2016年12月18日
主催脳の切断手順は決定的な神経病理学的診断と特定の神経精神現象を相関させる必要があります。脳挿し木は、様々な臨床学術不測の事態に基づいて異なる方法で実行されています。このプロトコルは、ヒトの脳の病理における半球の違いを調査し、現在および将来の生体分子/ニューロイメージング技術を最大限にするために、対称bihemispheric脳切断手順を説明します。
この手順の全体的な目標は、さまざまな脳疾患の重症度、臨床病理学的病期分類、および半球分布を評価するために、人間の脳の両半球から対称的に解剖された一連の脳領域を体系的に収集および分析することです。この方法は、神経病理学分野の重要な質問に答えるのに役立ち、詳細な臨床病理学的およびイメージング病理学的相関のための定性的および定量的な神経病理学的データの体系的に整理されたコレクションを提供します。この技術の主な利点は、病理学的プロセス自体に関連する関連データ、および各大脳半球の組織機能に特化した側面をもたらすことにあります。
テキストプロトコルに従って死後のヒト脳組織を固定した後、前頭極を研究者の反対側に向けて脳を平らな面に置きます。脳の向きを調整して、大脳全体のすべての皮質回と溝を完全かつ明確に視覚化できるようにします。髄膜異常、巨視的半球の非対称性、巨視的組織への忠誠、先天性奇形、血管の異常、または脳表面のその他の異常または異常な症状について組織を調べます。
前頭両極を研究者から遠ざけ、半球の表面的な側面を研究者に向け、マクロの異常の可能性を文書化し、クリニック、神経、解剖学的、および切断後の考慮事項を考慮するために必要なだけ多くのデジタル写真を撮ります。脳に対して垂直にデジタル写真を撮り、皮質表面全体を捉えます。次に、インクまたは色付きの針を使用して、中央皮質回の前後に印を付けます。
次に、前頭両極を反対側に向けたまま、脳を180度反転させ、脳幹の出口と入口のレベルにある脳血管系と脳神経に特に注意を払いながら、脳の基部を注意深く検査します。嗅球と嗅球と嗅管は、極度の虚弱による組織の裂傷を避けるために、特別な注意を払って管理してください。脳に対して垂直にデジタル写真を撮り、皮質と脳幹の表面全体を捉えます。
脳の基部を向き、メスを使って、大脳の基部にできるだけ近い橋の上部で脳幹を横方向に切ります。黒質の蒼白がないか注意深く検査し、他の隣接する構造物を検査します。オーディオ録音デバイスを使用して、正常な脳と比較して脳の異常な外観に注意してください。
ここでは、左半球と右半球の嗅球と管を解剖しています。脳を裏返し、鋭利なナイフを使用して、前頭後頭の方向をたどり、内側の縦裂を介して脳梁を中央に切断することにより、2つの半球を分離します。各半球の各辺に異常がないか調べます。
皮質表面全体をキャプチャするために脳に対して垂直に含む、必要なだけ多くの写真を撮った後、2つの半球を内側に平らに置き、前頭葉が研究者から離れて向き、中心が接触するようにします。鋭利なナイフを使用して、前頭極から始まる両方の大脳半球を手動で切断し、半球の全長にわたって後頭極に向かって移動して、脳組織の厚さ1センチメートルのスラブを2つのシリーズにします。脳のスラブを解剖学的に整理された対称的な順序で平らな白い表面に配置し、定規を印刷して撮影します。
スラブの冠状表面が見えることを確認し、直接目の検査やデジタル撮影を行います。両面にミリメートルグリッドが印刷された切断面を使用して、脳の構造、サイズ、および起こりうる異常をより正確に特定します。冠状表面が見えた状態で、皮質表面全体をキャプチャするために垂直にデジタル写真を撮ります。
正常な脳と比較して、脳の異常な側面をメモしてください。次に、鋭利なメスを使用して、確立された各脳領域の脳組織の小さな長方形のブロックを手動で解剖します。この表に記載されている提案された脳領域収集スキームに従ってください。
ADがAlzheimer's Disease Study、16が剖検が行われた年、0001がプログレッシブアクセッション検体番号である各ケースのランダムまたは半ランダムな番号を生成することにより、ヒストカセットをラベル付けするための識別コードを作成します。各組織ブロックを別々のヒストカセットに入れます。切断された脳全体と関連するヒストカセットについて、前に説明したのと同じ数のデジタル写真を撮ります。
写真一式を撮った後、DNA抽出と遺伝子解析のために2〜5ミリメートルの組織片をパンチします。最後に、脳組織ブロックを含むすべてのhistoカセットを以前に使用したのと同じタイプの固定液に浸し、テキストプロトコルに従って組織を処理します。この表は、ブレインバンクに収集された一連のヒト脳に対して実行される対称的二半球脳切断手順を使用したいくつかの予備的な半定量的データを示しています。
予備データによると、高齢被験者のほとんどの対照脳は、実際にはβ-A神経突起プラークとタウ神経原線維変化に対して陽性であり、β-A神経突起プラークの不溶性レベルは、左側の嗅内皮質と海馬で右側の同じ脳領域と比較して高かったことが示されています。このテクニックを習得すると、固定脳の場合は1時間、適切に実行されれば、新鮮な脳の場合は2時間で完了できます。この手順を試行している間は、提案された切断スキームに従って、正確な人間の解剖学的知識に基づいて両方の半球から各脳領域を収集することを覚えておくことが重要です。
この手順に続いて、DNA、RNA、タンパク質抽出などの他の方法を実行して、特定の脳疾患の特定の半球の特定の脳領域にある特定の遺伝子の活性化レベルなどの追加の質問に答えることができます。この手法は、拡散するたびに、神経病理学、臨床病理学、画像病理学の相関関係の分野の研究者が、さまざまな神経精神疾患の半球関連の病理学的側面を探求するための道を開くことになります。このビデオを見た後、人間の脳の両半球から特定の解剖学的領域を収集して、疾患の重症度、疾患の病理学的段階、およびさまざまな神経病理学的プロセスの半球分布を評価する方法について十分に理解できるはずです。
人間の脳を扱うことは、複雑な神経解剖学的回路を持ち、場合によってはさまざまな病気を持つ人の歴史に取り組むことであり、刃物、メス、ホルマリンは細心の注意を払って取り扱わなければならないことを忘れないでください。
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本プロトコルでは、ヒト脳病理における半球間の差異を調査することを目的とした、対称的な両半球脳切除手順について概説します。これにより、定性的および定量的な神経病理学的データの収集が可能となり、臨床所見および画像診断と病理学的所見との相関性を高めることができます。
対称的な両半球脳切断により、両大脳半球から神経病理学的データを系統的に収集することが可能となり、神経精神疾患のターゲットバリデーションにおけるメカニズム的なリスク低減が促進されます。このアプローチは、解剖学的に整理された組織を提供することで、臨床的フェノタイプと半球特異的な病理との相関を可能にし、予測の信頼性を高め、中枢神経系(CNS)創薬における初期の探索決定に有用な情報を提供します。
この手法は、仮説駆動型の研究に不可欠な解剖学的に制御されたヒト脳組織を提供することで、ターゲットの検証から前臨床研究に至る創薬の連続的なプロセスに組み込まれます。