Name: ナノ粒子神経毒性を決定するために、代理バイオセンサーとしてミクログリア (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 37 s
Description: 学ぶナノ粒子に対するミクログリア応答のin vitro代理バイオセンサー法。活性化ミクログリアの条件培養液を用いて神経毒性を評価し、長期動物実験を省略して環境汚染物質の神経毒性を解析する革新的アプローチです。

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この作業は、米国退役軍人省BLR&D IK2 BX001686(TAB)と、ミネソタ大学ヘルシーフーズ、ヘルシー・ライブズ・インスティテュート(CMD、JPN、TABへ)およびミネソタ退役軍人医学研究教育財団(TABへ)からの助成金を受けました。BV2細胞株を提供してくださったPhilippe Marambaud博士(Feinstein Institute for Medical Research、ニューヨーク州マンハセット)とWeihua Zhao博士(メソジスト病院、ヒューストン、テキサス州)に感謝します。

1.ミクログリア細胞培養のメンテナンス<ol><li>温かい細胞培地（ダルベッコ改変イーグル培地、DMEM）、37℃、10％ウシ胎児血清（FBS）および1％ペニシリン/ストレプトマイシン/ネオマイシン（PSN）を補充しました。 </li><li> -80℃での貯蔵から25 - 通路18でBV2ミクログリア細胞の凍結ストックを入手します。急速に37℃の水浴中で細胞を解凍します。 </li><li>穏やかに75cm 2のセルへの転送10mLの細胞培養培地を含有するフラスコをベント。 </li><li> 37℃、5％CO 2中でフラスコをインキュベートします。培地を吸引し、24時間後に、新鮮な培地と交換します。 80％の密集度 - 約70になるまで細胞を増殖させます。 </li></ol> 2.カウントおよびめっきセル<ol><li> 37℃の水浴、暖かいDMEMおよび1×トリプシン-EDTA溶液です。 </li><li>吸引細胞からの培地とトリプシンの500μlを添加します。 5分 - 2、37℃でインキュベートします。 </li><li>スクレーパーを使用して、フラスコから細胞を除去し、5ミリリットルに懸濁DMEMの。 50ミリリットルチューブに3回を70μmのストレーナーを介して細胞を渡します。 </li><li>血球計数器を用いて細胞を計数し、10％FBSおよび1％PSNを補充した200μlのDMEMの最終容量で透明底板を壁/ウェル黒色に8,000細胞を播種します。 24時間、37℃で5％CO 2でプレートをインキュベートします。 </li><li>古いDMEMを削除し、ミクログリアを餓死血清を1％PSNを補っ温めたDMEM200μlで交換してください。 24時間、37℃で5％CO 2でプレートをインキュベートします。 </li></ol> 3.活性化ミクログリア<ol><li>別々のチューブ、AgNPs（0.01、0.05または0.1μgの/ ml）を希釈し、車両/ニュートラル制御（クエン酸ナトリウム、0.04ミリモル）の最終作業濃度1％のPSNを補充した無血清DMEMインチ</li><li>各ウェルから培地100μlのを削除し、適切な治療化合物の100μlで交換してください。 </li><li> 24時間、37℃で5％CO 2でプレートをインキュベートします。 </li></ol> 4. Fiの馴化培地をltering <ol><li>各ウェルから培地上清の200μLを収集し、収集チューブ（1.5〜2ミリリットルの容量）とフィルタ（10キロダルトンの分子量カットオフ）に移します。 </li><li>室温で15分間14,000×gで遠心分離します。 </li><li>フロースルー（粒子と上清）を捨て、新しいコレクションチューブにフィルター逆さまに置きます。 </li><li> 2分間室温で千×gで遠心分離します。 注：得られた濾過媒体は、（分泌されたサイトカインを含む）6倍濃縮されています。 </li><li> 10％FBSおよび氷上で1％のPSNと店を補充した新鮮なDMEMで400μlに濃縮物の体積を持参。 注：約390で特徴的なピークに基づいて、AgNPの濃度を生成し、残留AgNPsを濾過した培地から除去されるようにするには- 420 nmの10。 （ステップ3.1で説明したように0、0.01、0.025、0.05、0.1、および0.2μgの/ mlで）し、濾過簡単に説明すると、フィルタリングされていないAgNPsのアリコートを準備無血清DMEM中にビヒクル対照（クエン酸ナトリウム、0.04ミリモル）。黒に小分けし、ろ過サンプルおよび標準の50μlを透明底板を壁。分光光度計を使用して、390での吸光度を測定 - 410 nmおよびAgNPの濃度曲線に測定値を比較します。濾過したサンプルは、ビヒクルコントロールサンプルと同じ吸光度値を使用している場合、残留AgNPsが除去されると仮定することができます。 </li><li>市販のキットからの指示に従って、TNF-αの分泌を決定するために濾過した培地の半分を使用してください。 </li></ol> 5.視床下部細胞培養のメンテナンス<ol><li>暖かいDMEM細胞培養培地は、37℃に10％FBSおよび1％PSNを補充しました。 </li><li> 80℃で保存された25 - 視床下部の凍結ストック（mHypo-A1 / 2）通路18の細胞を取得します。急速に37℃の水浴中で細胞を解凍します。 </li><li>穏やかに75cm 2のセルへの転送10mLの細胞培養培地を含有するフラスコをベント。 </li><li> CO 2 5％でフラスコをインキュベート</sUB&gt; 37℃。培地を吸引し、24時間後に、新鮮な培地と交換します。 80％の密集度 - 約70になるまで細胞を増殖させます。 </li></ol> 6.視床下部の細胞毒性を決定します<ol><li>暖かいDMEMと37℃の水浴中で1×トリプシン-EDTA溶液。 </li><li>視床下部細胞から培地を吸引し、トリプシンの500μlを添加します。 5分 - 2、37℃でインキュベートします。ステップ2で前述したようにスクレーパーを用いてフラスコから細胞を除去します。 </li><li>血球計数器を用いて細胞を計数し、10％FBSおよび1％PSNを補充した200μlのDMEMの最終容量で透明底板を壁/ウェル黒色に5,000細胞で視床下部の細胞をプレートし、37℃で5％CO 2で一晩インキュベート。 </li><li>マルチチャンネルピペッターを使用して、古いメディアの100μlのを削除し、1倍の最終濃度になるように、濾過し、濃縮馴化培地を100μlを追加します。 </li><li> 24時間、37℃で5％CO 2でプレートをインキュベートします。 </li><li> 22を追加します。1;レサズリン試薬のリットル、37℃で5％CO 2で20分間静置します。 </li><li>マルチ分光光度計、記録蛍光（560nmのEX / 590 nmのEM）を使用して細胞生存率を測定しました。相対蛍光単位（RFU）として結果を報告します。 </li></ol>

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著者には開示すべき矛盾はありません。

最近の研究では、環境への曝露が肥満やその他の神経変性疾患の一因となることが裏付けられています 11,12。ただし、以前の研究で使用された手法は時間と費用がかかります。経済的考慮事項、生理学的に関連する送達システム、 in vivo 動物モデルの広範な使用による倫理的問題、および調査結果を有意義な健康勧告に変換することの難しさは、NP誘発性神経毒性の研究の進歩を妨げている主要な課題の一部です 13。したがって、 in vitro ミクログリア代理バイオセンサーの使用は、神経毒への環境曝露に不可欠なツールとなっています 14。上記の方法では、AgNPなどのナノ粒子がミクログリアをどのように活性化し、神経毒性を誘発するかを決定する直接的な方法を提供します。細胞は固定または溶解されていないため、遺伝子発現やウェスタンブロットなどの他の下流アプリケーションをミクログリアまたはニューロンに対して実行できることに注意する必要があります。TNF-α ELISAの実行に加えて、上清を使用して、刺激されたミクログリアからの一連のサイトカインおよび分泌因子を...

環境汚染は、具体的には、これらのナノ粒子（NP）の範囲の（1から20 nmの直径）、肥満および血液脳関門1-3を通過する能力に起因する他の神経変性疾患にリンクされています。汚染への高められた曝露は視床下部1を含む中枢神経系の炎症を誘発することができます。これが発生した一つの潜在的メカニズムは、ミクログリア（脳の免疫細胞）4のナノ粒子誘導活性化を介して可能性があります。以前の研究は、時間がかかり、高価であり、脳の健康上のNPの効果を研究するためにin vivoモデルで使用されており、直接NPはミクログリアにどのように影響するかの質問に答えていません。ミクログリアは、脳の微小環境の維持と分泌因子およびサイトカインの放出を介して、周囲のニューロンとの通信などの中枢神経系における多面的な役割を、果たしています。刺激に応じて、ミクログリアは、M1の広報に活性化することができますO-炎症またはM2抗炎症状態。 M2は、インターロイキン-4（IL-4）を含むミク​​ログリア放出抗炎症性サイトカインを活性化しながら、例えば、M1は、ミクログリアは、腫瘍壊死因子α（TNF-α）などの炎症性サイトカインを放出する活性化しました。大気汚染物質の神経毒性を決定するためのインビトロのバイオセンサーにおける当社の代理を検証するために、我々は、20nmの銀ナノ粒子（AgNPs）へのミクログリアの応答を測定しました。この記事の目的は、in vitroミクログリア細胞株は、マウスミクログリアのNPに対応し、どのようにミクログリアの活性化は、視床下部の細胞に影響を与えるをテストするための代理バイオセンサーのマーカーとして使用する方法を説明することです。この検証モデルの長期的な意図されたアプリケーションは、脳の健康と神経変性疾患に実世界の汚染物質の影響をテストすることです。我々は、マイクの暴露後のミクログリア活性化および視床下部の細胞の生存を測定するためのインビトロの 96ウェルフォーマットアッセイの詳細な説明を提供します<html>馴化培地をroglial。 ミクログリア活性化は、免疫吸着アッセイ（ELISA）結合されたTNF-αの酵素を用いAgNP暴露後測定しました。視床下部細胞上の活性化ミクログリアの効果を決定するために、AgNPsは濾過装置を用いて、ミクログリア上清（馴化培地）から削除されました。サイズに基づいてAgNPsを排除しながら濾過装置は、サイトカインを保持します。簡潔には、AgNPsの有無にかかわらず処理されたミクログリアからの上清を、収集し、フィルタに添加し、そして15分間、14,000×gで遠心分離しました。我々は、次に、視床下部の細胞生存率に対するミクログリア分泌されるサイトカインの影響を決定することができました。以前に5,6に記載されているように馴化培地（サイトカインを含む）への曝露後の細胞毒性はレサズリンベースのアッセイによって測定しました。代謝活性細胞はレザズリンを減少させ、生存細胞7の数に比例した蛍光シグナルを生成します。 NT &quot;&gt;（例えば、またはin vivo実験で共培養、トランスウェルのセットアップのような）他のものよりも、この技術を使用することのいくつかの利点がある。我々のモデルは、直接ミクログリアを活性化し、分泌された因子は、ニューロン8に毒性であるかどうかを決定する能力を提供します現在のプロトコルの使用は、BV2ミクログリアは、このプロトコルは、これらの特定の状況のために最適化されているが、方法があることができる。それに続く応答の決意9（mHypo-A1 / 2と命名）20 nmの直径のナノ粒子で刺激し、そしてマウスの視床下部の細胞を不死化し、不死化ミクログリア誘導細胞死の他のモデルにおいて、または一次ミクログリアおよびニューロンを含む他の細胞型で使用される改変されました。

<table><tbody><tr><td>細胞/試薬</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>マウスミクログリア細胞株(BV2)</td><td>Interlab Cell Line Collection (Genoa, Italy)</td><td>ATL03001</td><td></td></tr><tr><td>成体マウス視床下部細胞株mHypoA-1/2&nbsp;</td><td>セルティオンズ・バイオシステムズ(株)</td><td>CLU172</td><td></td></tr><tr><td>ダルベッコのモディファイドイーグル」s Medium</td><td>Invitrogen</td><td>10313-039</td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児血清&nbsp;</td><td>PAA Labs</td><td>A15-751</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン/ストレプトマイシン/ネオマイシン</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>15640-055</td><td></td></tr><tr><td>トリプシン-EDTA</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>25200056</td><td></td></tr><tr><td>銀ナノ粒子 (20 nm)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>730793</td><td></td></tr><tr><td> PrestoBlue 細胞生存率試薬</td><td>Invitrogen</td><td>A13262</td><td></td></tr><tr><td>マウス TNF-&アルファ;ELISA Max Delux</td><td>Biolegend</td><td>430904</td><td></td></tr><tr><td>Lipopolysaccharide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L4391</td><td></td></tr><tr><td>クエン酸ナトリウム</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S4641</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>企業名</td><td>カタログ番号</td><td>Comments</strong</td></tr><tr><td>>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>96 W 光学ボトムプレート、ブラックポリスチレン、細胞培養処理済み、蓋付き、滅菌済み</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>165305</td><td></td></tr><tr><td>アミコン ウルトラ0.5 遠心フィルターユニット、ウルトラセル-10 メンブレン付き</td><td>EMD ミリポア</td><td>UFC501008</td><td></td></tr><tr><td>SpectraMax M5 マルチモードマイクロプレート</td><td>分子デバイス</td><td>M5</td><td></td></tr><tr><td>ファルコン 50 ml 円錐形遠心分離機チューブコー</td><td>ニング、Inc</td><td> 14-432-22</td><td></td></tr><tr><td>ファルコンセルストレーナー70 &mu;m</td><td>Corning, Inc</td><td>08-771-2</td><td></td></tr><tr><td>卓上遠心分離機 5430</td><td>Eppendorf</td><td>22620560</td><td></td></tr></tbody></table>

ナノ粒子神経毒性を決定するために、代理バイオセンサーとしてミクログリア

Microglia as a Surrogate Biosensor to Determine Nanoparticle Neurotoxicity

大気汚染物質に含まれるナノ粒子は、神経伝達物質のプロファイルを変化させ、神経炎症を増加させ、脳機能を変化させることができます。したがって、ここで説明するアッセイは、神経炎症および神経変性疾患におけるミクログリアの役割を解明するのに役立ちます。脳に常在する免疫細胞であるミクログリアを代理バイオセンサーとして使用することで、炎症反応が神経細胞の損傷をどのように媒介するかについての新たな洞察が得られます。ここでは、BV2と命名された不死化マウスミクログリア細胞株を利用し、銀ナノ粒子(AgNP)を標準としてナノ粒子を曝露する方法について説明します。視床下部細胞の生存を手段として、ミクログリアをナノ粒子に曝露する方法、上清からナノ粒子を除去する方法、活性化ミクログリアから上清を使用して毒性を決定する方法について説明します。AgNP曝露後、BV2ミクログリアの活性化は、腫瘍壊死因子アルファ(TNF-α)酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)を用いて検証されました。上清をろ過してAgNPを除去し、サイトカインおよびその他の分泌因子をコンディショニング培地に残しました。次に、視床下部細胞をAgNP活性化ミクログリアからの上清に曝露し、ニューロンの生存率をレサズリンベースの蛍光アッセイを使用して決定しました。この技術は、ミクログリアを神経炎症の代理バイオマーカーとして利用し、神経炎症が他の細胞種に及ぼす影響を決定するのに役立ちます。

私たちは、上記のプロトコルを使用してナノ粒子に脳の反応のための代理バイオセンサーとしてそのミクログリアの機能を示します。我々の結果は、下流の神経細胞死に対するミクログリアの活性化の毒性作用の測定を含む。 図1は、ミクログリアを活性化し、分泌されたサイトカインは、視床下部ニューロンの生存率を低下させるかどうかを判断するためのプロトコルのワークフローを示しています。 TNF-αの分泌が大幅にAgNP露出（ 図2）以下に増加しました。視床下部ニューロンはAgNP-活性化ミクログリアから馴化培地にさらされている場合には、細胞の生存率が有意（ 図3）が低減される。 図4 AgNPsがミクログリアを活性化し、視床下部細胞死に貢献する潜在的なメカニズムの概要を説明します。 <img alt="図1" src="/files/ftp_...

Microglia(脳の免疫細胞)は、ナノ粒子が神経毒性にどのように影響するかを決定するための代理バイオセンサーとして使用されます。ナノ粒子に対するミクログリアの応答と、活性化されたミクログリアからの上清への視床下部ニューロンの曝露をアッセイして神経毒性を決定するために設計された一連の実験について説明します。

Nanoparticles found in air pollutants can alter neurotransmitter profiles, increase neuroinflammation, and alter brain function. Therefore, the assay ...

本プロトコルの全体的な目的は、ナノ粒子に対するミクログリアの反応を試験するためのin vitro代替バイオセンサーについて記述することです。その後、ナノ粒子で刺激したミクログリアからの条件培地に曝露した後の神経毒性を判定します。この手法は、神経毒性についてどのようにナノ粒子を能動的にスクリーニングするかといった、神経科学分野における重要な疑問への回答に役立ちます。この手法の主な利点は、我々のモデルを用いることで、高コストな長期的なげっ歯類を用いた研究を行うことなく、ミクログリアを直接活性化させ、分泌因子が神経毒であるかどうかを判断できる点にあります。この方法は、微粒子への曝露後に誘発されるミクログリア起因の細胞死についての知見を提供できるだけでなく、潜在的な神経毒性を持つ環境汚染物質の試験という観点から、他の神経変性疾患モデルにも適用可能です。一般的に、この手法に不慣れな方は、条件培地のろ過ステップに苦慮することがあります。これは、ナノ粒子のサイズ、形状、および濃度によってろ過効率が異なる可能性があるためです。準備として、10%FBSおよび1%PSNを添加したDMEMを37 degrees Celsiusまで温めておきます。次に、継代数18〜25代の凍結保存されたBV2マイクログリア細胞を用い、37°Cで迅速に融解させます。続いて、融解した細胞を10 mLの培地を含む75 cm²のベントキャップ付きフラスコに穏やかに移し、インキュベートします。24時間後に培地を交換し、細胞のコンフルエンシーが70-80%に達するまで培養を継続します。この時点で培地を吸引し、温めた1× trypsin EDTA溶液を500 µL添加します。フラスコをさらに数分間インキュベートした後、スクレーパーを用いて細胞を回収し、温めた5 millilitersのDMEMに懸濁させます。次に、70 micronストレーナーを用いてフラスコから細胞をろ過します。同じストレーナーを用いてこのろ過操作を3回繰り返し、細胞を50 milliliterチューブに回収します。ろ過後、細胞数を計測し、サプリメント添加DMEM 200 microlitersを用いて、黒壁透明底プレートに1ウェルあたり8000個の細胞を播種します。24時間インキュベートした後、ウェル内の培地を無血清DMEMに交換し、ミクログリアを飢餓状態にします。さらに24時間インキュベートした後、ミクログリアの活性化に進みます。そのためには、まず、銀ナノ粒子を無血清DMEMで希釈し、目的の作業濃度にします。次に、培地100 µLを処理化合物に置換します。ナノ粒子を含まない希釈したビークル溶液を陰性対照として必ず含めてください。そのまま24時間インキュベートし、解析に進みます。まず、各プレートウェルから200 µLの培養上清を回収し、マイクロ遠心チューブの上に設置したナノ粒子除去用フィルターにロードします。ナノ粒子をろ過する際、粒子のサイズ、形状、および濃度が融合効率に影響を与える点に注意してください。したがって、事前ろ過試験を行うことが推奨されます。次に、チューブを室温で14000g、15分間遠心分離します。その後、ナノ粒子を含むろ液を廃棄し、フィルターを新しい回収チューブに逆さまに設置します。フィルターを逆さまにして1000gで2分間遠心分離し、サイトカインを含む濃縮された条件培地を回収します。次に、調製したばかりのサプリメント添加DMEMを用いて回収液の量を400 µLまで増やし、チューブを氷上で保存します。ろ過後の培地から残留した硫黄ナノ粒子が除去されていることを確認するため、無血清DMEMを用いて、ブランクから0.2 µg/mLまでの濃度範囲の非ろ過ナノ粒子標準試料を調製します。次に、ろ過したサンプルおよび各標準試料を50 millilitersずつ黒壁クリアボトムプレートに分注し、390から410 nanometersの吸光度を測定します。サンプル中のTNF-alpha濃度を測定するには、残りの体積の半分を市販のキットで使用します。このアッセイのために、凍結ストックから視床下部細胞を調製してください。ミクログリア培養の確立に記載した方法と同様の手法を用います。最終的に、これらの細胞を黒壁クリアボトムプレートに、サプリメント添加DMEM 200 microlitersを用いて1ウェルあたり5000 cellsの密度で播種します。24時間の培養後、培地100 microlitersを除去し、活性化ミクログリア細胞培養液から回収してろ過・濃縮した培地100 microlitersに交換し、標準条件下でプレートを24時間インキュベートします。翌日、各ウェルに22 µLのレサズリン試薬を加え、さらに20分間インキュベートします。その後、マルチモード分光光度計を用いて蛍光測定を行い、相対蛍光単位（RFU）として細胞生存率を推定します。このプロトコルを用いることで、ナノ粒子に対する脳の反応を推定するための代替バイオセンサーとして、ミクログリア機能を利用することが可能です。銀ナノ粒子への曝露後、ミクログリアによるTNF-alfaの分泌が有意に増加しました。銀ナノ粒子で活性化させたミクログリアの条件培地に視床下部ニューロンを曝露させると、ニューロンの生存率は有意に低下しました。原理的に、銀ナノ粒子への曝露はミクログリアをM1前炎症状態へと活性化させました。その後、放出された前炎症性サイトカインが周囲の細胞死を誘発します。このビデオを視聴することで、ナノ粒子に対する反応の検証、およびその反応が神経毒性を有するかどうかを確認するためのサロゲートバイオセンサーとして、ミクログリアをどのように使用するかについて十分に理解できるはずです。この手法を習得し、適切に実施すれば、3〜4日間で完了させることができます。この手順に続いて、ミクログリア活性化後の他の分泌サイトカインのプロファイリングなどの手法を行うことで、ミクログリア活性化状態の表現型解析を行うことができます。

microglia-as-surrogate-biosensor-to-determine-nanoparticle

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

ナノ粒子の細胞の生体内分布を評価するために使用されるバイオイメージングの方法はnanoformulated化合物の治療と診断監視に適用できます。本明細書に記載の方法は、組織学的coregistrationで評価した場合、感度と特異性です。方法論は、げっ歯類から人間のアプリケーションへの翻訳経路を提供しています。...

診断と治療モニタリングのためのナノ材料の登録バイオイメージング

ミクログリアは中枢神経系の防衛と免疫監視の最初の行を提供するマクロファージを常駐しています。...

ノーマルCNSのリアルタイムPCRによると神経炎症時のミクログリアにおけるマイクロRNAの検出

このビデオは、ミクログリアを使用してナノ粒子の神経毒性効果を評価する方法を示しています。ナノ粒子によるミクログリアの活性化、ミクログリア由来の炎症誘発性サイトカインを単離するための条件付け媒体のろ過、および条件化媒体による視床下部ニューロンの毒性試験の手順を概説しています。...

ミクログリアを代理バイオセンサーとして用いたニューロンにおけるナノ粒子誘起毒性の判定

ミクログリア生物学の成功の調査の一つの鍵は、CNS組織からの単離の間にex vivoでミクログリア免疫機能の維持である。蛍光イメージング、免疫細胞、および炎症誘発性刺激リポ多糖（LPS）とパム3 CSK 4（PAM）を用いたELISA次のミクログリアの活性化によって評価されるように、高純度と免疫機能細胞培養で回転振盪結果を経由してミクログリアを分離する。...

マウス新生児から保護免疫表現と機能皮質ミクログリアの分離

小膠細胞は、それらの細胞外環境に材料を貪食又は巻き込むための高い能力を有する中枢神経系（CNS）の居住者の免疫細胞である。ここでは、シナプスのコンポーネントのミクログリア媒介貪食を可視化し、測定するために広く適用可能で信頼性が高く、高度に定量的なアッセイが記載されている。...

貪食アッセイ：CNS食細胞と神経細胞間の相互作用を評価するためのプロトコル

ミクログリアの活性化および小膠は、慢性神経変性に重要な応答です。ここでは、in vivoで 、共焦点検眼鏡による網膜CX3CR1-GFP +ミクログリア細胞の長期的な可視化のための方法を提示し、閾値と形態計測のために識別し、それらの活性化を定量化するために分析します。我々は、年齢関連の緑内障の早期の段階でミクログリアの変化を監視します。...

共焦点検眼鏡イメージングとマウス緑内障における細胞の形態計測：神経変性中に網膜ミクログリアの活性化のインビボダイナミクス

組織の恒常性と不十分な食細胞機能の維持が病態に関与しているためにミクログリアの貪食作用が重要です。しかしながら、 インビボでのミクログリアの機能を評価することは技術的に困難です。私たちは、正確に監視し、生理的な環境の中でミクログリアの貪食の可能性を定量化するためのシンプルでありながら堅牢な技術を開発しました。...

網膜ミクログリアの貪食機能を評価します<em&gt;インビボ</em&gt;フローサイトメトリーベースのアッセイを使用しました

ここでは、in vitroの実験のために出生後の仔マウス（1日目）からミクログリアを分離するためのプロトコルを提示します。分離のこの即興方法は、高収率および高純度、ミクログリア生物学を解明する目的で、広範囲の実験を可能にする別の方法を超える有意な利点の両方を生成します。...

強化された純度と汎用性を持つ初代ミクログリアの迅速かつ洗練されたCD11b磁気分離

特性と密度勾配遠心によるマウスのプライマリ ミクログリアの分離

本論文は、スピニングディスク共焦点顕微鏡を用いて網膜におけるミクリアの運動性とシナプス後点との接触を可視化・定量化する方法を示します。...

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マッピングミログリアパラメータソフトウェア(MMPS)は、コーディングの専門知識を必要とせず、免疫蛍光画像から単細胞微粒細胞形態学解析を半自動化するユーザーフレンドリーな解析パイプラインです。齧歯類リポ多糖誘発神経炎症モデルで検証され、MMPSは活性化に関連する形態変化を再現性可能に検出し、標準化され拡張可能なミクログリア表現型化を可能にします。...

マッピングミクグリアパラメータソフトウェア(MMPS):定量的なミクログリア形態分析のためのオープンソースで使いやすいツール

学ぶナノ粒子に対するミクログリア応答のin vitro代理バイオセンサー法。活性化ミクログリアの条件培養液を用いて神経毒性を評価し、長期動物実験を省略して環境汚染物質の神経毒性を解析する革新的アプローチです。

ナノ粒子神経毒性を決定するために、代理バイオセンサーとしてミクログリア

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