<em>In Vitro</em> Transcription Assays and Their Application in Drug Discovery

Xiao Yang; Cong Ma

doi:10.3791/54256

JoVE Journal
Genetics

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JoVE Journal Genetics

In Vitro Transcription Assays and Their Application in Drug Discovery

in vitro転写アッセイおよび創薬への応用

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09:28 min

September 20, 2016

DOI: 10.3791/54256-v

Xiao Yang¹, Cong Ma^1,2

¹School of Environmental and Life Sciences,University of Newcastle, ²Department of Applied Biology and Chemical Technology, The State Key Laboratory of Chirosciences,The Hong Kong Polytechnic University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

この原稿では、細菌の転写を標的とする抗菌剤の転写と阻害活性を機能的に調べるためのプロトコールについて記載します。

このin vitro転写アッセイの全体的な目標は、転写因子、低分子、および転写阻害剤の効果をテストするためのプラットフォームを提供することにより、転写中の複雑な制御ステップを研究することです。この方法は、転写制御に関連する正確なメカニズム、未知のメカニズムを持つ転写因子の機能、正常な転写阻害剤の効果など、分子生物学における重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、単一のRNAシーケンシングゲルからタイムラインに沿ってすべての転写産物を直接視覚化できることです。

この手順は、シーケンシングゲル装置からプレートを70%エタノールと精製水で2回洗浄することから始めます。櫛と2つのスペーサーでセルを組み立てます。マグネチックスターラーを使用して、33.6グラムの尿素を22ミリリットルの水と16.4ミリリットルの5倍のTBEバッファーに溶解します。

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