の観察)では、分化培地にM-CSFまたはGM-CSFが含まれているかどうかに関係なく、FBSではなくヒト血清を使用するとGM-CSFタイプが生成されます。M-CSF型マクロファージは、GM-CSF型マクロファージよりも細長い傾向があり、目玉焼きに似た形態をしています。研究者は、ヒト M-CSF および GM-CSF 単球由来マクロファージは、いわゆる M1 および M2 マウス骨髄由来マクロファージ 6 と同じではないことを認識する必要があります。
ヒト単球由来のM-CSF分化マクロファージを用いた研究では、実験を開始するための単球の利用可能性と、単球がマクロファージに分化する際にマクロファージの得られる細胞密度の変動に関連する困難を経験しました。これらの問題を克服するために、単球を必要になるまで凍結し、単球をバルクで分化させてマクロファージにし、それを培養フラスコから取り出して所望の細胞密度でプレーティングすることで、実験ごとにより均一な培養を得るというプロトコルを開発しました。

<table><tbody><tr><td>Cellbind 12ウェル培養プレート</td><td>Corning</td><td>3336</td><td></td></tr><tr><td>CELLSTAR、T-75フラスコ、組織培養処理</td><td>Greiner Bio-One North America</td><td>658157</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 培地</td><td>Cellgro Mediatech</td><td>15-040-CM</td><td>37°C;C</td></tr><tr><td>L-グルタミン</td><td>セルグロ メディアテック</td><td>25-005-CI</td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児血清</td><td>ギブコ</td><td>16000-036</td><td></td></tr><tr><td>M-CSF</td><td>ペプロテック</td><td>300-25</td><td></td></tr><tr><td>GM-CSF</td><td>ペプロテック</td><td>300-03</td><td></td></tr><tr><td>IL-10&nbsp;</td><td>PeproTech</td><td>200-10</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>クライオバイアル&nbsp;</td><td>サーモサイエンティフィック&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ca2+およびMg2+&nbsp;</td>375418<td>コーニングセルグロ</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>0.25%トリプシン-EDTA&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>50 ml ポリプロピレン円錐管</td><td>Falcon</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue</td><td>Lonza</td><td>17-942E</td><td></td></tr><tr><td>Neubauer-improved bright light hemocytometer</td><td>Paul Marienfeld GmbH & Co. KG</td><td>610031</td><td>http://www.marienfeld-superior.com/index.php/counting-chambers/articles/counting-chambers.html</td></tr><tr><td>CoolCell LX cell freezingコンテナ</td><td>BioCision</td><td>BCS-405</td><td>他の凍結容器も&nbsp;このステップに適切であるべきです</td></tr><tr><td>液体窒素貯蔵システム、CryoPlus 1</td><td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td>7400</td><td>任意の液体窒素タンクで十分であるべきです</td></tr></tbody></table>

マクロファージコロニー刺激因子分化したヒト単球由来マクロファージの文化

Culture of Macrophage Colony-stimulating Factor Differentiated Human Monocyte-derived Macrophages

マクロファージコロニー刺激因子（M-CSF)分化ヒト単球由来マクロファージの細胞培養のためのプロトコールが提示されます。実験を開始するために、新鮮または凍結した単球をフラスコでM-CSFとともに1週間培養し、マクロファージへの分化を誘導します。その後、マクロファージを回収し、実験に必要な細胞密度の培養ウェルに播種することができます。実験のためにマクロファージ培養を開始するために、定義された数の単球ではなく、定義された数のマクロファージを使用すると、目的の細胞密度をより一貫して達成できるマクロファージ培養が得られます。凍結保存された単球を使用すると、ドナーの利用可能性への依存が減り、より均質なマクロファージ培養物が作出されます。

トリパンブルー染色9で決定されるような新鮮または凍結保存した単球の生存率は95％以上であった。 図 1および図2は 、それぞれ、より低いおよびより高い倍率でマクロファージへ新鮮で凍結保存した（ すなわち 、冷凍）単球分化の進行状況を比較します。凍結保存した単球と比較して、新鮮なが広がっていないが、丸みを帯びたまま、単球を区別するの亜集団を示していることに注意してください。フェーズ・ルーセント空胞は、両方の条件で単球由来のマクロファージで起こります。以前に10,11を説明したように、これらの小胞は、M-CSF型マクロファージのマクロピノソーム特性を表します。 彼らは、単球から分化されたフラスコからの彼らの収穫後の凍結保存マクロファージは（成功したマクロファージ培養物を生成しませんでした<str...

マクロファージコロニー刺激因子（M-CSF)分化ヒト単球由来マクロファージの細胞培養のためのプロトコールが提示されます。このプロトコルは、単球の凍結保存とマクロファージへのバルク分化を組み合わせて利用します。その後、回収したマクロファージを、実験に必要な細胞密度の培養ウェルに播種することができます。

A protocol is presented for cell culture of macrophage colony-stimulating factor (M-CSF) differentiated human monocyte-derived macrophages. For initiation ...

この手順の全体的な目的は、単球の可用性を向上させ、MCSF誘導によるヒト血液単球からマクロファージへの分化過程で得られる細胞密度のばらつきを最小限に抑えることです。この手法は、ヒトマクロファージの生物学に関する重要な疑問を解決するのに役立ちます。この戦略の主な利点は、ドナーの可用性への依存度を下げつつ、ヒト単球由来マクロファージの培養系を容易に構築できることです。さらに、目的のマクロファージ細胞密度および均一な培養を安定して得ることができます。この手順を開始するには、まず白血球アフェレーシスによりヒトドナーから単核細胞を回収し、次に単核細胞の連続向流遠心溶出法によって単球を濃縮します。その後、血球計数計を用いて細胞数をカウントします。次に、単球を15 mLのポリプロピレンチューブに入れ、室温で5分間遠心分離します。その後、上清を除去し、FBSおよびDimethyl Sulfoxideを用いて細胞を緩やかに再懸濁し、最終濃度を90% FBS、10% Dimethyl Sulfoxide、50 × 10⁶ cells/mLにします。その後、細胞懸濁液1 mLを個別のクライオバイアルに分注します。クライオバイアルを細胞凍結容器に入れ、-80°Cのフリーザーで24時間保管します。24時間後、容器を長期保存用の液体窒素保存タンクに移します。このステップでは、クライオバイアルに入った細胞を37°Cのウォーターバスに短時間浸し、解凍します。細胞懸濁液が約70%解凍された時点で、直ちに恒温槽から取り出し、室温に置きます。細胞懸濁液が完全に解凍された後、クライオバイアルの内容物を1 mL、37 °Cに温めた2 mM L-glutamine、50 ng/mL M-CSF、25 ng/mL IL-10、および10% FBSを含む50 mLのRPMI 1640培地に移します。その後、単球懸濁液25 mLを2本の75 cm²プラスチック細胞培養フラスコに分注します。培養物を37 °Cで48時間インキュベートします。48時間が経過するまで培地を交換しないでください。さもなければ、細胞が十分に接着せず、洗浄時に剥がれてしまいます。48時間後、あらかじめ加温しておいた10 mLのRPMI 1640培地で培養物を3回洗浄します。緩く付着している細胞を剥がさないよう、培養液をゆっくりと除去します。その後、完全培地を加え、細胞を1週間培養します。単球が効率的に分化・増殖し、コンフルエントになるまで、2日ごとに培地を交換してください。次に、フラスコ内の分化マクロファージを、カルシウムおよびマグネシウム不含の37 °C DPBS 10 mLで3回洗浄します。続いて、37 °Cの0.25% Trypsin EDTA溶液を10 mL加えます。その後、フラスコを細胞培養インキュベーターに10〜15分間置きます。その後、マクロファージの約90%が円形になり、剥離しているはずです。次に、トリプシン処理を停止させるため、10% FBSを含むRPMI 1640培地を10 milliliters加えます。必要に応じて、セルリフターを使用して細胞を完全に回収してください。この手順において、多くのマクロファージが接着したまま残る場合があります。これらのマクロファージは、トリプシン処理後、セルリフターでフラスコの表面をなぞることで除去できます。その後、フラスコ内のマクロファージ細胞懸濁液を15 milliliterのポリプロピレンチューブに移します。室温で5分間遠心分離し、上清を捨てます。次に、マクロファージを1 mLの完全培地で穏やかに再懸濁します。細胞数に基づき、目的の播種細胞密度になるように完全培地を追加します。次に、12ウェルプレートの各ウェルに1.5 mLの培地と共にマクロファージを播種します。通常、1ウェルあたり1.5 mLの培地に1×10⁵個の細胞を播種することで、ほぼコンフルエントな培養状態になります。播種後、細胞を接着させるため、マクロファージを37 °Cで一晩インキュベートしてから実験に使用します。この図は、MCSF誘導により単球からマクロファージへの分化過程にある、凍結保存された新鮮な単球の位相差顕微鏡像（低倍率）を示しています。単球の画像は、フラスコでの培養3日目と7日目、および回収して12ウェル培養プレートに再播種した1日後の8日目に撮影されました。ここでは、マクロファージの作製に使用した新鮮な単球と凍結保存された単球の比較（高倍率）を示しています。位相差顕微鏡で観察される緩んだ液胞はマクロピノソームです。このビデオを視聴することで、ヒト単球をMCSFを用いて凍結保存し、後にマクロファージへと分化させる方法について十分に理解することができます。その後、マクロファージを実験に必要な細胞密度で培養することが可能です。

culture-macrophage-colony-stimulating-factor-differentiated-human

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

このビデオは、初代単球のマクロファージへのプライミングを示しています。初代ヒト単球は、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(GM-CSF)を使用してM1様炎症誘発性表現型に、またはマクロファージコロニー刺激因子(M-CSF)を使用してM2様抗炎症表現型に単離および分化することができます。...

初代単球のin vitro培養とマクロファージへの分化

このビデオでは、末梢血由来の単球をM1またはM2マクロファージに分化および分極させる手順を示します。顆粒球-マクロファージコロニー刺激因子、リポ多糖、およびインターフェロン-γとのインキュベーションは炎症誘発性M1マクロファージを産生し、マクロファージコロニー刺激因子およびインターロイキン-4とのインキュベーションは抗炎症性M2マクロファージ産生を誘導します。...

単球由来細胞のマクロファージ様細胞への分化と分極

単球由来のマクロファージは自然免疫系の重要な細胞である。ここでは、使用して簡単に説明する...

不定冠詞<em&gt;インビトロ</emヒトマクロファージの分化と偏光の不均一性を研究するために&gt;モデル

私たちは、ヒトマクロファージの生成のための簡単​​かつ効率的なプロトコルを提示する。バフィーコートは、二重密度勾配遠心分離によって処理され、単離された単球は、次いで、テフロンコーティングした細胞培養バッグ中でマクロファージに分化される。これは、マクロファージ収量を最大化し、その後の実験のために細胞の回収を容易にします。...

ダブル勾配遠心、テフロンコーティングされた細胞培養バッグ中のマクロファージへの分化によるヒト単球の単離

顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(GM-CSF)で培養した骨髄細胞は、マクロファージと樹状細胞(DC)を含む不均一な培養を生成します。この方法は、GM-CSF培養中のマクロファージとDCを区別するために、MHCIIとHA(HA)結合を使用することを強調している。この培養物のマクロファージは、肺胞マクロファージと多くの類似点があります。...

マウスの骨髄からGM-CSF由来肺胞のようなマクロファージや樹状細胞の生成および同定

ここでは、HIVに感染した個体および健全なコントロールからヒト一次単球を分離、培養、トランスフェクション、および区別するための最適化されたプロトコルです。...

原発性ヒト単球の単離、トランスフェクション、培養

ここで提示するプロトコルは、顕微鏡法および蛍光染色を用いて生細胞培養におけるマクロファージ細胞外トラップ(MET)産生を検出するプロトコルである。このプロトコルは、免疫蛍光染色によって特異的なMETタンパク質マーカーを調べるためにさらに拡張することができる。...

分化ヒト単球由来マクロファージにおける細胞外トラップ放出のIn Vitro刺激と可視化

M2様腫瘍関連マクロファージ(TAM)は、がんにおける腫瘍の進行および予後不良に関連している。このプロトコルは、14日以内にTHP-1単球様細胞をM2様マクロファージに再現的に分化し、偏光するための詳細なガイドとして機能します。このモデルは、腫瘍微小環境内におけるTAMの抗炎症効果を調べる基礎となる。...

ヒト単球様THP-1白血病細胞株を用いたM2様表現型へのマクロファージ分化と分極化

本プロトコールは、マウスからの骨髄由来マクロファージの単離および培養について記載している。...

マウス由来骨髄由来マクロファージの単離と培養

単球とマクロファージは、健康と病気に不可欠な非常に可塑的で再プログラム可能な免疫細胞です。彼らは、特定の分化プログラムと表現型を採用することにより、幅広い刺激を感知し、反応します。私たちは、マクロファージの分極とリプログラミングを研究するためのin-vitroモデルを標準化し、研究に貴重なツールを提供しています。...

In-vitroアッセイのためのヒト単球由来マクロファージのリプログラミングモデル

学ぶM-CSF誘導分化によるヒト単球由来マクロファージの培養法。リーカファレーシスと遠心エルトリエーションで単球を精製し、一括分化で均一なマクロファージを得ます。ドナー依存性を低減し、実験の再現性を向上させます。

マクロファージコロニー刺激因子分化したヒト単球由来マクロファージの文化

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