防御効力および肺免疫応答は、マウスに皮下および鼻腔内BCG投与後の

この手順の全体的な目標は、結核免疫後の肺の免疫応答を研究することです。これには、鼻腔内チャレンジに対するワクチンの防御効果や局所的なワクチン誘発性肺免疫応答が含まれます。この方法論は、肺ワクチンが最適な肺免疫防御のためにもたらす防御的な肺免疫応答の同定など、結核ワクチンにおける重要な疑問に答えるのに役立ちます。この方法論の利点の1つは、その動物からの肺免疫応答が防御効果と並行して個別に評価されることです。

防御と相関する特定の免疫パラメータの特定を可能にします。BCGワクチンの皮下投与は、まず26ゲージ針を装着した1ミリリットルの注射器にBCGワクチン懸濁液1ミリリットルを充填し、気泡を取り除きます。次に、麻酔をかけたマウスを層流フード内の腹臥位に置き、後部側面に100マイクロリットルの細菌を動物に皮下接種します。

鼻腔内投与の場合は、マイクロピペットに20マイクロリットルのBCG懸 ?? 液をロードし、麻酔をかけたマウスをフード内の仰臥位に置きます。.20マイクロリットルの全容積が沈着するまで、2つの鼻孔の間に接種物を滴下し、マウスが懸濁液を吸入できるように滴下する時間を残します。次に、マイクロピペットにさらに20マイクロリットルの細菌をリロードし、投与を繰り返します。

H37Rv結核菌株の鼻腔内チャレンジでは、ワクチン接種後の適切な実験時点で、先ほど示したように、H37Rv細菌懸濁液の40マイクロリットルを動物に鼻腔内投与します。気管支肺胞洗浄またはボールサンプルを取得するには、まず滅菌鉗子とハサミを使用して気管を露出させます。次に、組織を完全に切除しないように注意しながら、気管に小さな切開を行い、800マイクロリットルの氷冷PBSを含む滅菌1mLシリンジに接続されたカニューレを挿入します。

カニューレが所定の位置にあるとき、慎重に肺にPBSを充填し、プランジャーをゆっくりと引き戻して、少なくとも500〜600マイクロリットルの洗浄液を回収します。氷上の1.5mLチューブにボールを分注し、懸濁液が無色であり、血液汚染がないことを確認します。ボールが処理されるまで、サンプルを氷上に保存します。

肺の細菌負荷と免疫応答を決定するには、マウスを仰臥位に針で固定し、層流フード内の平らで消毒された表面に固定し、胸の上部皮膚を切開します。次に、皮膚を剥がして胸部を露出させ、肺を切り開きます。滅菌はさみと鉗子を使用して肺と心臓を採取し、臓器を清潔な表面に置きます。

次に、心臓、気管、結合組織を切除します。各肺を異なる1.5 mLチューブに入れ、氷上に1 mLの脱イオン水を入れて、細菌負荷と細胞性免疫応答を下流で測定します。皮下経路と比較すると、鼻腔内ワクチン接種経路は肺にはるかに大きな保護効果をもたらします。

RD9ゲノム領域に特異的なPCRによる鼻腔内BCGワクチン群のコロニーの代表数を分析したところ、すべてのコロニーがH37Rvに対応する0.4キロ塩基対のフラグメントを提供することが示されました。鼻腔内BCGはより高いIL17を誘発し、肺でのガンマ産生を妨害し、鼻腔内BCGワクチン接種によってもたらされる防御効果と、チャレンジ前の肺でのワクチン誘発免疫応答との間に相関関係があることが明らかになりました鼻腔内ワクチン接種者について観察された洗浄サンプル中の総濃度とH37Rv精製タンパク質誘導体特異的IgA濃度の両方が高い。結核チャレンジ後の肺のサイトカイン産生細胞のさらなる分析により、ガンマ産生細胞への干渉がすべての感染群で検出されたのに対し、IL17A産生CD4+細胞は鼻腔内BCGグループでのみ見られ、IL17の存在と肺細菌負荷の減少との間に有意な相関関係があることが明らかになりました。

この手順に続いて、生物多様性結核ワクチンの使用における局所的な肺免疫応答、および異なる投与経路とチャレンジ後の時点を比較することが可能です。さらに、この方法論は、チャレンジ後のワクチン接種で使用される免疫性を評価するために使用できます。これにより、防御と相関する免疫応答の特定が可能になる可能性がある。

重要なことは、結核菌の扱いにはBCLフリーの検査施設が必要であり、この手順を実行するときは常に適切な予防措置を講じる必要があります。