Name: チョウザメから耳石を削除する別の方法 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-06-27T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 7 s
Description: 学ぶチョウザメの耳石摘出法。厚い頭蓋骨と脆弱な耳石を持つ魚から、耳石と周囲構造を損傷させずに摘出する代替技術です。絶滅危惧種の年齢・成長研究や生息地関連の微量化学分析に有用です。

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セントレジスモホーク環境課、Welaka国立養殖、米国魚類野生生物局研究ユニット、サザンイリノイ大学、米国魚類野生生物局東北水産センター、スターリングキャビア、カリフォルニア大学デ​​ービス校、ガリソンダム国立魚類に感謝孵化場、ベアーズブラフ国立養殖、および米国魚類野生生物局（パナマシティ）水産資源のOfficeこのプロジェクトのチョウザメを供給彼らの助けのために。 この記事では、USGSグレイトレイクスサイエンスセンターの貢献2013年です。

重要な注意：これにより、米国でチョウザメのすべての種の保護状況には、魚を取得し、処理するための許可証は、従来の実験室手順に得られました。すべての標本は、自然の原因による死後を投稿孵化場源から取得し、標準的な手順を以下に処分されました。 1.試料の調製<ol><li>任意の切開は、その側にチョウザメの死体を置き、最寄りの1ミリメートルの尾の先端に鼻から全体の長さを測定するための測定テープを使用する前に。（図1A） </li><li>最寄りの1グラムに風袋を計った規模でチョウザメの死体を計量。任意の外部タグやマークやレコードの死体を評価します。 </li></ol> 2.耳石の抽出<ol><li>体（図1B）からヘッドを分離するために体を介して頭蓋底と第一背甲との間に大きなフィレットナイフで縦切開を行います。頭を除去した後、TUヘッドRNので、口が（図1C）上を向いています。 </li><li>頭蓋骨（図1D）の腹側に沿って切断するためにフィレットナイフを使用して、口やえらの軟部組織を削除します。完全にヘッド（図1E）を二等分する頭蓋骨のベースに鼻の先端からの電気骨鋸との切開を行います。脳の空洞（図2A）を露出させるために手で二つの部分を分離してください。 </li><li>削除して、脳の空洞（図2B）内の三半規管を表示するには、鉗子で脳物質（レッドボックス左）（レッドボックス右）を捨てます。 </li><li>鉗子（図2C）で脳の空洞から三半規管の軟骨を取り除きます。慎重にピンセットの先端で半規管軟骨を穿刺し、耳石（図2D）を削除。半規管軟骨から鉗子で耳石（軟骨内部のハード骨構造）を取り外します（図2E） </stro&gt; NG。 </li><li>頭蓋骨の他の半分から耳石を除去するために、2.4 - 繰り返して、2.3を繰り返します。 </li><li>任意の軟骨を除去するために、5秒間92％エタノールで耳石を浸し。 24時間乾燥させるために開いた25ミリリットルのシンチレーションバイアルに耳石を置きます。 </li></ol>

<ol><li>Auer, N. A. Conservation. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAuer%2C+NA+%22Sturgeons+and+Paddlefish+of+North+America%22">Sturgeons and Paddlefish of North America</a>. LeBreton, G. T. O., Beamish, F. W. H., McKinley, R. S. 27, Kluwer Academic Publishers. 252-276 (2004).</li>
<li>Sturgeon Specialists Group, sturgeon conservation. IUCN (International Union for the Conservation of Nature). , Source: 
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<li>Campana, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accuracy%2C+precision+and+quality+control+in+age+determination%2C+including+a+review+of+the+use+and+abuse+of+age+validation+methods%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Fish+Biology%22%5BJournal%5D)">Accuracy, precision and quality control in age determination, including a review of the use and abuse of age validation methods).</a> Journal of Fish Biology. 59, 197-242 (2001).</li>
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<li>Baremore, I. E., Rosati, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+validated%2C+minimally+deleterious+method+for+ageing+sturgeon%5BTitle%5D)+AND+%22Fishery+Bulletin%22%5BJournal%5D)">A validated, minimally deleterious method for ageing sturgeon.</a> Fishery Bulletin. 112, 274-282 (2014).</li>
<li>Stevensen, J. T., Secor, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age+determination+and+growth+of+Hudson+River+Atlantic+sturgeon%2C+Acipenser+oxyrhynchus%5BTitle%5D)+AND+%22Fishery+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Age determination and growth of Hudson River Atlantic sturgeon, Acipenser oxyrhynchus.</a> Fishery Bulletin. 97, 153-166 (1999).</li>
<li>Brennan, J. S., Cailliet, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+age-determination+techniques+for+white+sturgeon+in+California%5BTitle%5D)+AND+%22Transactions+of+the+American+Fishery+Society%22%5BJournal%5D)">Comparative age-determination techniques for white sturgeon in California.</a> Transactions of the American Fishery Society. 118, 296-310 (1989).</li>
<li>Rossiter, A., Noakes, D. L. G., Beamish, F. W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+age+estimation+for+the+lake+sturgeon%5BTitle%5D)+AND+%22Transactions+of+the+American+Fisheries+Society%22%5BJournal%5D)">Validation of age estimation for the lake sturgeon.</a> Transactions of the American Fisheries Society. 124, 777-781 (1995).</li>
<li>Chalupnicki, M. A., Dittman, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((North+American+Sturgeon+Otolith+Morphology%5BTitle%5D)+AND+%22Copeia%22%5BJournal%5D)">North American Sturgeon Otolith Morphology.</a> Copeia. , 260-266 (2016).</li>
<li>Secor, D. H., Dean, J. M., Laban, E. H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSecor%2C+DH+%22Manual+for+otolith+removal+and+preparation+for+microstructural+examination%22">Manual for otolith removal and preparation for microstructural examination</a>. , Barach Press. Columbia, South Carolina. (1991).</li>
</ol>

商号、製品名、または会社名の使用は説明のみを目的としており、米国政府による承認を意味するものではありません。

チョウザメの死骸から耳石を抽出する別の方法の概要については詳述されています。特別な注意が解剖中に耳石に害を確保しないように均等に頭蓋骨を二分するために、頭蓋骨の正中線上に横切開の配置に必要とされていることに注意することが重要です。切開が完全に頭蓋骨を二分するのに十分な深されていない場合には、耳石の位置が明確に見える脳の空洞を露出することは非常に困難であろう。経験により、全体的な技術は、比較的単純であり、無傷で発見された耳石の割合が高いにつながります。この新しい方法は研究に、標準的な耳石の抽出方法を用いて、難しいかもしれチョウザメ以外の種のための耳石を抽出する別の方法を提供します。 この方法の制限は、フィールドでの使用のためではない設定を実験室に適用可能です。カーカスの準備に必要な時間は、収集されたサンプルを助長されていませんタイムリーにフィールドに入力します。もう一つの懸念は、一般的に起因する人口減少に州または連邦法の下で保護されているチョウザメの種に使用することです。 生きている集団を維持するために必要とされる個体を犠牲を犠...

世界中のチョウザメ（ チョウザメ科 ）の集団が原因で生息地の喪失、人口の断片化を含む影響への一世紀以上にわたって減少し、多くの集団は州および連邦の法律1,2によって保護されるように乱獲されています。米国および世界各国管理機関は、復元と回復1のための標的種とし ​​てチョウザメを同定しました。ほとんどのチョウザメ集団の人口特性（成長、募集、ダイエット）は、より良い1基礎生物学と生活史特性を理解するために研究されてきました。ほとんどのチョウザメの個体群の保護状況のため、年齢の評価は、個人への犠牲や被害が保証されていない小さな絶滅危惧集団では困難です。 年齢推定と成長の分析を目的とした骨構造の抽出は、スタージの年齢を決定するためのフィン線セクションの一般的な手法3【選択の使用でした実用的な非致死方法となっていますが、技術の検証が限定されていると年齢が高齢者（&gt; 15歳）で解読することは非常に困難な場合があります4。湾チョウザメの年齢の検証におけるそれらの使用のためのチョウザメで複数の骨構造の使用を評価する研究者（ チョウザメ属oxyrinchus desoti）5、大西洋チョウザメ（A. oを。oxyrinchus）6、白チョウザメ（A.のtransmontanus）7、および湖のチョウザメ（A.の fluvescens）8は、第1 のマージナル胸びれ線が最も正確な年齢を提供するが、より大きな個人に有害であることが、この侵襲的な手順を締結したと結論づけました。現在、成功9の非常に高い割合で北米チョウザメ種を区別するために耳石形状のメトリックを使用しての開発があります。頭蓋骨の基部の背側横切開で耳石を除去する工程の詳細については、共通の耳石が余分ですction方法は、文献で発見し、明確Secorらによって詳述します。 （1991）10。しかし、この方法は、小さくて繊細であり、破壊する傾向がある耳石と非常に厚い頭蓋骨を有するチョウザメに実現することは困難です。文学のさらなる検討はチョウザメのための耳石除去プロセスの他の詳細な方法論を示していません。本稿の目的は、細部に腹側から脳の空洞を入力することにより、チョウザメから耳石を抽出する別の方法でした。

<table><tbody><tr><td>測定ボード</td><td></td><td></td><td>、メートル法、メータースティックが好ましい</td></tr><tr><td>、体重計</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>、フィレットナイフ</td><td></td><td></td><td></td></tr>、<tr><td>メス</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>、鉗子</td><td></td><td></td><td></td></tr>、<tr><td>サンプルバイアル、</td><td></td><td></td><td>25ml、シンチレーションバイアル、うまく機能します</td></tr></tbody></table>

チョウザメから耳石を削除する別の方法

Alternative Method of Removing Otoliths from Sturgeon

非常に厚い頭蓋骨を持っている魚から耳石（耳の骨）を抽出することは困難であり、非常に時間がかかることがあります。正しく行われていない場合は、手や電気鋸で頭蓋骨の上に横方向の縦切開を行うのが一般的で耳石を損傷することがあります。チョウザメ（ チョウザメ科）は非常に大きく、厚い頭蓋骨を持っている特に1ファミリーです。耳石が露出するように魚の腹側から脳の空洞に入る新しい実験室の方法は、文献に見られる他の耳石の抽出法よりも簡単でした。文献で検討方法は、フィールド用に設計されており、すぐに魚を大量に処理で、より効率的なされています。しかし、この新技術は、時間が押していないされ、各試料からの抽出成功が重要なときに実験室の設定のために、より適しているように設計されました。この技術を用いて耳石を発見し、除去の成功は非常に高く、Sが損なわれませんいずれかの方法でtructure。この代替技術は、耳石を抽出するための他の類似の魚種にも適用可能です。

世界中のチョウザメの大人のサイズは大きく変化するが、耳石の位置が一致しています。鋭いフィレットナイフの使用を容易に、図1（d）に示す口腔の軟組織を除去することが見出されました。電気骨鋸は、 図1Eに脳の空洞を露出させる横切開のための推奨ツールです。しかし、頭蓋骨の正中線を二等分に注意がそれ以外の場合は耳石は、このプロセスの間に破砕することができる必要とされています。この処理が正しく行われた場合、脳の空洞は、 図2Aに示すように、耳石の損傷なしで均一に露光されます。脳の問題を簡単に、図2Bのように鉗子を使用して除去し、 図2Cに示すように、耳石を容易に脳キャビティの基部に見られる含ま半規管軟骨を発見します。半規管で見つかった軟骨は、EASですILY 図2Dに見られるようにピンセットで耳石から削除。 <p class="jove_content" fo:keep-to...

プロトコルの目標は、チョウザメの死骸から耳石を抽出する効果的な方法を示すことです。

Extracting the otoliths (ear bones) from fish that have very thick skulls can be difficult and very time consuming. The common practice of making a ...

本手法の全体的な目的は、レイクセタージョンなどの絶滅危惧魚種から、損傷のない耳石を抽出するための効果的な代替技術を提供することです。この耳石抽出法は、魚の年齢と成長、脳形態に関連した耳石の配置、および生息域に関連する微量元素分析などの重要な疑問を解決するのに役立ちます。この技術の利点は、頭蓋骨が厚く耳石が脆弱な魚において、脳腔を開けても耳石を傷つけたり、他の重要な構造を破壊したりすることがない点にあります。本手法のアイデアは、絶滅危惧種であるチョウザメの復元生態学に関する研究の中で開発されました。残存個体群では、剖検やラボ分析のための個体を採取することは困難です。そのため、個体から年齢などの情報を確実に収集することは、種のデータギャップを埋めるために極めて重要です。マークがレイクストurgeonから耳石を摘出する手順を行います。耳石を抽出するために、まずsturgeonを腹側を下にして寝かせ、メジャーを用いて吻端から尾端までの全長を1 mm単位で測定します。次に、風袋引きした秤で個体重量を1 g単位で測定し、体に外部タグや標識がないかを確認します。これらのデータを記録した後、大きなフィレナイフを使用して、頭蓋骨の基部から第1背甲板までの体の間に垂直に切開を入れ、頭部を切り離します。取り出した後、口が上を向くように頭部を回転させます。次に、フィレナイフを使用して頭蓋骨の腹側を切り、軟組織を除去します。その後、電気キャストカッターを用いて、吻端から頭蓋底にかけて切開し、頭部を完全に二等分します。手で2つの半分に分け、脳腔を露出させます。次に、ピンセットを使用して脳組織を取り除き、脳腔内の半円管を露出させます。脳腔から半円管軟骨を除去します。次に、鉗子の先端を用いて半円管軟骨を慎重に穿刺します。軟骨内の硬い骨構造を確認後、耳石を取り出し、耳石を92% ethanolに4秒間浸して残っている軟骨を除去します。最後に、耳石を蓋のない 25 milliliter のシンチレーションバイアルに入れ、24時間乾燥させます。チョウザメの成魚のサイズは世界中で大きく異なりますが、耳石の位置は一貫しています。実演した通り、鋭いフィレナイフを使用すれば、口の軟組織を簡単に除去できます。しかしながら、脳腔を露出させるための側切開には、電動キャストカッターが適しています。頭蓋骨の中央線を二分する際は、細心の注意を払う必要があります。さもなければ、この過程で耳石が潰れてしまう可能性があります。ピンセットを使用することで、脳組織を容易に除去でき、脳腔底部にある耳石を含む半規管軟骨にアクセスすることが可能になります。その後、ピンセットを用いて半規管の軟骨を耳石から容易に除去し、耳石のさらなる解析を行うことができます。この手法を習得し、適切に実施すれば、5分以内に完了させることが可能です。この手順を行う際は、時間をかけて慎重に切開することが重要です。解剖器具や死魚を扱うことは、危険を伴い、また臭いがあることを忘れないでください。したがって、本手順の実施中は、手術器具の適切な使用や適切なPPE（個人用保護具）の着用など、常に予防措置を講じる必要があります。このビデオを視聴することで、チョウザメの頭蓋骨を腹側から開き、耳骨を損傷させることなく耳石を取り出す方法について十分に理解できるはずです。この手法の開発により、水産科学分野の研究者は、標準的な手法では困難であった魚種において、耳石を正常に取り出すための代替的な方法を模索することが可能となりました。

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