Phagosome Migration and Velocity Measured in Live Primary Human Macrophages Infected with HIV-1

Gabrielle L&#234;-Bury; Chantal Deschamps; Audrey Dumas; Florence Niedergang

doi:10.3791/54568

JoVE Journal
Immunology and Infection

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JoVE Journal Immunology and Infection

Phagosome Migration and Velocity Measured in Live Primary Human Macrophages Infected with HIV-1

HIV-1に感染したライブ初代ヒトマクロファージで測定ファゴソームの移行と速度

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07:32 min

September 5, 2016

DOI: 10.3791/54568-v

Gabrielle Lê-Bury¹, Chantal Deschamps¹, Audrey Dumas¹, Florence Niedergang¹

¹Inserm U1016, Institut Cochin, CNRS UMR 8104, Université Paris Descartes, Sorbonne Paris Cité

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

ヒト免疫不全ウイルス(HIV)1型に感染した、または感染していない生細胞の細胞中心に向かって移動するファゴソームの速度を測定する方法を、蛍光感染細胞を特定するためのスピニングディスク共焦点蛍光顕微鏡とファゴソームを検出するための明視野顕微鏡を用いて説明します。

この解析の全体的な目標は、単純な手動追跡法を使用して、HIV-1 感染マクロファージのファゴソーム速度を定量化することです。このプロトコルの利点は、移動または変形する可能性のあるセル内のオブジェクトのグループの相対的な動きを計算する簡単な方法を提供することです。この方法は、GFP陽性の感染マクロファージにおけるファゴソームの動きに関する洞察を提供しますが、蛍光タグ付き細胞の他の細胞間コンパートメントにも使用できます。

ヒト単球由来マクロファージに感染させ、ヒツジ飼育の血液細胞をオプソナイジした後、テキストプロトコルに従って、37°Cの加熱チャンバーを備えたスピニングディスク顕微鏡などの共焦点イメージングシステムを使用して、二酸化炭素を含む食作用アッセイを設定します。実験に先立ち、加熱チャンバーをオンにして、顕微鏡ステージを摂氏37度に加熱します。次に、顕微鏡とコンピューターの電源を入れ、イメージングソフトウェアをロードします。

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