Name: 前根刺激のための斜め脊髄スライスの調製 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 10 s
Description: 学ぶ前根刺激のための斜め脊髄スライス調製法。新生マウスを用いて運動ニューロンの同定と軸索側枝が支配する腹側細胞の研究を可能にする神経生理学的手法です。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

著者は、写真を撮るのを手伝ってくれたMarin ManuelとOlivia Goldman-Szwajkajzerに感謝します。著者はまた、原稿を校正してくれたArjun MasukarとTobias Bockに感謝します。Agence Nationale pour la Recherche (HYPER-MND, ANR-2010-BLAN-1429-01)、NIH-NINDS (R01NS077863)、Thierry Latran Foundation (OHEX Project)、フランスミオパシー協会 (助成金番号 16026)、Target ALS からの財政支援は感謝しています。フェリックス・ルロワは、カシャンのエコールノルマル高等師範学校から「コントラトドクター」を授与されました。

実験は、欧州指令（609分の86 / CEEと2010から63-UE）とフランスの法律に従って行われ、パリデカルト大学の倫理委員会によって承認されました。 1.脊髄スライスの準備<ol><li>毎日、以下の溶液を調製するか、事前に1日。場合は95％O 2および5％CO 2で一晩、バブルを維持し、密閉瓶で冷蔵保管してください。 <ol><li> 低のNa +人工脳脊髄液（ACSF）を準備：3のKCl、1 mMののNaH 2 PO 4、230mMのスクロース、26 mMの炭酸水素ナトリウム、0.8mMのCaCl 2を、8のMgCl 2、25 mMグルコース、0.4 mMのアスコルビン酸、 1 mMののNa-kynurenate、2 mMのピルビン酸ナトリウム。 95％O 2および5％CO 2（pH7.4）でバブル。 Na-kynurenateは、多くの場合、溶解することが困難であるので、材料の表に記載されているものを購入することを確認します。 </li><li> K-グルコン酸ソリューを準備ン：KOHでpH7.4に調整130mMのK-グルコン酸塩、15mMのKClを、0.05 mMのEGTA、20mMのHEPES、25 mMグルコース、1mMのNaをkynurenate、2 mMのピルビン酸ナトリウム、。 </li><li> 準備ACSF：130のNaCl、2.5mMのKClを、2mMのCaCl 2を、1mMのMgCl 2、1mMののNaH 2 PO 4、26 mMの炭酸水素ナトリウム、25 mMグルコース、0.4mMのアスコルビン酸、2mMのナトリウムピルビン酸。 95％O 2および5％CO 2（pH7.4）でバブル。 </li><li>解剖の開始前に、K-グルコン酸溶液を80ミリリットルで2％寒天を溶解し、60℃で保温。 </li></ol></li><li> 心臓内灌流 <ol><li> P2からP11までの年齢に至るまで、雌雄のマウスにこの準備を行います。 </li><li> 25mMのペントバルビタールナトリウム（50mg / kg）の0.1mlを腹腔内注射してマウスを麻酔。 </li><li>針やテープを使用して、シリコンを充填した大型シャーレに背の上でマウスを固定化します。解剖顕微鏡を使用して、解剖の残りの電子。 </li><li>胸骨の先端を持ち、胸を持ち上げ、細かいハサミを使用して、振動板をカット。その後、心臓を露出するためにリブを切断することにより、両側の胸を開きます。 </li><li> 27G針で左心室を穿刺する前に、右心房をカットします。 </li><li>氷のように冷たい低いのNa + ACSFで灌流します。 30秒後に、低いのNa + ACSFは、心房から流出見られるべきです。ナトリウムの低い量はスパイクから細胞を防止し、解剖時に細胞死を減少させます。 </li><li>血液が排出される際に肝臓が黄色になるまで解剖顕微鏡下で心臓に針を保持し続けます。 </li></ol></li><li> 脊髄の解剖 <ol><li>動物の首をはねるとそのお腹の上に置きました。 </li><li>素早くバック（ 図1A1）の皮膚を除去。肩を介して2つのカットを行い、胸のケージ（ 図1A2）を下って行きます。その後リットルとしてコードをカット動物の下部からリブの始まりと脊柱を分離するために、尾部でできるだけOW。再び動物を裏返し、まだリブに取り付けられた内臓を取り除きます。 </li><li>別の脊柱を移し、より小さなシリコンで満たされたペトリ皿と背側を上（ 図1A）、それを保持するために4虫ピンを使用します。 </li><li>背側の椎弓切除を行い、吻側端（ 図1B）から脊髄を露出させながら、連続的に（約4℃）カーボゲンバブリングACSFで動物を灌流。これを行うには、骨と脊髄の間の微妙なハサミの先端を挿入し、白質から離れて滞在することを確認して、吻側端から少しずつ骨を切りました。それぞれの側に代替すでに（ 図1B1）カット骨のバンドを離れて保つためにピンセットを使用している間。 </li><li>利用可能な最小春のはさみとピンセットを使用して、硬膜とカットを持ち上げますはさみで脊髄を損傷しないようにするために、両側に硬膜の緩い部分を保持したまま。吻側 - 尾側軸に沿って切断。 注：硬膜は、半透明の連続膜です。この年齢で軟膜はあまりにも脆く、解剖やスライシング（ 図1B2）の間に離れて来ます。 </li><li>硬膜は、吻側側から、使用に優しくハーフカット脊柱によって形成された溝の左側にコードをプッシュし、右側の腹側と背側根をカットする鈍いガラスやプラスチックの先端を除去されると、彼らは（少なくとも数mm、 図1B2）コードを入力する場所から遠いです。 </li><li>常に頭側から尾側に行く、左側の操作を繰り返します。左利きの場合は、左側から開始し、右側に移動します。 </li></ol></li><li> 寒天に埋め込みます <ol><li>脊柱の外にコードをスリップ。突き止めるために小さい虫ピンを使用しますコード背面を上にしてと繊細にはまだ（ 図1C1）それに接続されている膜の任意の部分を削除します。 </li><li>洗浄後は、両端（ 図1C2）をトリミングします。コードを操作し、その向き（ 図1C2の矢印）を注意することは、コードの前部に曲がった虫ピンを挿入します。その後、氷冷K-グルコン酸溶液に脊髄を転送します。 注：このソリューションは、CSFの細胞内の組成を模倣し、運動ニューロンが26をカットされます一度浸透圧ショックで死ぬから細胞を防ぐことができます。 </li><li>脊髄がイントラセルラーソリューション内になると、乾燥槽の外に寒天を入れたビーカーを取り、氷と水の混合物でそれをクールダウン。 </li><li>温度を測定しながら攪拌してください。温度が到達すると38°Cは、虫ピンでそれを保持し、脊髄を浸すとダウンそれを吻側側に配置します。脊髄は、STのようであることを確認してくださいraight可能な限り、離れて尾部、壁からやや上向き（ 図1D1）。 </li><li>寒天は、可能な限り迅速に固化することを可能にするために氷と水の混合物中にビーカーを残します。それは場所にとどまり、コードが直（ 図1D1）可能な限りであることを確認してください。 </li></ol></li><li> スライス <ol><li>固化した後、ブロックのベースはコード（ 図1D2の矢印）の腰部に35°の角度になるように脊髄を含む寒天ブロックをカット。背面は、ベース（ 図1D2）から反対されるべきです。 注：これは、彼らが終了し、そこから前根に運動ニューロンプールの連続性を維持するための手順における重要なステップです。 </li><li>シアノアクリレート接着剤を使用して、ビブラのチャンバ内にブロックを接着。維持するために、K-グルコン酸溶液中に浸し、酔っぱらった冷凍K-グルコン酸溶液を加え（2℃以下）チルド風呂。 </li><li> （その曲率と大きい直径によって識別）腰部の400μmの厚さにスライス - 350をカットします。その正しい向き（1.4.1を参照。）で、腹面に背側から切り取り、スライス連続より吻側を作るためにブレードを使用しています。一般的に、2mm以上を拡張する前根と4-5の適切なスライスがあります。 10°の角度、70 Hzの振動周波数とスライスの10mm /分の速度：次のパラメータを使用します。 </li></ol></li><li> インキュベーション <ol><li> 34℃でACSFにスライスを転送します。約30分後、RTにスライスを冷却し、記録セッションを開始します。 </li></ol></li></ol><img alt="図1" src="/files/ftp_upload/54525/54525fig1.jpg" /> 図1.解剖 A1：脊柱を露出させるために背中の皮膚の除去A2：脊柱を解放するために肩や肋骨の切断B1：脊椎のコラムはシリコンで満たされたペトリ皿（背側を上、左尾側）に固定B2：脊髄露出し、解剖と同じC1：脊髄孤立。（左吻側側）C2：埋め込みする準備ができて脊髄（腹側まで、吻側側左）。吻側側の小さい虫ピンに注意してくださいD1：寒天ビーカー（吻側側ウ、底に面した腹側）で脊髄D2：埋め込まれた脊髄と寒天ブロックをカット。 35°の角度にブロックのベースと腰膨大（矢印）と脊髄のフォームを注意してください。スケールバー1センチメートル。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54525/54525fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> 2.チャンバー内にスライスを配置します注：Veはntral根は可変サイズです。 <ol><li>事前に40から170ミクロンまでの範囲の先端径を有する様々なピペットの箱を用意します。吸引ピペットを準備するには、長いテーパーで、多くのピペットを準備します。ダイヤモンドナイフを使用して、異なる位置で切断してください。その後、解剖顕微鏡下で、ピンセットで先端を押すことでそれを破ります。 </li><li>記録顕微鏡から室を削除し、解剖顕微鏡下に置きます。 </li><li>吸引刺激電極上に搭載されるのに十分な長さ（2mm以上）の腹側のルートを含むスライスを選択します。前根とスライス上方（ 図2A）の適切な方向を選択し、スライス（ 図2B）の周りに寒天の残りの部分を残しながら微妙に前根の周りに寒天をカット。 注：寒天は、スライスよりもより強固であるため、これはスライスのアンカーのスレッドが寒天上ではなくスライス上に静止することができますので、Anchorは、組織を損傷することはありません。スライスのアンカーのスレッドが（ 図2Cに赤で示されている）運動ニューロンプールの上にあることを確認します。 </li><li>顕微鏡上にバックチャンバーをマウントし、継続的に1の割合でACSFで記録チャンバーを灌流 - 室温で、2ml /分。ガラスピペットACSFを充填したシリンジに接続を使用して、前根（ 図2Cの矢印）のいずれかを吸います。前根の良い刺激を達成するために、ピペットチップは、前根の周りにタイトにする必要があります。一方の極には、刺激電極と他の浴中で1つ（またはパッチクランプ電極基準に接続されている）であるべきです。 </li><li>所望の細胞型のパッチクランプ記録を達成し、previsouly 10記載されているように前根刺激の効果を記録。 <ol><li>ここでは、データ収集のためのアンプを使用しています。 3 kHzでホールセル記録をフィルタリングします。 10kHzでデジタル化します。 curreにブリッジ抵抗を補償NT-クランプモード。 </li></ol></li></ol><img alt="図2" src="/files/ftp_upload/54525/54525fig2.jpg" /> 図2.前根の準備 ：上を向いて前根と寒天中に埋め込まれた腰椎脊髄スライスB：寒天から解放された前根と腰椎脊髄スライスC：しっかりと前根（矢印）の周りに配置され刺激電極と腰椎脊髄スライス。マウスレポーターR26 トム・17。スケールバー1ミリメートルと交配chrna2-Creをマウス28で赤色蛍光を発現しているレンショウ細胞の位置に注意してください。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54525/54525fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a>

<ol><li>Brooks, C. M., Downman, C. B., Eccles, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((After-potentials+and+excitability+of+spinal+motoneurones+following+antidromic+activation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">After-potentials and excitability of spinal motoneurones following antidromic activation.</a> J Neurophysiol. 13 (1), 9-38 (1950).</li>
<li>Bories, C., Amendola, J., Lamotte d'Incamps, B., Durand, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+electrophysiological+abnormalities+in+lumbar+motoneurons+in+a+transgenic+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Early electrophysiological abnormalities in lumbar motoneurons in a transgenic mouse model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Eur J Neurosci. 25 (2), 451-459 (2007).</li>
<li>Takahashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+currents+in+visually+identified+motoneurones+of+neonatal+rat+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Membrane currents in visually identified motoneurones of neonatal rat spinal cord.</a> J Physiol. 423, 27-46 (1990).</li>
<li>Hori, N., Tan, Y., Strominger, N. L., Carpenter, D. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+activity+of+rat+spinal+cord+motoneurons+in+slices%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Intracellular activity of rat spinal cord motoneurons in slices.</a> J Neurosci Methods. 112 (2), 185-191 (2001).</li>
<li>Arai, Y., Mentis, G. Z., Wu, J. Y., O'Donovan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ventrolateral+origin+of+each+cycle+of+rhythmic+activity+generated+by+the+spinal+cord+of+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Ventrolateral origin of each cycle of rhythmic activity generated by the spinal cord of the chick embryo.</a> PLoS One. 2 (5), e417(2007).</li>
<li>Cullheim, S., Lipsenthal, L., Burke, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+monosynaptic+contacts+between+type-identified+alpha-motoneurons+in+the+cat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Direct monosynaptic contacts between type-identified alpha-motoneurons in the cat.</a> Brain Res. 308 (1), 196-199 (1984).</li>
<li>Cullheim, S., Kellerth, J. O., Conradi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+direct+synaptic+interconnections+between+cat+spinal+alpha-motoneurons+via+the+recurrent+axon+collaterals%3A+a+morphological+study+using+intracellular+injection+of+horseradish+peroxidase%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Evidence for direct synaptic interconnections between cat spinal alpha-motoneurons via the recurrent axon collaterals: a morphological study using intracellular injection of horseradish peroxidase.</a> Brain Res. 132 (1), 1-10 (1977).</li>
<li>Gogan, P., Gueritaud, J. P., Horcholle-Bossavit, G., Tyc-Dumont, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+excitatory+interactions+between+spinal+motoneurones+of+the+cat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Direct excitatory interactions between spinal motoneurones of the cat.</a> J Physiol. 272 (3), 755-767 (1977).</li>
<li>Ichinose, T., Miyata, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recurrent+excitation+of+motoneurons+in+the+isolated+spinal+cord+of+newborn+rats+detected+by+whole-cell+recording%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Recurrent excitation of motoneurons in the isolated spinal cord of newborn rats detected by whole-cell recording.</a> Neurosci Res. 31 (3), 179-187 (1998).</li>
<li>Lamotte d'Incamps, B., Ascher, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Four+excitatory+postsynaptic+ionotropic+receptors+coactivated+at+the+motoneuron-Renshaw+cell+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Four excitatory postsynaptic ionotropic receptors coactivated at the motoneuron-Renshaw cell synapse.</a> J Neurosci. 28 (52), 14121-14131 (2008).</li>
<li>Renshaw, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+effects+of+centripetal+impulses+in+axons+of+spinal+ventral+roots%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Central effects of centripetal impulses in axons of spinal ventral roots.</a> J Neurophysiol. 9, 191-204 (1946).</li>
<li>Renshaw, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+nerve+impulses+in+the+gray+matter+as+a+mechanism+in+central+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Fed+Proc%22%5BJournal%5D)">Interaction of nerve impulses in the gray matter as a mechanism in central inhibition.</a> Fed Proc. 5 (1 Pt 2), 86(1946).</li>
<li>Renshaw, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Observations+on+interaction+of+nerve+impulses+in+the+gray+matter+and+on+the+nature+of+central+inhibition%29%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Observations on interaction of nerve impulses in the gray matter and on the nature of central inhibition).</a> Am J Physiol. 146, 443-448 (1946).</li>
<li>Pambo-Pambo, A., Durand, J., Gueritaud, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+excitability+changes+in+lumbar+motoneurons+of+transgenic+SOD1G85R+and+SOD1G%2893A-Low%29+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Early excitability changes in lumbar motoneurons of transgenic SOD1G85R and SOD1G(93A-Low) mice.</a> J Neurophysiol. 102 (6), 3627-3642 (2009).</li>
<li>Quinlan, K. A., Schuster, J. E., Fu, R., Siddique, T., Heckman, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+postnatal+maturation+of+electrical+properties+in+spinal+motoneurons+in+a+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Altered postnatal maturation of electrical properties in spinal motoneurons in a mouse model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> J Physiol. 589 (Pt 9), 2245-2260 (2011).</li>
<li>Martin, E., Cazenave, W., Cattaert, D., Branchereau, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+alteration+of+motoneuronal+morphology+induces+hyperexcitability+in+the+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Embryonic alteration of motoneuronal morphology induces hyperexcitability in the mouse model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Neurobiol Dis. 54, 116-126 (2013).</li>
<li>Hadzipasic, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+degeneration+of+a+physiological+subtype+of+spinal+motor+neuron+in+mice+with+SOD1-linked+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Selective degeneration of a physiological subtype of spinal motor neuron in mice with SOD1-linked ALS.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (47), 16883-16888 (2014).</li>
<li>Wichterle, H., Lieberam, I., Porter, J. A., Jessell, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+of+embryonic+stem+cells+into+motor+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation of embryonic stem cells into motor neurons.</a> Cell. 110 (3), 385-397 (2002).</li>
<li>Tallini, Y. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BAC+transgenic+mice+express+enhanced+green+fluorescent+protein+in+central+and+peripheral+cholinergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Genomics%22%5BJournal%5D)">BAC transgenic mice express enhanced green fluorescent protein in central and peripheral cholinergic neurons.</a> Physiol Genomics. 27 (3), 391-397 (2006).</li>
<li>Manuel, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fast+kinetics%2C+high-frequency+oscillations%2C+and+subprimary+firing+range+in+adult+mouse+spinal+motoneurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Fast kinetics, high-frequency oscillations, and subprimary firing range in adult mouse spinal motoneurons.</a> J Neurosci. 29 (36), 11246-11256 (2009).</li>
<li>Obeidat, A. Z., Nardelli, P., Powers, R. K., Cope, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+motoneuron+firing+by+recurrent+inhibition+in+the+adult+rat+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Modulation of motoneuron firing by recurrent inhibition in the adult rat in vivo.</a> J Neurophysiol. 112 (9), 2302-2315 (2014).</li>
<li>Leroy, F., Lamotte d'Incamps, B., Imhoff-Manuel, R. D., Zytnicki, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+intrinsic+hyperexcitability+does+not+contribute+to+motoneuron+degeneration+in+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Early intrinsic hyperexcitability does not contribute to motoneuron degeneration in amyotrophic lateral sclerosis.</a> Elife. 3, (2014).</li>
<li>Leroy, F., Lamotte d'Incamps, B., Zytnicki, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potassium+currents+dynamically+set+the+recruitment+and+firing+properties+of+F-type+motoneurons+in+neonatal+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Potassium currents dynamically set the recruitment and firing properties of F-type motoneurons in neonatal mice.</a> J Neurophysiol. 114 (3), 1963-1973 (2015).</li>
<li>Lamotte d'Incamps, B., Ascher, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subunit+composition+and+kinetics+of+the+Renshaw+cell+heteromeric+nicotinic+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Subunit composition and kinetics of the Renshaw cell heteromeric nicotinic receptors.</a> Biochem Pharmacol. 86 (8), 1114-1121 (2013).</li>
<li>Lamotte d'Incamps, B., Krejci, E., Ascher, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+shaping+the+slow+nicotinic+synaptic+current+at+the+motoneuron-renshaw+cell+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mechanisms shaping the slow nicotinic synaptic current at the motoneuron-renshaw cell synapse.</a> J Neurosci. 32 (24), 8413-8423 (2012).</li>
<li>Dugue, G. P., Dumoulin, A., Triller, A., Dieudonne, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Target-dependent+use+of+co-released+inhibitory+transmitters+at+central+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Target-dependent use of co-released inhibitory transmitters at central synapses.</a> J Neurosci. 25 (28), 6490-6498 (2005).</li>
<li>Mentis, G. Z., Siembab, V. C., Zerda, R., O'Donovan, M. J., Alvarez, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+afferent+synapses+on+developing+and+adult+Renshaw+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Primary afferent synapses on developing and adult Renshaw cells.</a> J Neurosci. 26 (51), 13297-13310 (2006).</li>
<li>Perry, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Firing+properties+of+Renshaw+cells+defined+by+Chrna2+are+modulated+by+hyperpolarizing+and+small+conductance+ion+currents+Ih+and+ISK%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Firing properties of Renshaw cells defined by Chrna2 are modulated by hyperpolarizing and small conductance ion currents Ih and ISK.</a> Eur J Neurosci. 41 (7), 889-900 (2015).</li>
<li>Thurbon, D., Luscher, H. R., Hofstetter, T., Redman, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Passive+electrical+properties+of+ventral+horn+neurons+in+rat+spinal+cord+slices%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Passive electrical properties of ventral horn neurons in rat spinal cord slices.</a> J Neurophysiol. 79 (5), 2485-2502 (1998).</li>
<li>Zengel, J. E., Reid, S. A., Sypert, G. W., Munson, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+electrical+properties+and+prediction+of+motor-unit+type+of+medial+gastrocnemius+motoneurons+in+the+cat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Membrane electrical properties and prediction of motor-unit type of medial gastrocnemius motoneurons in the cat.</a> J Neurophysiol. 53 (5), 1323-1344 (1985).</li>
<li>Cooper, S., Sherington, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gower%27s+tract+and+spinal+border+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Gower's tract and spinal border cells.</a> Brain. 63, 123-124 (1940).</li>
<li>Morin, F., Schwartz, H. G., O'Leary, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+study+of+the+spinothalamic+and+related+tracts%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Psychiatr+Neurol+Scand%22%5BJournal%5D)">Experimental study of the spinothalamic and related tracts.</a> Acta Psychiatr Neurol Scand. 26 (3-4), 371-396 (1951).</li>
<li>Sengul, G., Fu, Y., Yu, Y., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+cord+projections+to+the+cerebellum+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Struct+Funct%22%5BJournal%5D)">Spinal cord projections to the cerebellum in the mouse.</a> Brain Struct Funct. 220 (5), 2997-3009 (2015).</li>
<li>Russier, M., Carlier, E., Ankri, N., Fronzaroli, L., Debanne, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A-%2C+T-%2C+and+H-type+currents+shape+intrinsic+firing+of+developing+rat+abducens+motoneurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">A-, T-, and H-type currents shape intrinsic firing of developing rat abducens motoneurons.</a> J Physiol. 549 (Pt 1), 21-36 (2003).</li>
<li>Dourado, M., Sargent, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Properties+of+nicotinic+receptors+underlying+Renshaw+cell+excitation+by+alpha-motor+neurons+in+neonatal+rat+spinal+cord%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Properties of nicotinic receptors underlying Renshaw cell excitation by alpha-motor neurons in neonatal rat spinal cord).</a> J Neurophysiol. 87 (6), 3117-3125 (2002).</li>
<li>Mitra, P., Brownstone, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vitro+spinal+cord+slice+preparation+for+recording+from+lumbar+motoneurons+of+the+adult+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">An in vitro spinal cord slice preparation for recording from lumbar motoneurons of the adult mouse.</a> J Neurophysiol. 107 (2), 728-741 (2012).</li>
<li>Rothman, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neurotoxicity+of+excitatory+amino+acids+is+produced+by+passive+chloride+influx%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The neurotoxicity of excitatory amino acids is produced by passive chloride influx.</a> J Neurosci. 5 (6), 1483-1489 (1985).</li>
<li>Olney, J. W., Price, M. T., Samson, L., Labruyere, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+specific+ions+in+glutamate+neurotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">The role of specific ions in glutamate neurotoxicity.</a> Neurosci Lett. 65 (1), 65-71 (1986).</li>
</ol>

著者らは開示するものは何もない。

脊髄の斜めスライスは、信頼性が高く、包括的かつ特異的な方法で、単一の椎骨セグメントの運動ニューロンプールとレンショー細胞を片側で刺激できるため、重要です。さらに、記録された運動ニューロンを迅速、エレガント、明確に識別することができます。次に、他のスライス調製方法と比較したこの手法の利点を強調し、次に、この手順を実行する際に避けるべき最も一般的な落とし穴を強調します。
横スライスを使用したほとんどの研究は、固有の電気的特性に基づいて識別されています 3,14,15,29。ただし、これらは、運動ニューロンプール間、および特定のプール内の運動ニューロンサブタイプ間で大きく異なります(アルファ、ベータ、およびガンマ運動ニューロン30)。したがって、サイズパラメータを使用した研究では、より小さなガンマ運動ニューロンが除外される可能性があります。一方、CooperとSherringtonは、1940年に、上行軸索を横切ったサルと猫の腰脊髄の腹外側灰白質にある大きな神経細胞のグループを記述しました31,32。彼らは、運動ニューロン...

歴史的に、シャープな電極を用いた運動ニューロンの記録は、例えば、ネコやネズミ1などの大型動物やマウス2で分離された全脊髄のin vivoで行われました。 SOMAの必要なシールのような運動ニューロンへの直接アクセスを呼びかけ1980年代にパッチクランプ記録技術の出現は、視覚的な指導の下で達成されます。したがって、脊髄スライス標本は容易に1990年代初頭3は達成されています。しかし、初期のスライス標本は、多くの場合、前根を刺激することができませんでした。我々の知る限り、唯一の二つの研究は、横断スライスにおける腹側根の成功刺激を報告している、とどれもマウス4,5から得られませんでした。 運動ニューロンプールはその前根を逸脱軸索を保持する - この記事では、新生児マウス（P11 P2）の実行可能な脊髄スライスを達成するための手法を提示します。ベントRALルート刺激は同じ前根から出た運動ニューロンプールのSOMAのに戻し逆行性活動電位をトリガします。また、運動ニューロン担保対象、他の運動ニューロン6-10とレンショウ細胞11-13を励起します 。唯一の運動ニューロンは、前根ダウンその軸索を送っているので、我々は運動ニューロン10を識別physiologicalyするための簡単で確実な方法として、逆行性活動電位の記録を使用します。 運動ニューロンのアイデンティティを確認するために、潜在的に非包括的または誤解を招く電気生理学的および形態学的な規準を使用することに加えて、脊髄運動ニューロン上の最近の研究はまた、面倒で時間のかかる事後染色16に依存していました。このような識別は、通常は記録された細胞のサンプルに対して実行されます。他の特定の戦略は、運動ニューロンの内因性蛍光を発現するマウス系統に依存しています<sup&gt; 17-19。研究はすでにトランスジェニックマウスラインを使用して、必要な場合は、マーカーの発現はまだ変数であるか、しかし、遺伝的にコードされたマーカーを使用すると、若い年齢で難しいかもしれません。また、逆行性活動電位の記録は、セル記録の開始からすべてのマウスに日常的に行うことができます。ネコ、ラットおよびマウスで無傷の脊髄の準備に取り組んで実験者は、確実に1950年の1,2,20,21ため、このような識別技術を使用しています。最適な条件では、記録された運動ニューロンの事実上すべてから逆行性活動電位を誘発することができました。 また、前根刺激は確実に他の運動ニューロン22,23、またはそれらの標的を励起するために使用することができます。レンショウ細胞10,24,25。ここでは、運動ニューロンのSOMAのからの逆行性活動電位記録の形で前根刺激の用途だけでなく、レンショウ細胞の興奮を提示します。

<table><tbody><tr><td>Na-キヌレン酸</td><td>ABCAM</td><td>ab120256</td>は<td>、他のブランド</td></tr><tr><td>KCl</td><td>シグマ</td><td>P3911</td><td></td></tr><tr><td>NaH2PO4</td><td>Sigma</td><td>P5655ス</td><td></td></tr><tr><td>クロース&nbsp;</td><td>シグマ</td><td>S9378</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3&nbsp;</td><td>シグマ</td><td>S6014</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2&nbsp;</td><td>G Biosciences</td><td>R040</td><td></td></tr><tr><td>MgCl<サブ>2</サブ>&nbsp;</td><td>品質生物学的</td><td>351-033-721</td><td></td></tr><tr><td>グルコース&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>G5767</td><td></td></tr><tr><td>アスコルビン酸&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>A5960</td><td></td></tr><tr><td>Na-ピルビン酸&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P2250</td><td></td></tr><tr><td>K-グルコン酸&nbsp;</td><td>シグマ</td><td>P1847</td><td></td></tr><tr><td>EGTA&nbsp;</td><td>シグマ</td><td>E3889</td><td></td></tr><tr><td>HEPES&nbsp;</td><td>Σ</td><td>H4034</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Σ</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>寒天</td><td>Σ</td><td>A9799</td><td></td></tr><tr><td>QX-314</td><td>Alomone</td><td>Q150</td><td></td></tr><tr><td>Mg-ATP</td><td>Σ</td><td>A9187</td><td></td></tr><tr><td>CsOH</td><td>Σ</td><td>232041</td><td></td></tr><tr><td>Na-GTP</td><td>Σ</td><td>51120</td><td></td></tr><tr><td>グルコン酸</td><td>Σ</td><td>G1951</td><td></td></tr><tr><td>水酸化セシウム溶液</td><td>シグマ</td><td>232041</td><td></td></tr><tr><td>KOH</td><td>シグマ</td><td>P5958</td><td></td></tr><tr><td>バンナススプリングはさみ-2.5mm&nbsp;</td><td>FST</td><td>15000-08</td>は<td>、硬膜を切断するためにのみ使用し、骨を切断する場合に損傷を受ける可能性があります</td></tr><tr><td>刺激装置</td><td>AMシステム</td><td>分離パルス刺激装置 モデル2100</td><td></td></tr><tr><td>ビブラトーム</td><td>カムデン</td><td>振動ミクロトーム7000 - モデル7000smz-2</td><td></td></tr></tbody></table>

前根刺激のための斜め脊髄スライスの調製

The Preparation of Oblique Spinal Cord Slices for Ventral Root Stimulation

脊髄切片からの電気生理学的記録は、携帯電話からネットワーク特性に問題の広い範囲を調査する価値のある技術であることが証明されています。私たちは、若いマウス（ - P11 P2）の脊髄の実行可能な斜めのスライスを準備する方法を示しています。この準備では、運動ニューロンは脊髄の前根から出てくる彼らの軸索を保持します。これらの軸索の刺激は脊髄内の運動ニューロンのSOMAの、エキサイティングな運動ニューロン担保に侵入バック伝搬する活動電位を誘発します。逆行性活動電位の記録は、他の識別方法を上回る運動ニューロンのアイデンティティを、特徴付けるため、即時の決定的かつエレガントな方法です。また、運動ニューロンの担保を刺激することは、他の運動ニューロンまたはRとして、脊髄内の運動ニューロンの担保対象を励起するためのシンプルで信頼性の高い方法であります細胞をenshaw。このプロトコルでは、我々は前根刺激に起因する、逆行運動ニューロンのSOMAのからの記録だけでなく、レンショウ細胞の興奮を提示します。

逆行性活動電位を用いた運動ニューロンの同定確認
細胞標的化
運動ニューロンは腹角に存在します（図2Cで赤色に表示）。腹根を形成する軸索束から開始し、束が完全に分散し、大型の細胞（細胞体軸が長く、20 µm以上）が見え始めるまで上に移動します。初期抵抗が3〜4 MΩの電極を用いて、健康的で丸い形態の細胞のホールセル記録を行います。使用した内部液の組成は、140 mM K-gluconate、6 mM KCl、10 mM HEPES、1 mM EGTA、0.1 mM CaCl2、4 mM Mg-ATP、0.3 mM Na2GTPです。KOHでpHを7.3に調整し、蒸留水を加えて浸透圧を285 - ...

若いマウスで脊髄の斜めスライスを準備する方法を示します。この調製により、腹根の刺激が可能になります。

Electrophysiological recordings from spinal cord slices have proven to be a valuable technique to investigate a wide range of questions, from cellular to ...

この手順の全体的な目的は、腹根への刺激が可能な脊髄の斜切片を調製することです。この手法の主な利点は、腹根刺激による運動ニューロンの同定が可能となり、運動ニューロンの軸索側枝によって支配される腹側細胞を研究できることです。私たちは、腹側細胞を刺激するための信頼性の高い方法を必要とした際に、初めてこの手法を考案しました。この手法に不慣れな方は、解剖の各ステップを正確に実行することが困難であるため、苦労する可能性があります。まず、P2からP11のマウスに低ナトリウムACSFを灌流します。マウスを断頭し、背中の皮膚を除去した後、肩から肋骨CAGEに沿って2箇所切開してください。次に、動物の下部から脊柱と肋骨を分離させるため、尾側部分で脊髄をできるだけ低い位置で切断します。脊柱をひっくり返し、肋骨にまだ付着している内臓を取り除きます。脊柱を、シリコンを満たした別の小さなペトリ皿に移します。冷たいACSFを加え、カーボジェンでバブリングさせ、4本の昆虫ピンを用いて組織を背側が上になるように固定します。次に、まず微細剪刀の先端を骨と脊髄の間に挿入し、白質に触れないように注意しながら、吻側端から骨を切断して背側の椎弓切除を行います。ピンセットで既に切断された骨帯を保持しながら、左右交互に切断を行います。次に、小型のピンセットで硬膜を持ち上げ、小型の鋏で吻側から尾側へのアクセスに沿って両側を切断します。硬膜の除去は極めて重要なステップです。時間をかけて徹底的に行う価値が十分にあります。硬膜を除去した後、鈍端のガラスチップを使用して、半分に切断した脊柱によって形成された溝の左側へ脊髄をそっと押し出します。次に、明るい側の腹根と背根を、脊髄への進入点から可能な限り離れた位置で切断します。同様の操作を左側でも行い、常に吻側から尾側に向かって進めてください。解剖後、脊髄を脊柱から滑り込ませるように取り出します。次に、小さな昆虫ピンを用いて、脊髄の背側を上にして固定します。付着している膜を慎重に除去してください。洗浄後、脊髄の両端をトリミングし、方向を標記するためにベント昆虫ピンを脊髄の前端に挿入します。その後、脊髄を氷冷した細胞内液に移します。次に、あらかじめ準備しておいた溶融アガロースを氷と水の混合物で冷却します。温度を測定しながらアガロースを撹拌します。アガロースの温度が38°Cに達したら、昆虫ピンで脊髄を保持し、吻側を下にしてアガロースに浸します。この際、脊髄が壁面に触れず、できるだけ直線的に、尾側をわずかに上にした状態になるようにしてください。アガールの凝固をできるだけ速めるため、ビーカーを氷水に浸しておきます。凝固後、脊髄を含むアガールブロックを、ブロックの底面が脊髄の腰髄部分に対して35度の角度になるように切断します。このとき、背面が底面とは反対側を向くようにしてください。シアノアクリレート系接着剤を使用して、ブロックをビブラトームのチャンバー内に接着します。運動神経核と、そこから出ている腹根との連続性を維持するために、ブロックを正しく固定することが極めて重要です。その後、ブロックをグルコン酸カリウム溶液に浸します。ビブラトームのパラメータを設定します。次に、湾曲しており直径がより大きいことで識別可能な腰髄領域を、350～400 µmの厚さで切片化します。適切な切片を34 °CのACSFに移します。通常、腹根が2 mm以上伸展している適切なスライスが4〜5枚得られます。34 °Cで約30分間置いた後、スライスを室温まで冷却し、記録セッションを開始します。先端径が40〜170 µmのさまざまなピペットを箱にまとめてあらかじめ準備しておきます。セクションピペットを準備するために、テーパー（taper）の長いピペットを選択します。次に、ダイヤモンドナイフを用いて異なる位置に切り込みを入れ、解剖顕微鏡下でピンセットを用いて先端を叩き、各ピペットを折断します。続いて、記録用顕微鏡からチャンバーを取り外し、解剖顕微鏡の下に設置します。吸引刺激電極に固定するのに十分な長さの腹根を含むスライスを選択します。腹根が上を向くようにスライスを固定し、スライス周囲のアガーは残したまま、腹根周囲のアガーを慎重に切り取り、サンプルを固定するためのグリッドを設置します。チャンバーを顕微鏡に戻し、室温で1〜2 mL/minの速度でACSFを記録チャンバーに持続的に灌流させます。ACSFを満たしシリンジに接続したガラスピペットを用いて、腹根のいずれかひとつを吸引します。腹根を十分に刺激するためには、ピペットの先端が腹根に密着している必要があります。目的の細胞型でパッチクランプ記録を行い、前述の通り腹根刺激による効果を記録します。この画像は、ボルテージクランプ法による記録結果を示しています。上段パネルの記録は、下段パネルとは異なる運動ニューロンから得られたものです。上段パネルは、運動ニューロンの抗走行性反応を示しており、赤色は1 Vの刺激、黒色は5 Vの刺激に対する反応です。下のトレースは、20 Vの刺激に対する正伝導性活動電位応答を赤色で、30 Vの刺激に対する応答を黒色で示しています。黒い点は刺激のタイミングを示しています。二方向矢印は、正伝導性スパイクと逆伝導性スパイクの潜時の差を強調しています。ここでは、カレントクランプ記録を示します。上段のパネルは、10 Vおよび15 Vの刺激に対する逆行性応答をそれぞれ赤色と黒色で示しています。下段のパネルは、25 Vおよび40 Vの刺激に対する順行性応答をそれぞれ赤色と黒色で示しています。ここでも、刺激のタイミングと潜時の差が示されています。このレンショー細胞プールの画像は、斜光コンデンサーと20倍対物レンズを用いて取得されました。矢印で示されているように、運動ニューロンの軸索が腹根に合流している点に注目してください。同じ領域のこの画像は、40倍の対物レンズを用いて撮影されました。矢印で示されているのが、Renshaw細胞と思われる細胞です。ここでは、黒い点で示される腹根の刺激後のRenshaw細胞のボルテージクランプ記録を示しています。細胞内液にQX-314を添加することで細胞の発火を抑制し、グリシンおよびGABA応答は、それぞれ3 µMのgabazineおよび1 µMのstrychnineによって遮断しました。赤色のトレースは、灰色のトレースの平均値です。習得すれば、この手法は20分から30分で完了できます。この手順を行う際は、常にサンプルを冷媒に浸しておくことが重要です。このビデオを視聴することで、腹根刺激に適した脊髄の斜切片の作製方法について十分に理解できるはずです。腹根刺激を用いることで、運動ニューロンの同定を容易に確認でき、さらに重要な点として、腹側細胞を確実に刺激することが可能になります。

the-preparation-oblique-spinal-cord-slices-for-ventral-root

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

我々は内側嗅内皮質（MEC）の背腹軸を維持する脳スライスからの調製および電気生理学的記録のための手順について説明します。場所の神経エンコーディングはMEC内の背腹軸の組織を次のようなので、これらの手順は、ナビゲーションやメモリのための重要な細胞メカニズムの調査を容易にします。...

げっ歯類の内側嗅内皮質の背腹軸機構の調査のための矢状スライスの作成

このビデオでは、経脊髄直流刺激下でのラット運動ニューロンのin...

ラットの脊髄運動ニューロンの経脊髄直流刺激

このビデオは、マウス脊髄切片のニューロンネットワーク活動を研究するための微小電極アレイベースのアッセイを示しています。まず、スライスの表在性後角(SDH)からの電気生理学的活動が記録されます。次に、カリウムチャネル阻害剤を導入して脱分極を延長し、ニューロンネットワーク全体で同期したリズミカルな活動をもたらします。...

微小電極アレイを用いたマウス脊髄切片における神経回路の評価

シナプス前放出面膜でのCa2+電流の記録は、Ca2+の侵入と神経伝達物質の放出を正確に理解するための鍵となります。ヤツメウナギの脊髄の急性解離を示し、機能的な孤立した細網脊髄軸索を生成し、個々のシナプス前末端の放出面膜から直接記録できるようにします。...

ヤツメウナギ網様体軸索の急性解離は、個別の機能シナプス前終末のリリース顔膜から録音を有効にする方法

筋肉内への取り込みと分子の逆行性輸送の有効性は、運動端板（MEPs）に対する注射部位の位置に依存します。ここでは、トレーサーの運動ニューロンへの逆行性輸送を最適化するために、骨格筋上のMEPの位置を特定する方法について説明します。...

モーターエンドプレートに沿って筋肉内注射：直接運動ニューロンへのシャトルトレーサーへの低侵襲アプローチ

ここでは、脊髄スライス培養における膠 (SG) ニューロンから作られた全細胞パッチク録音のために不可欠な手順について述べる。このメソッドでは、組み込みの膜特性、シナプス伝達、調査される SG...

膠様質ニューロンの細胞パッチク ランプ記録のため急性脊髄スライスの準備

このプロトコル両方視覚脳幹脊髄標本を通信し、包括的なステップバイ...

リズミカルにアクティブな準備体外新生児齧歯動物脳幹-脊髄損傷で薄くスライス

このプロトコルは、同時のトランス脊髄直流刺激を用いたラット腰椎モトニューロンの生体内細胞内記録について説明する。この方法により、膜の特性を測定し、脊髄のアノーダルまたは陰極分極化の前後にモトニューロンのリズミカルな発火を記録することができます。...

生体内でのトランス脊髄直流刺激時の型同定されたラット脊髄モネニューロンの細胞内記録

ニューロンへの多様なシナプス入力の統合は、自然なタイミングと回路の可塑性のためにすべてのシナプス前核を保存する準備で最もよく測定されますが、脳スライスは通常、多くの接続を切断します。インビボ回路活性を模倣しながら、インビトロ実験能力を維持する修飾脳スライスを開発しました。...

生体内ニューロン回路接続を模倣するためのインビトロウェッジスライスの準備

脊髄後角におけるネットワークレベルの侵害受容活性を調査するための微小電極アレイ技術と4-アミノピリジン誘発化学刺激の併用が概説される。...

微小電極アレイを用いた脊髄侵害受容回路におけるネットワーク活動の記録

このプロトコルは研究者が脊髄を分け、細胞生存率を同時に維持することの彼らの技術を改善するのを助けることができる高い時空間決断の脊髄の刺激(SCS)への運動ニューロンの電気応答を調査するのにパッチ・クランプを使用して方法を記述する。...

脊髄刺激時の運動ニューロンにおける全細胞パッチクランプ記録のための脊髄スライスの ex vivo 調製

学ぶ前根刺激のための斜め脊髄スライス調製法。新生マウスを用いて運動ニューロンの同定と軸索側枝が支配する腹側細胞の研究を可能にする神経生理学的手法です。

前根刺激のための斜め脊髄スライスの調製

さらに動画を探す