2017年1月30日
我々は、迅速な分子ベースのインフルエンザAおよびBアッセイを説明します。インフルエンザアッセイは分子ビーコンプローブで標的検出したインフルエンザ特異的プライマーを用いて等温増幅を用いることにより、15分以内に各ターゲットを検出します。インフルエンザAおよびBアッセイは、ユーザーフレンドリーで、実行するために最小限のハンズオン時間を必要としました。
このアッセイの全体的な目標は、呼吸器系を呈する患者のインフルエンザウイルス感染を診断または除外することです。この方法は、呼吸器感染症の主な原因の診断など、臨床診断分野における重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、任命されたケアの現場で使用できる迅速な方法であることです。
手順を実演するのは、当研究室の技術者であるSam Kaplanです。鼻腔スワブサンプルを採取するには、スワブを最も目立つ排液がある鼻孔または最も混雑している鼻孔に挿入します。穏やかに回転させて、抵抗が満たされるまで綿棒を鼻孔に押し込み、鼻壁に対して数回回転させてから、ゆっくりと鼻孔から取り出します。
その後、綿棒を保管し、3ミリリットルのウイルス輸送培地を含むバイアルに入れて輸送します。次に、テストする前に、サンプルと青色のサンプルレシーバーを室温に戻します。オレンジ色のテストベースは、室温まで温めることなくテストできます。
使用直前まで、すべての試験片をホイルに入れたままにしておきます。次に、機器の電源を入れ、ユーザーIDを入力してを押してテストプロセスを開始し、機器画面の[テストの実行]をタッチ OK.To。次に、オンスクリーンキーボードまたはバーコードスキャナーを使用して患者IDを入力し、[OK]を押します。その後、蓋を開けて、オレンジ色のテストベースチューブをオレンジ色のテストベースホルダーに挿入します。
正しいテストが画面に表示されていることを確認し、[OK]を押します。次に、青いサンプルレシーバーを青いサンプルレシーバーホルダーに挿入し、サンプルレシーバーがウォームアップするのを待ちます。その後、サンプルレシーバーの端に2本の指を置いて、ホイルシールをはがし、所定の位置に留まるようにします。次に、検査する患者の綿棒をサンプルレシーバーに入れます。
綿棒と液体を10秒間激しく混合し、綿棒のヘッドをサンプルレシーバーの側面に押し付けて、試料を綿棒から取り除きます。試験用スワブをウイルス輸送培地に保管している場合は、ウイルス輸送培地を10秒間ボルテックスし、200マイクロリットルをサンプルレシーバーに加えます。次に、[OK]を押して続行します。
その後、白いトランスファーカートリッジを青いサンプルレシーバーに押し込みます。オレンジ色のインジケーターが上がるまで、サンプルレシーバーを押し続けます。次に、トランスファーカートリッジを持ち上げてテストベースに接続します。
オレンジ色のインジケーターは、カートリッジの転送が正しく取り付けられると下降します。蓋を閉め、結果画面が表示されるまで開かないでください。次に、ホーム画面の[QCテストの実行]をタッチします。
実行するQCテストを選択します。次に、OKをクリックし、画面の指示に従ってテストを完了して、テストタイプがテスト対象のQCサンプルと一致することを確認します。テストの実行が完了したら、インフルエンザ A、B、または不明なサブタイプの存在を解釈して画面に表示されたテストの結果を観察し、無効な結果に対してテストを繰り返します。
その後、装置と周囲のベンチエリアを70%エタノールまたは10%漂白剤溶液で清掃します。この図は、各インフルエンザサブタイプの陽性サンプルと陰性サンプルについてRPアッセイによって決定された平均CT値を示しています。この結果は、インフルエンザAおよびBアッセイによって決定された偽陰性サンプルが、ウイルス量サンプルが少ないことによるものであることを示しています。
このテクニックを習得すると、適切に実行すれば15分で完了します。この手順を試行する際は、アッセイを最初にセットアップする際に、トランスファーカートリッジをカチッと音がするまでテストベースに接続する必要があることを覚えておくことが重要です。この2つのピースが適切に固定されていないと、実行は失敗し、最初から繰り返す必要があります。
このビデオを見れば、インフルエンザの診断アッセイの実施方法について十分に理解できるはずです。インフルエンザに感染した可能性のある患者サンプルを扱うことは非常に危険であり、この手順を実行する際には、適切な個人用保護具を着用するなどの予防措置を常に講じる必要があることを忘れないでください。
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本記事では、インフルエンザA型およびB型ウイルスを検出するための迅速な分子ベースのアッセイについて解説します。このアッセイは等温増幅法と分子ビーコンプローブを利用しており、わずか15分で結果を得ることが可能です。
インフルエンザウイルスの迅速な分子検出は、呼吸器疾患管理における早期の診断上の意思決定を支援します。このアッセイは15分というターンアラウンドタイムで完了するため、ポイントオブケア(POC)設定でのタイムリーなトリアージが可能となり、診断の遅延を短縮します。この機能は、信頼性の高い感染ステータスのデータを提供することで、初期段階の抗ウイルス薬開発のリスク軽減に寄与します。
このアッセイは、リード最適化に進む前に迅速な感染状態の確認が必要とされる、初期探索ワークフローに適しています。