水耕：栄養アベイラビリティと毒性元素への曝露に栄養の割り当てと植物の応答を研究するための汎用性の高いシステム

次のプロトコルは、実験室で水耕栽培システムをセットアップするための段階的な手順を提供します。このプロトコルは、シロイヌナズナ用に最適化されています。水耕栽培の確立を成功させる主な要因の1つは、実験に使用された苗の健康状態です。

したがって、器具、種子、培地の滅菌は、汚染のリスクを減らす上で重要な役割を果たし、植物が水耕栽培システムに移植される前に良いスタートを切ります。このステップでは、漂白剤と塩酸の反応から放出される塩素ガスが種子の表面を殺菌します。種子を1.5ミリリットルの遠心分離チューブに移す前に、鉛筆を使用してチューブにラベルを付け、種子を特定します。

滅菌中にインクが色あせる可能性があるため、鉛筆が好まれます。また、チューブのキャップにシャーピーで印を付けます。このマークは、塩素ガスが放出されるため、滅菌プロセス中に消えるはずです。

チューブあたりの推奨種子量は約100マイクロリットルです。ラベル付きのチューブを置き、キャップを開けてデシケーターまたは真空チャンバーに入れます。デシケーターを活性化学物質のヒュームフードに入れます。

100ミリリットルの漂白剤を250ミリリットルのビーカーに注ぎ、デシケーターに入れてデシケーターのバルブを閉じます。ビュレットを使用して、3ミリリットルの12%塩酸を漂白剤にすばやく追加します。すぐに蓋を閉めてください。

滅菌を4時間進行させます。これは、4時間の滅菌後、漂白剤が除去された後のアクティブ層流フード内のデシケーターです。赤いマークが消えていくのは、十分な量の塩素ガスが発生していることを示しています。

デシケーターの蓋を大きく開け、滅菌した種子を少なくとも30分間通気します。この後、種子はすぐに使用するか、乾燥した場所に保管することができます。このステップは、移植段階の前に健康な苗木を提供するのに役立ちます。

これらは、シードプレートを開始するために必要なアイテムです。滅菌種子、1/4 MSメディアプレート、滅菌濾紙、ミリポアテープ、滅菌爪楊枝、マーカーペン、アルミホイル。まず、遠心分離チューブから種子を滅菌濾紙に移します。

つまようじの一方の端を少し濡らし、この保湿された端を使用してろ紙から種子を拾い上げ、寒天面に置きます。種子をプレート全体に広げ、1平方センチメートルあたり約1個の種子の密度で広げます。ここでは、ステップを示すためにいくつかのシードのみを使用しますが、シードでいっぱいのプレートを作ることができます。

プレートの蓋に日付を書いて、植物の年齢を追跡します。マイクロポアテープを使用して、プレート本体にプレートの蓋を取り付けます。また、このテープは、プレート内の空気と微気候との間の水分交換を可能にします。

アルミホイルを使用してプレートを覆い、光を遮断してから、植物を冷蔵室に2日間置きます。発芽プロセスを助けるために、より長い時間が使用される場合があります。.1/4 MSと同様に、水耕栽培溶液も調製後に滅菌する必要があります。

シロイヌナズナの栽培には、以下の栄養溶液を成功裏に使用しましたが、特定の実験や異なる植物種に合わせて変更することができます。鉄-EDTAを除く、各主要栄養素のストック溶液を異なるボトルに入れ、すべての微量栄養素を1つのボトルに調製することをお勧めします。実験に先立って10倍の栄養溶液を調製することもできますが、オートクレーブ滅菌して冷蔵室で保存する必要があります。

以下は、プラントホルダーを準備するために必要な材料です。水耕栽培容器、発泡スチロールボード、ペーパーナイフ、コルク穴あけ器、滅菌フォームチューブプラグ、ピンセット。まず、コンテナのサイズを測定します。

次に、必要な寸法に従ってフォームボードをカットします。この場合、ペーパーナイフが役立ちます。フォームボードのサイズが容器にしっかりとフィットすることを確認します。

小さなピンセットを使用してボードを保持します。必要に応じて、フォームボードのサイズを調整します。鉛筆を使用して、植物が固定される位置に印を付けます。

コルクボアを使用して、フォームボードに穴を開けます。推奨密度:10センチメートルの二乗ごとに1つの植物。次に、カミソリの刃を使用して各フォームプラグに沿って走るカットを作ります。

かみそりの刃を使用するときは細心の注意を払ってください。各穴はフォームプラグで埋められます。したがって、穴のサイズはプラグに比例する必要があります。

水耕栽培をセットアップする前に、2つのプラグを脱イオン水と液体オートクレーブに浸します。次に、苗を移し、エアポンプをセットアップします。これは、作業濃度での水耕栽培溶液です。

これらは滅菌フォームチューブプラグです。そして、これらはミディアムプレートの12日齢の苗です。プレートを開きます。

小さなピンセットを使用して、苗をミディアムプレートからそっと引き出し、フォームプラグの切開部に沿って根を置きます。苗を固定しているフォームチューブをフォームボードに慎重に差し込み、ボードを水耕栽培溶液の入った容器に入れます。必要な数の植物を得るために移植を続けます。

フォームチューブプラグが水耕栽培溶液に浸されていることを確認してください。次に、小型の水槽型エアポンプ、プラスチックチューブ、水槽用バブルストーン、バルブシステム、エアポンプなどを使用した曝気システムのセットアップ方法を紹介します。まず、エアラインチューブの短く切断された部分をバブルストーンに接続します。

次に、石をバルブシステムに接続します。次に、バルブシステムをポンプに接続します。ポンプを作動させた後、シーン内の人物はバルブを調整して空気の流量を制御しています。

空気の流れは、根系に損傷を与えることなく酸素を供給するのに十分である必要があります。次に、苗木の入ったフォームボードを水耕栽培のセットアップに入れます。容器の側面を覆って、溶液に到達する光を制限し、藻類の成長を制限します。

また、新しく移植された苗木が乾燥する可能性のある強い光を防ぐために、容器の上部を透明なキャップで覆います。植物が大きくなったら、キャップを外します。植物栄養素に関心のある研究者にとって、水耕栽培実験は、関心のある元素の濃度を操作することにより、さまざまな栄養素条件に対する植物の応答をテストするための理想的なシステムを提供します。

研究者は、栄養素が十分、不足、または有毒な状態を設定できます。これらは、プロトコルに記載されているように水耕栽培システムで育てられたシロイヌナズナの苗木です。植物は、水耕栽培溶液の組成を変更する前に、水耕栽培システムで3週間成長させられました。

シーンの人物は、植物に処理を施す前に水耕栽培溶液を更新しています。有毒元素であるカドミウムの原液を使用して、水耕栽培溶液をスパイクしました。この実験で使用したカドミウム濃度は20マイクロモルでした。

溶液が調製された後、植物は容器に戻されます。カドミウムに曝露されたプラントの処理6日後、成長遅延とクロロシス症状が見られました。また、シュートと根の両方のバイオマスの減少も観察されます。

この図は、水耕栽培システムで栽培されたシロイヌナズナ植物を異なる濃度の亜鉛で処理した別の実験を示しています。42マイクロモルを超える亜鉛濃度で栽培された植物は、亜鉛濃度が高いため成長の遅れを示しました。亜鉛を添加していない植物は、7マイクロモルの亜鉛で栽培された植物と比較して、亜鉛欠乏症による成長の遅れも示しました。

結論として、この水耕栽培システムは安価でスケーラブルです。これにより、有毒元素に対する植物の感受性をテストしたり、植物の栄養素要件を研究したりすることができます。根と新芽の両方を別々に観察し、元素分析または遺伝子発現分析のために収集することができます。