Name: 研究のための方法論 B。枯草菌バイオフィルム (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 17 s
Description: 学ぼうBacillus subtilisバイオフィルムの再現性のある実験手法を確立し、走査型電子顕微鏡を用いて小分子阻害剤の効果を定量的・定性的に評価する方法。この手法は他のバイオフィルム形成菌への応用も可能です。

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電子顕微鏡イメージングは、ワイツマン科学研究所の電子顕微鏡ユニットで行われ、一部はアーヴィング・アンド・チェルナ・モスコウィッツ・センター・フォー・ナノ・バイオ・ナノイメージングの支援を受けました。この研究は、ISF I-CORE助成金152/1、ダン・ケイン夫妻、ロイス・ローゼン氏、イェダ・セラ研究助成金、ラーソン慈善財団、ルース・アンド・ハーマン・アルバート・スカラーズ・プログラム・フォー・ニュー・サイエンティスト、イルゼ・カッツ材料科学研究所および磁気共鳴研究助成金、保健省の代替研究方法助成金によっても支援されました。 そしてフランス-イスラエル協力-マイモニデ-イスラエル研究プログラムによる。IKGは、Rowland and Sylvia Career Development Chairを受賞しています。

著者らは開示するものは何もない。

枯草菌フォーム堅牢で高度に構造化されたバイオフィルムの両方の液体中（ペリクル）と固体培地上（コロニー）。したがって、特定のバイオフィルム阻害剤の作用の様式を特徴付けるための理想的なモデル生物として働きます。固形培地に、細胞は、エッジに、中心から放射状にシワのようなペリクルにおいて明らかではない独特の機能を持ったものと多細胞構造を形成します。したがって、ペリクルおよびコロニーは、Bを研究するための補完的なシステムであります枯草菌の多細胞。 この研究の目的は、Bを開発することですバイオフィルム（ペリクルおよびコロニー）阻害のための枯草菌のモデルシステム。いくつかのステップは、バイオフィルムの外乱エッセイの再現のために重要です。最初の重要なステップは、バイオフィルム形成に対する効果はプランクトンライフスタイルで成長した細菌に対する一般毒性によるものではないことを確認することです。これは、所定の濃度の効果を比較することによって考慮することができますプランクトンの成長にこの分子の効果...

多細胞細菌群集は、自然と人為的な環境で重要な役割を果たし、かつ有益であるか、または非常に有害であり得ます。これらの多細胞コロニーを、個々の細胞が自己生産細胞外ポリマー物質（EPS）マトリックス中に埋め込まれている前記バイオフィルムとして知られています。 EPSは強く、彼らが植民地化の表面に細胞を接着します。彼らは、機械的および化学的な力に対するシールドとして機能し、セルラー通信1を容易に 、隣接するセルの間の密接な接触を作成します。バイオフィルムは、細胞が高度に制御使用差別コミュニティ、と見ることができる、コミュニティ内だけでなく、種2-5全体で彼らの活動を調整するためのプロセスを画策。バイオフィルム状態への成長のプランクトン、自由生活モードからの移行は、多くの場合、発達過程と関連しています。良い例は、グラム陽性土壌細菌の枯草菌（Bacillus subtilis）、したがってundomeですsticated株は、バイオフィルム形成につながる発達段階を研究するための堅牢なモデル生物としての役割を果たす。この細菌では、運動性の細胞は、特殊なタスク4を実行目立つ多細胞構造に自分自身を整理します。細胞の一つのグループは、マトリックス・プロデューサーはエキソポリサッカライド6を分泌し 、アミロイドタンパク質TASA 7,8、および表面疎水性タンパク質BslA 9,10;これらの全ては、EPS 11-13の組み立てに参加しています。 自然と人為的ニッチでのバイオフィルムの豊かさと、彼らが引き起こす可能性が推定される致命的なダメージを考えると、それらの形成を防止するための方法を見つけることが急務です。小分子阻害剤は、バイオフィルム形成に関与する新たな調節経路、酵素および構造タンパク質の発見を補助し、それによって多コミュニティアセンブリの複雑なプロセスにおける洞察を促進することができます。 B.として枯草菌バイオのためのよく研究モデルであります成膜14,15は、様々なバイオフィルム阻害剤の効果を評価するために使用することができます。この研究は、小分子阻害剤に対するバイオフィルムの反応を評価するための主要な4つの基本的な方法に取り組みます。まず、これらの阻害剤はバイオフィルム特有の目標を持っていることを確認するために、バイオフィルム形成に及ぼす影響からプランクトンの成長への影響の分離が重要です。ほとんどの抗菌剤は、それらのプランクトン増殖期の細胞を標的とするが、バイオフィルムのライフスタイルをターゲット分子はまれです。プランクトンの成長に影響を及ぼさない分子は毒性がないとして加えて、彼らは抗生物質耐性変異体16に有利な選択圧を減らすことができます。バイオフィルムは、D-アミノ酸または他の特定の細胞壁干渉分子で処理した場合、例えば、それらは、いずれの乱れまたは分解が、これらの阻害剤は、軽度に浮遊成長12,17に影響を及ぼす。これとは対照的に、多くの抗生物質は劇的リットルで、プランクトンの成長を損ないますittleまたはバイオフィルム形成17に影響はありません。 第二に、小分子の効果を研究するための一貫性と堅牢な実験的な枠組みを確立することが重要です。我々は、小分子阻害剤の有効濃度範囲は、前培養条件およびこれらの小分子阻害剤の効果を研究するために使用される実験に感受性であったことを観察しました。各種レポート、Bを勉強特に浮遊細菌のバイオフィルム12,17-19 - 枯草菌は、D-アミノ酸がペリクルの形成を阻害する濃度範囲の変化を明らかにしました。ここに示された結果は、以下の要因が活性濃度範囲の差を考慮することを示唆している：前培養条件（後期静止20増殖期対対数12,17）、前培養の条件で使用される増殖培地は、（リッチ、定義された対未定義[ルリアブロス、LB] [グルタミン酸ナトリウム- グリセロール、MSgg]）、接種率、特に接種前に前培養培地を除去します。静的ペリクル成長の温度は、小分子阻害剤D-ロイシン、本研究で使用した代表D-アミノ酸の活性範囲においてそれほど重要な役割を示しました。 最後に、一度バイオフィルムは、特定のバイオフィルム阻害剤は、堅牢かつ有益な方法は、バイオフィルムのフィットネスにこれらの阻害剤の効果を特徴付けるために必要とされるで処理されます。ここでは、独立して小分子阻害剤の効果を特徴づけるための2つの方法が詳細に記載されている：（1）バイオフィルムコロニー中で単一細胞に作用し、抗菌剤に対する耐性。自由生活細菌21-23と比較した場合、バイオフィルム中の細胞は、典型的には、抗生物質に対してより耐性があります。この現象は多因子ですが、抗生物質の侵入を低減するためのEPSの能力は、多くの場合、魅力的な説明を24としました</suP&gt;。この方法は、抗菌性物質への曝露後の予め確立されたバイオフィルム細胞の生存率を評価します。 （2）バイオフィルムコロニーアーキテクチャへの影響を、大から小スケールへ。バイオフィルムコロニーは、それらの三次元構造およびEPSの存在によって特徴付けられます。小スケール（μm）とし、走査型電子顕微鏡を利用して、細胞形態、バイオフィルムコロニー構造とEPSのアーキテクチャ及び存在量の変化が大きい（ミリメートル）から可視化することができます。

<table><tbody><tr><td>ルリアブロス、レノックス</td><td>Difco</td><td>240230</td><td></td></tr><tr><td>Bacto Agar</td><td>Difco</td><td>214010</td><td></td></tr>リン酸<tr><td>カリウム一塩基性&nbsp;</td><td>シグマ、136.09 g /</td><td>molP0662-500G</td><td></td></tr><tr><td>リン酸二塩基性カリウム&nbsp;</td><td>フィッシャーサイエンティフィック、174.18 g / mol</td><td>BP363-1</td><td></td></tr><tr><td>3-(N-モルフォリノ)プロパンスルホン酸</td>フィ<td>ッシャーサイエンティフィック、209.27 g / mol</td><td>BP308-500</td><td></td></tr>塩化<tr><td>マグネシウム六水和物&nbsp;</td><td>メルク、203.30 g/mol&nbsp;</td><td>1.05833.0250</td><td></td></tr><tr><td>塩化カルシウム無水物</td><td>J.T. Baker, 110.98 g/mol</td><td>1311-01</td><td></td></tr><tr><td>塩化マンガン(II) 四水和物</td><td>Sigma, 197.91 g/mol</td><td>31422-250G-R</td><td></td></tr><tr><td>塩化鉄(III) 六水和物&nbsp;</td><td>シグマ、270.30 g/月)</td><td>F2877-500G</td><td></td></tr><tr><td>無水塩化亜鉛&nbsp;</td><td>Acros Organics、136.29 g / mol</td><td>424592500</td><td></td></tr><tr><td>チアミン塩酸塩</td><td>シグマ、337.27 g / mol</td><td>T1270-100G</td><td></td></tr><tr><td>L-トリプトファン</td>フィ<td>ッシャーサイエンティフィック、204.1 g / mol</td><td>BP395-100</td><td></td></tr><tr><td>L-フェニルアラニン</td><td>シグマ、165.19 g / mol</td><td>P5482-100G</td><td></td></tr><tr><td>L-スレオニン</td><td>シグマ、119.12 g / mol</td><td>T8625-100G</td><td></td></tr><tr><td>無水グリセロール</td><td>Bio-Lab Itd</td><td>712022300</td><td></td></tr><tr><td>L-グルタミン酸一ナトリウム塩水和物&nbsp;</td><td>シグマ、169.11 g/mol</td><td>G1626-1KG</td><td></td></tr><tr><td>D-ロイシン</td><td>シグマ、169.11 g/mol</td><td>855448-10G</td><td></td></tr><tr><td>エタノール無水ガ</td><td>ドット</td><td>830000054</td><td></td></tr><tr><td>カミソリ刃</td><td>エジソン</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>円形セルロース濾紙</td><td>Whatman、90 mm</td><td>1001-090</td><td></td></tr><tr><td>グルタルアルデヒド</td><td>EMS (電子顕微鏡科学)、25% 水</td><td>16220</td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド&nbsp;</td><td>EMS、16%水</td><td>15710</td><td></td></tr>カ<tr><td>コジル酸ナトリウム</td><td>メルク、214.05 g / mol&nbsp;</td><td>8.2067</td><td></td></tr>塩化<tr><td>カルシウム2水和物</td><td>メルク、147.02 g / mol&nbsp;</td><td></td><td></td>1172113</tr><tr><td>スタブアルミマウント</td><td>EMS、スロットヘッド</td><td>75230</td><td></td></tr><tr><td>カーボン粘着テープ</td><td>EMS</td><td>77825-12</td><td></td></tr>シェー<tr><td>カー37&deg;C</td><td>ニューブランズウィック サイエンティフィック Innowa42</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>遠心分離</td>機 <td>エッペンドルフ テーブルトップ遠心分離機 5424</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>デジタル ソニファイア、モデル 250、ダブル ステップ Microtip</td><td>Branson</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>インキュベーター 30 &deg で使用。C</td><td>バイン</td><td>ダーNA</td><td></td></tr><tr><td>インキュベーター23°;C</td><td>バイン</td><td>ダーNA</td><td></td></tr><tr><td>フィルターシステム、500 ml、ポリスチレン</td><td>Cornig Incorporated</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>ロータリーシェーカー - Orbitron Rotatory II</td><td>Boekel</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>S150スパッタコーター&nbsp;</td><td>Edwards</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>CPD 030臨界点乾燥機</td><td>BAL-TEC</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>環境走査型電子顕微鏡</td><td>XL30 ESEM FEG Philips(FEI)</td><td>NA</td><td></td></tr></tbody></table>

研究のための方法論<em&gt; b。枯草菌</em小分子バイオフィルム阻害剤を特徴付けるためのモデルとしての&gt;バイオフィルム

Methodologies for Studying B. subtilis Biofilms as a Model for Characterizing Small Molecule Biofilm Inhibitors

この研究は、D-アミノ酸のような小分子バイオフィルム阻害剤がBacillus subtilisバイオフィルムの開発と回復力に与える影響を研究するためのさまざまな方法論を評価します。まず、低分子阻害剤がプランクトン成長に及ぼす影響とバイオフィルム形成への影響を分離するために、バイオフィルム特異的な標的を持つ低分子阻害剤を選択する方法を提示する。次に、接種条件が多細胞浮遊枯草菌培養物の低分子阻害剤に対する感受性にどのように影響するかに焦点を当てます。この結果は、D-アミノ酸などの阻害剤の報告された効果の不一致は、培養前条件の一貫性がないためであることが示唆されています。さらに、抗菌物質に対するバイオフィルム耐性に対する低分子処理の寄与を評価するために最近開発されたプロトコルが記載されている。最後に、走査型電子顕微鏡(SEM)技術を提示して、枯草菌バイオフィルム内の細胞とその周囲の細胞外マトリックスの3次元空間配置を分析します。SEMは、3次元バイオフィルムの構造とマトリックステクスチャへの洞察を促進します。ここで説明する方法の組み合わせは、バイオフィルム阻害剤の存在下と非存在下でのバイオフィルム発生の研究に大いに役立ち、これらの阻害剤の作用機序に光を当てることができます。

ペリクルアッセイは、Bの高度に制御し、動的プロセスを研究するための1つの方法であります枯草菌の多細胞。この他にも、ペリクルアッセイは、1つの実験において、単一の細胞培養multidishプレートに予め始動条件または小分子のいずれかの濃度の範囲を試験するのに適しています。しかし、B.枯草菌ペリクルの形成は前培養条件に敏感である（ 例えば 、前培養の増殖培地と成長期）、接種率と前培養培地を除去します。したがって、我々は、最初に、私たちは、D-ロイシンによりペリクル阻害を再現させて実験をスクリーニングしました。我々の結果は、細胞を振盪しながら4時間、37℃で3 mlのLB中で中期対数増殖期（単一コロニーを未定義、リッチLB培地中で前培養された場合、D-ロイシンによる再現ペリクル阻害が得られることを示しています）、スピンダウンし、1の前に定義されたMSgg培地に再懸濁：1,000 inoculatイオン（ 図3A）。細胞は2時間、再希釈1のための1ミリリットルLBで中期対数増殖期（単一コロニーにMSgg培地中で増殖させたとき：100 MSg...

この研究は、バイオフィルム阻害剤とそのBacillus subtilis多細胞性への影響を研究するための再現可能な方法論の開発を示しています。

研究のための方法論<em&gt; B。枯草菌</em小分子バイオフィルム阻害剤を特徴付けるためのモデルとしての&gt;バイオフィルム

This work assesses different methodologies to study the impact of small molecule biofilm inhibitors, such as D-amino acids, on the development and ...

細菌バイオフィルムは、内部に存在する細菌を環境的な刺激や抗菌剤から保護するため、ヒトの健康において重要な役割を果たしています。本手順の目的は、バイオフィルム形成に対する低分子阻害剤の効果を評価するためのモデルシステムを開発することでした。これらの手法は、バイオフィルム研究分野において、バイオフィルム形成を特異的に標的とする低分子阻害剤を選定するために不可欠なツールセットの構築に寄与します。これらの手法の主な利点は、一貫性のある堅牢な実験的枠組みから開始でき、バイオフィルム特異的阻害剤の作用機序について定量的および定性的な知見を得られる点にあります。これらの手法は Bacillus subtilis のバイオフィルムに関する知見を提供できますが、Pseudomonas aeruginosa や植物病原菌である Xanthomonas citri など、他のバイオフィルム形成細菌にも適用可能です。走査型電子顕微鏡は、細胞外マトリックスの観察が可能であり、単一細胞レベルの解像度が得られるため、低分子化合物がバイオフィルム形成に及ぼす影響を分析する上で不可欠です。まず、適切な単一コロニーを選択し、3 mLのLBブロスに転移させます。このスターター培養物を振盪インキュベーターに入れ、37 °Cで4時間培養します。培養後、スターター培養物を1.5 mL分取り出し、4分間遠心分離します。上清を慎重に取り除き、ペレットを1.5 millilitersのMSgg培地で再懸濁します。ペリクルを育成させるため、12ウェル細胞培養プレートの各ウェルに3 millilitersのMSggを添加して準備します。エッジエフェクトを避けるため、これらのウェルのいくつかに、低分子阻害剤を濃度範囲に沿ってプレート上の各所に分散させて添加したMSggを加えます。再懸濁したスターター培養液の600 nmにおける光学密度を測定します。培養液のOD値は0.6から1の間である必要があります。これはシステムの堅牢性にとって極めて重要です。培養プレートの各ウェルに、再懸濁したスターター培養液を 3 µL ずつ接種します。次に、プレートを 23 °C で3日間、静置条件下で培養します。その後、プレートをインキュベーターから取り出し、ペリクルを観察します。バイオフィルムを育成させるため、テンプレートを用いて、乾燥させた8.5 centimeterの1.5%Agar MSggプレート上に、洗浄前のスターター培養液1.5 microlitersを4箇所に対称的に滴下します。プレートを移動させる前に、滴下した液が培地に吸収されるまで待ちます。その後、プレートを30 degrees Celsiusで3日間培養します。均一な照明の下で双眼鏡を用い、バイオフィルムのコロニーが形成され、三次元的なしわ状構造ができていることを確認します。まず、清潔なカミソリを用い、テンプレートに従ってバイオフィルムのコロニーを2等分に切断します。清潔なスパチュラでコロニーの半分を慎重にすくい上げ、500 µLのPBSが入った1.5 mLマイクロチューブに移します。コロニーの後半分を採取し、500 µLの50% ethanolを含むマイクロ遠心チューブに移します。これらは滅菌剤に対する耐性を評価するために使用します。その後、同様にD-lysine処理したコロニーの前半分を採取し、PBSに入れます。次に、このコロニーの後半部分を取り出し、エタノールに移します。バイオフィルムの半分を含むすべてのチューブを室温で10分間インキュベートします。その後、18,000 ×g で5分間遠心分離します。ピペットを使用して、上清を慎重に除去します。300 µLのPBSを加え、マイクロチップソニケーターを用いて低出力設定で細胞をソニケーションします。さらに700 µLのPBSを加え、最終容量を1 mLにします。次に、PBSを用いて10⁻⁷までの段階希釈を行います。希釈液のひとつから100 µLを分取し、1.5% Agar LBプレートに接種します。サンプルごとに、他の2つの希釈段階についてもこの手順を繰り返します。ガラスビーズを用いて接種物を塗り広げ、その後、プレートを30 °Cで一晩インキュベートします。プレートを観察し、コロニー形成単位（CFU）をカウントします。1 mLあたりのCFU値を算出した後、PBS処理群とエタノール処理群における生存率（％）を算出します。サンプルの固定を開始するために、まず、目的のバイオフィルムコロニー数に対して十分な量の新鮮な固定液を準備します。各ペトリ皿に5 mLの固定液を慎重に加え、コロニーに直接ピペッティングしないようにしてください。コロニーがアガーから離れ、浮き上がります。プレートをパラフィルムで慎重に密閉し、室温のロータリーシェーカーで2時間インキュベートします。その後、プレートを4°Cで一晩保存します。真空ポンプに接続したパスツールピペットを用いて、固定液をゆっくりと除去します。100 nM sodium cacodylate、5 mM calcium chloride バッファーを10 mL加え、バイオフィルムを洗浄し、5分間インキュベートします。パスツールピペットを用いて、アガープレートからバイオフィルムコロニーの中心部を慎重に剥離させます。コロニーを風乾させるため、セルロースフィルターペーパーを4等分に切り、そのうちの1片を100% ethanolに浸します。浮遊しているバイオフィルムのコロニー1つを、慎重にペーパー上に移します。このペーパーを、乾いたフィルターペーパーを敷いたペトリ皿に入れます。その後、皿に蓋をし、化学薬品用フード内で一晩乾燥させます。バイオフィルムコロニーの形態を保存するためには、浮遊バイオフィルムの下をセルロースペーパーで完全に覆うことが重要です。ペーパーに乗せた後は、バイオフィルムを再調整することはできません。電子顕微鏡用スタブにカーボンテープを貼り、ピンセットを用いてバイオフィルムコロニーを慎重にスタブ上へ転写します。各コロニーをカーボンテープで薄いブリッジ状に接続してスタブに固定した後、スタブをデシケーター内に24時間、または必要になるまで保存します。この段階のバイオフィルムは非常に脆く、破損しやすいため、この工程には慎重かつ正確な操作が求められます。バイオフィルムにひび割れが生じないように、十分な量をマウントすることが重要です。検査当日、コロニーを金パラジウムスパッタコーターに入れます。サンプルを60度の角度で2分間コーティングします。この工程を2回繰り返し、その間にサンプルを120度ずつ回転させます。最後に、上部から3分間、1回だけサンプルのコーティングを行います。これで、サンプルをSEMで観察する準備が整いました。これらの画像は、バイオフィルム誘導MSgg培地で培養したB.subtilisのペリクル形成を示しています。低分子阻害剤であるD-lysineを添加することで、ペリクル形成が抑制されます。また、阻害剤の濃度が高くなるにつれて、ペリクル形成量は相関して減少します。このグラフは、D-lysine阻害剤で処理した、あるいは未処理のバイオフィルムコロニー内の細胞の生存率に対する、エタノール曝露の影響を示しています。D-リシンで処理し、50%エタノールに10分間さらしたコロニーでは、未処理の画分と比較して生存率が劇的に低下した。俯瞰の双眼鏡画像からは、D-リシンの存在下で増殖したコロニーは全体的に小さく、未処理のものよりもしわの形成が不顕著であることがわかる。臨界点乾燥させたバイオフィルムコロニーの走査型電子顕微鏡画像により、バイオフィルムの発達が変化していることがさらに明らかになった。細胞外ポリマー物質マトリックス（EPS）は、未処理のサンプルではクモの巣のような形態を示していましたが、処理済みのサンプルでは組織化が進んでいない様子が見られました。最終的に、個々の細菌細胞の解像度で観察したところ、処理された細胞は外見上伸長しており、EPSによる被覆が少なく、未処理の細胞ほど隣接する細胞と強固に結合していないことが示されました。この手順を実施する際は、バイオフィルム阻害剤の研究において、再現性のある結果を得るためには一貫した枠組みを設定することが不可欠であるという点に留意することが重要です。適切に実施すれば、習得後は1週間以内にバイオフィルム抑制能に関する低分子スクリーニングを完了させることができます。本手順に続き、単一のバイオフィルム細胞における遺伝子発現の調査などの他の手法を実施することで、低分子阻害剤の標的に関するさらなる知見を得ることが可能です。このビデオを視聴することで、特定のバイオフィルム阻害剤がバイオフィルムの形成および抗生物質耐性に及ぼす全体的な影響を分析する方法について、十分に理解できるはずです。

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

出典:Tay, S. B.ら。工学的クォーラムクエンチングラクトナーゼを用いた病原性バイオフィルムの抗病原性破壊。 J. Vis.

病原性細菌における酵素誘発バイオフィルム抑制の定量化

出典: テイ、S. B. et.al。 工学的クォーラムクエンチングラクトナーゼを用いた病原性バイオフィルムの抗病原性破壊。 J. Vis. Exp.

酵素媒介によるバイオフィルム形成阻害の顕微鏡的評価

出典:Bucher, T.ら。B. subtilisバイオフィルムを小分子バイオフィルム阻害剤の特性評価モデルとして研究する方法。J. Vis. Exp.(2016年)このビデオでは、 Bacillus subtilis...

Bacillus subtilisにおけるペリクル形成に対する阻害剤の効果評価

出典: Bucher, T.ら 。 B. subtilisバイオフィルムを小分子バイオフィルム阻害剤の特性評価モデルとして研究する方法。 J. Vis. Exp.

バイオフィルムマトリックスの完全性を評価するためのエタノール耐性アッセイ

出典: Bucher, T.ら 、 『B. subtilisバイオフィルムを小分子バイオフィルム阻害剤の特徴付けモデルとして研究する方法論』。 J. Vis.

形態学的解析のための細菌バイオフィルムコロニーの準備

クォーラムクエンチング酵素は、抗生物質耐性とバイオフィルム形成に関連する病原性因子と遺伝子の発現を防ぐことにより、耐性を生じさせるリスクなしに病因を軽減できる抗毒性および抗菌性の選択肢です。本研究では、細菌のバイオフィルム破壊におけるクォーラムクエンチング酵素の有効性を実証した方法を報告する。...

エンジニアクォーラム焼入れラクトナーゼを使用して、病原性バイオフィルムの抗病原性破壊

ほとんどの細菌感染症はバイオフィルムを生成します。その環境のおかげで、バイオフィルム関連細菌はしばしば表現型的に薬剤耐性があります。したがって、バイオフィルム中の細菌を殺す新しい抗菌分子は、高い優先順位です。バイオフィルムの根絶に有効な抗菌化合物を迅速にスクリーニングするためのアッセイを確立します。...

バイオフィルム関連をターゲット<em&gt;黄色ブドウ球菌</em&gt;レサズリン基づく薬剤感受性アッセイを使用して

バイオフィルム感染症は、化学療法に対して高い耐性を示します。バイオフィルムの複雑さを捉える単一のアッセイはありません。代わりに、補完的なアッセイが必要です。生存率、バイオマス、およびバイオフィルムマトリックスのアッセイを組み合わせたスクリーニングプラットフォーム(黄色ブドウ球菌用に開発された)を紹介します。これにより、長期的な化学療法効果の評価を含む、抗バイオフィルム創薬が可能になります。...

天然化合物ライブラリーの探査に適した抗バイオフィルムアッセイのプラットフォーム

天然物は、新薬および治療薬の開発の有望な出発点を表しています。しかし、化学的多様性が高いため、植物から新しい治療化合物を見つけることは困難で時間のかかる作業です。植物抽出物および分画から抗菌分子および抗バイオフィルム分子を同定するための簡便なアプローチを説明する。...

植物の抽出物と分率から新しい抗菌分子と抗バイオフィルム分子を同定し、齲蝕を予防する体系的アプローチ

このプロトコルは、ハイスループットの96ウェルペッグ蓋静的バイオフィルムスクリーニングのための自己組織化ディープウェルPCRプレート装置を使用してバイオフィルム成長およびバイオマス測定を実行する方法論を提示する。...

PCRプレートディープウェルマイクロプレートデバイスを用いた細菌バイオフィルムバイオマスの生成

このプロトコルは、酪農産業におけるバイオフィルムを根絶するための有機ペルオキシ酸の有効性を評価するための静的方法と動的方法を組み合わせたアプローチについて説明しています。このアプローチは、バイオフィルムを制御するための新しい生物学的または化学的製剤の有効性を試験するためにも使用され得る。...

静的法と動的法を組み合わせたアプローチによる有機ペルオキシ酸の乳バイオフィルム根絶効果評価

学ぼうBacillus subtilisバイオフィルムの再現性のある実験手法を確立し、走査型電子顕微鏡を用いて小分子阻害剤の効果を定量的・定性的に評価する方法。この手法は他のバイオフィルム形成菌への応用も可能です。

研究のための方法論

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