The Isolation, Differentiation, and Quantification of Human Antibody-secreting B Cells from Blood: ELISpot as a Functional Readout of Humoral Immunity

Shiang-Jong Tzeng

doi:10.3791/54582

単離、分化、および血液からヒト抗体を分泌するB細胞の定量化：体液性免疫の機能読み出しなどのELISpot

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Immunology and Infection

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The Isolation, Differentiation, and Quantification of Human Antibody-secreting B Cells from Blood: ELISpot as a Functional Readout of Humoral Immunity

単離、分化、および血液からヒト抗体を分泌するB細胞の定量化：体液性免疫の機能読み出しなどのELISpot

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December 14, 2016

DOI: 10.3791/54582-v

Shiang-Jong Tzeng¹

¹Graduate Institute of Pharmacology, College of Medicine,National Taiwan University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

ヒト末梢血は、体液性免疫応答の評価に一般的に使用されます。ここでは、末梢血からヒトB細胞を単離する方法、培養中のヒトB細胞を抗体(Ab)分泌B細胞(ASC)に分化させる方法、およびELISpotアッセイによる総IgM-およびIgG-ASCの列挙方法について説明します。

このELISpot法の全体的な目標は、血液中のヒト抗体分泌B細胞の定量を可能にすることです。この方法は、B細胞の免疫学とワクチン研究に関する生物医学分野の重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、抗体分泌B細胞を単一細胞レベルで検出および測定できることです。

その手順を実演するのは、私の研究室の大学院生であるTsung-Chih Tsengです。正中肘静脈から10 mlの血液サンプルを採取した直後に、カリウムを補給したEDTAを含む15 mlチューブにチューブを反転させ、血栓の形成を防ぎます。次に、オートクレーブ処理した赤血球溶解バッファー35 mLを細胞に加え、室温で5分間インキュベートします。

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