Name: ラットの腹部大動脈の収縮を通じて心臓リモデリングのモデル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-02T10:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 31 s
Description: 学ぶラットの腹部大動脈収縮による心臓肥大・リモデリングモデル。侵襲性が低く再現性の高い手技で、高血圧性心疾患の治療標的探索や心血管シグナル伝達の研究に有用です。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

著者の研究は、科学技術省(MOST 103-2320-B-002-068-MY2)、国立衛生研究所(NHRI-EX104-10418SC)、国立台湾大学(NTU 104R4000)からの助成金によって支援されました。

全ての動物実験は、実験動物の管理と使用に関する指針に従って行わ米国国立衛生研究所によって公開（NIH公開番号85-23、1996年改訂）しました。このプロトコルはにより、国立台湾大学の施設内動物管理使用委員会によって定められたガイドラインに基づいて承認されました。 1.動物の手術<ol><li>ホーニング石の上に針の先端を鈍化により、22 G注射針を準備します。ペンチを使用して、直角に針をひだのあります。 </li><li>手術前に、必要な手術器具や材料、ならびに回復ケージを準備します。使用前にすべての機器および外科用品をオートクレーブ。 </li><li> 200グラムの周りにラットを維持し、食物および水に自由にアクセス制御された温度（21±2℃）で12時間の明/暗サイクルの下でそれらを保ちます。各グループに少なくとも6匹のラットが含まれます。ペントバルビタールでラットを麻酔または別の適切な麻酔薬（0.5ミリリットル、腹腔内を75mg / kg）を。尾の反射をテストすることによって、麻酔の深さを確認してください。 注：テール反射の欠如は、適切な麻酔の指標です。 </li><li>体温を維持するために加熱パッドで手術台に仰臥位にラットを置きます。外科的な汚染を避けるために、動物のバリカンヘアリムーバーローションでラットの腹部を剃ります。手術前にベタジンまたは別のクレンジング試薬ときれい-坊主腹部をスクラブ。 注：これは、作業中は無菌領域を維持することが重要です。 </li><li>メスで、腹部の正中線に沿って2cmの切開を行います。通常の生理食塩水を使用して、手術中に湿った腹部臓器を維持します。後部腹膜領域にある下大静脈を露出させるためにコットンボールを使用して、側に慎重に消化器官を置き換えます。並置され、通常は上にある腹部大動脈を、識別下大静脈の左。 注：腹部大動脈は、心拍数に合わせて脈動する容器です。 </li><li>下の血管を明らかにピンセットで腹膜を貫通。静かに腎動脈に隣接する腹部大動脈を隔離し、右の起源と左腎動脈との間に腹部大動脈の下に8センチメートル長4-0絹縫合糸を渡します。 </li><li>縫合糸と緩い二重結び目を作ります。直径3mmのループを残して、ループ内の鈍化と曲がっ22 G針を配置します。大動脈と針の周りに結び目を締めて、直径0.7mmの収縮を達成するために、直ちに針を取り除きます。 </li><li> 6-0吸収性縫合糸材料と腹腔を閉じます。単純結節縫合で筋肉や皮膚切開を縫合。感染を防ぐために、ヨードチンキで手術部位を洗浄。 </li><li>それは十分な意識を取り戻すまで、自由な移動によって示されるように、慎重に動物を観察しますおよび食物摂取。それは胸骨横臥位を維持するのに十分な意識を取り戻したまで無人の動物を放置しないでください。術後の痛みを防ぐために、アセトアミノフェン（0.5ミリリットル中300ミリグラム/ kg、腹腔内）でラットを扱います。 注：制度的政策によって承認されたように、ユーザは、鎮痛薬を投与すべきです。 </li></ol> 2.組織および血液サンプル採取<ol><li> 10週間後の手術では、ラットを計量し、ペントバルビタール（0.5ミリリットル、腹腔内を75mg / kg）で、それを麻酔。手術前に、その尾の反射をテストすることによって、麻酔の深さを確認します。金属製のトレイにラットを置きます。 </li><li>メスを用いて首の正中線に沿って2cmの切開を行います。気管を露出するためにピンセットで慎重に筋肉を変位させます。気管に平行であり、心拍数と時間的に脈動頚動脈を識別するために慎重に観察します。 </li><li> EDTAでコーティングされた採血管に頸動脈から血液を採取します。すぐに遠心分離機2,000×gで15分間、血液および血漿を収集します。必要になるまで-80℃で血漿を保管してください。 </li><li>剣状突起の正中線の周りに、胸部に5cmの切開を行います。鋭いピンセットでダイアフラムを突き刺します。ハサミを使用して、心臓を露出するために、両側の半ば鎖骨ラインに沿って肋骨を切断して除去します。心臓と血管の境界線に沿って慎重に心を切り出します。組織をつかんずに静かに心を削除します。 </li><li>灌流針に大動脈トランクを結びつけることによって修正されたランゲンドルフ灌流装置に心をマウントします。クレブス緩衝液で心臓灌流（110 mMの塩化ナトリウム、2.6のKClを含有する1.2mMのKH 2 PO 4、1.2mMのMgSO 4を、25mMのNaHCO 3を、および11 mMグルコース[pHが7.4]）は、血液を洗い流します。心を計量し、心臓重量対体重比を算出します。氷上で4％パラホルムアルデヒドで心臓を修正しました。パラホルムアルデヒド蒸気はTOXであるため、マスクを着用することを忘れないでくださいIC。 </li></ol> 3.組織線維症の定量化<ol><li>組織切片デバイス上でパラホルムアルデヒド固定心臓組織を置き、2ミリメートルの厚さの切片を切りました。包埋カセットに組織切片を置きます。段階的なアルコール浴一連の組織を脱水（50％、75％、95％、1時間毎、100％）。 </li><li> 1時間ワックスに最終的に1時間キシレンで組織に浸潤し。包埋カセットに浸透組織を置き、パラフィンワックスに埋め込むことができます。ミクロトームまで室温でパラフィンブロック中に包埋組織を保管してください。 </li><li>厚さ4μmの切片に埋め込まれた組織をスライス。 45ºCの水浴中でセクションを配置します。角度で水浴中にスライドガラスを浸し、徐々にスライドへの部分的な付着を可能にするためにパラフィン切片のエッジに近づきます。 </li><li>組織切片の下で潜在的なエアポケットを除去するために、より良い取り付けを容易にするために、お風呂の中と外にスライドを移動します。ドライトン彼は1時間37ºCでスライドし、組織染色、室温で保管してください。 </li><li>タンクにスライドを置きます。 30分間キシレンでスライドを脱パラフィン化し、最後に蒸留水で（3分間それぞれ95％、75％、50％）を順次希釈アルコールでそれを再水和します。完全に1時間組織切片をカバーするために十分なピクロシリウス赤色の溶液を使用してください。 2変更のための0.5％酢酸溶液中でスライドを洗浄し、その後無水アルコールで2回のすすぎを行います。 </li><li>スライドを空気乾燥し、カバースリップで合成樹脂でスライドをマウントします。可視光フィールドでスライドを撮影。 注：写真の中の赤い部分は、200Xの倍率で顕微鏡下ピクロシリウス赤のプラスゾーンを示しています。線維症11の程度を示す総面積、オーバーピクロシリウス赤のプラスゾーンの割合を計算します。 </li></ol> 4.ブラッドトロポニン定量<ol><li>血漿トロポニンレベルを定量酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA）を使用。重複の各サンプルをアッセイ。負荷血漿50μlの、適切なウェルに抗体カクテル50μlの。プレートを密封し、400rpmでプレートシェーカー上で室温で1時間インキュベートします。 注：血漿中の心臓トロポニンは、心臓傷害のマーカーです。 </li><li>液体を吸引し、洗浄緩衝液250μlの3回各ウェルを洗浄します。最後の洗浄後、プレートを反転し、過剰な液体を除去するために清潔なペーパータオルに対してそれをブロット。 </li><li>各ウェルにテトラメチルベンジジン基質100μlを加え、400rpmでプレートシェーカー上で暗所で10分間インキュベートします。各ウェルに停止液100μLを加えます。混合するために1分間プレートシェーカー上でプレートを振ります。 450nmでの光学密度（OD）を記録します。 注：トロポニン濃度がOD値に比例します。 </li></ol>

<ol><li>Houser, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+heart+failure%3A+a+scientific+statement+from+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Animal models of heart failure: a scientific statement from the American Heart Association.</a> Circ Res. 111, 131-150 (2012).</li>
<li>Towbin, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inherited+cardiomyopathies%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+J%22%5BJournal%5D)">Inherited cardiomyopathies.</a> Circ J. 78, 2347-2356 (2014).</li>
<li>Breckenridge, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+failure+and+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Heart failure and mouse models.</a> Dis Model Mech. 3, 138-143 (2010).</li>
<li>van Bilsen, M., van Nieuwenhoven, F. A., van der Vusse, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+remodelling+of+the+failing+heart%3A+beneficial+or+detrimental%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Metabolic remodelling of the failing heart: beneficial or detrimental?</a> Cardiovasc Res. 81, 420-428 (2009).</li>
<li>Patten, R. D., Hall-Porter, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+animal+models+of+heart+failure%3A+development+of+novel+therapies%2C+past+and+present%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Heart+Fail%22%5BJournal%5D)">Small animal models of heart failure: development of novel therapies, past and present.</a> Circ Heart Fail. 2, 138-144 (2009).</li>
<li>Gu, W. L., Chen, C. X., Huang, X. Y., Gao, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+angoroside+C+on+pressure+overload-induced+ventricular+remodeling+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Phytomedicine%22%5BJournal%5D)">The effect of angoroside C on pressure overload-induced ventricular remodeling in rats.</a> Phytomedicine. 22, 705-712 (2015).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alteration+of+cardiac+ACE2%2FMas+expression+and+cardiac+remodelling+in+rats+with+aortic+constriction%5BTitle%5D)+AND+%22Chin+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Alteration of cardiac ACE2/Mas expression and cardiac remodelling in rats with aortic constriction.</a> Chin J Physiol. 57, 335-342 (2014).</li>
<li>Tardif, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nestin+upregulation+characterizes+vascular+remodeling+secondary+to+hypertension+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Nestin upregulation characterizes vascular remodeling secondary to hypertension in the rat.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 308, H1265-H1274 (2015).</li>
<li>Li, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myeloid+mineralocorticoid+receptor+deficiency+inhibits+aortic+constriction-induced+cardiac+hypertrophy+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Myeloid mineralocorticoid receptor deficiency inhibits aortic constriction-induced cardiac hypertrophy in mice.</a> PLoS One. 9, e110950(2014).</li>
<li>Ku, H. C., Su, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DPP4+deficiency+preserved+cardiac+function+in+abdominal+aortic+banding+rats%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">DPP4 deficiency preserved cardiac function in abdominal aortic banding rats.</a> PLoS One. 9, e85634(2014).</li>
<li>Lee, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caffeic+acid+ethanolamide+prevents+cardiac+dysfunction+through+sirtuin+dependent+cardiac+bioenergetics+preservation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Sci%22%5BJournal%5D)">Caffeic acid ethanolamide prevents cardiac dysfunction through sirtuin dependent cardiac bioenergetics preservation.</a> J Biomed Sci. 22, 80(2015).</li>
<li>Gs, A. K., Raj, B., Santhosh, K. S., Sanjay, G., Kartha, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ascending+aortic+constriction+in+rats+for+creation+of+pressure+overload+cardiac+hypertrophy+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Ascending aortic constriction in rats for creation of pressure overload cardiac hypertrophy model.</a> J Vis Exp. , e50983(2014).</li>
<li>deAlmeida, A. C., van Oort, R. J., Wehrens, X. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transverse+aortic+constriction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Transverse aortic constriction in mice.</a> J Vis Exp. , e1729(2010).</li>
<li>Schaefer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+New+Animal+Model+for+Investigation+of+Mechanical+Unloading+in+Hypertrophic+and+Failing+Hearts%3A+Combination+of+Transverse+Aortic+Constriction+and+Heterotopic+Heart+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A New Animal Model for Investigation of Mechanical Unloading in Hypertrophic and Failing Hearts: Combination of Transverse Aortic Constriction and Heterotopic Heart Transplantation.</a> PLoS One. 11, e0148259(2016).</li>
<li>Rodriguez-Iturbe, B., Quiroz, Y., Kim, C. H., Vaziri, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypertension+induced+by+aortic+coarctation+above+the+renal+arteries+is+associated+with+immune+cell+infiltration+of+the+kidneys%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hypertens%22%5BJournal%5D)">Hypertension induced by aortic coarctation above the renal arteries is associated with immune cell infiltration of the kidneys.</a> Am J Hypertens. 18, 1449-1456 (2005).</li>
<li>Ku, H. C., Lee, S. Y., Yang, K. C., Kuo, Y. H., Su, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modification+of+Caffeic+Acid+with+Pyrrolidine+Enhances+Antioxidant+Ability+by+Activating+AKT%2FHO-1+Pathway+in+Heart%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Modification of Caffeic Acid with Pyrrolidine Enhances Antioxidant Ability by Activating AKT/HO-1 Pathway in Heart.</a> PLoS One. 11, e0148545(2016).</li>
<li>Bovill, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+anesthesia+for+the+patient+with+left+ventricular+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cardiothorac+Vasc+Anesth%22%5BJournal%5D)">Intravenous anesthesia for the patient with left ventricular dysfunction.</a> Semin Cardiothorac Vasc Anesth. 10, 43-48 (2006).</li>
<li>Inoko, M., Kihara, Y., Morii, I., Fujiwara, H., Sasayama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transition+from+compensatory+hypertrophy+to+dilated%2C+failing+left+ventricles+in+Dahl+salt-sensitive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Transition from compensatory hypertrophy to dilated, failing left ventricles in Dahl salt-sensitive rats.</a> Am J Physiol. 267, H2471-H2482 (1994).</li>
<li>Heyen, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural%2C+functional%2C+and+molecular+characterization+of+the+SHHF+model+of+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Structural, functional, and molecular characterization of the SHHF model of heart failure.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 283, H1775-H1784 (2002).</li>
</ol>

著者らは開示するものは何もない。

高血圧性心疾患は、罹患率と死亡率に大きく寄与する主要な健康問題であり、心肥大や心不全につながる可能性があります5。ヒトにおける高血圧性心疾患の病因と進行は複雑であるため、根底にあるメカニズムを調査し、心臓の構造と機能の改善を目的とした新しい治療法をテストするには、適切な動物モデルが重要です5。慢性心疾患をシミュレートする腹部大動脈収縮モデルは、心臓血管研究に有効な方法です。腎動脈に隣接する腹部大動脈が収縮して心臓のリモデリングを誘発し、最終的には心臓損傷につながります。心臓リモデリングの程度は、心臓の重量と体重の比率を計算し、コラーゲン発現を測定するためのピクロシリウス染色を実行し、血漿心筋トロポニンレベルを検出するための ELISA ベースの方法を実施することによって評価されます。腹部大動脈収縮法により、ラットモデルにおける心臓リモデリングをシミュレートする、より再現性の高い結果が得られます。 
心臓病の外科モデルは、高血圧と大動脈弁狭窄症の病態生理学を厳密に模倣するのに有利です1。心肥大を誘発するために現在利用可...

心不全は、複雑な臨床症候群、疲労、呼吸困難、運動不耐性を含むそれらの症状、および末梢組織における体液貯留です。これは、先進国1における死亡の主な原因です。別にサルコメアタンパク質またはイオンチャネル2における突然変異によって引き起こされる継承心筋から、心筋機能障害は、高血圧、心臓弁膜症、肥満、および糖尿病3を含む医学的状態、種々の方法により生じさせることができます。最終的には心不全3,4につながる循環要求を満たすために不十分な心臓のポンプ能力、に心筋の構造、電気伝導、およびエネルギー代謝のリードの変化。心不全のメカニズムを調査し、したがって、心臓血管研究の分野において重要です。心不全の進行につながる分子メカニズムを識別することは、最終的に新規治療標的または有用なバイオマーカーの発見を助けることができます<s&gt; 1アップ。ヒト5に心不全とキー臨床的特徴を共有する心不全の動物モデルを開発することが重要です。 心臓肥大及びリモデリングが心不全の発症において重要な役割を果たしています。高血圧性心疾患は、心臓肥大およびヒト患者1に見られる不適応リモデリングの主要な寄与因子です。これらの人間の条件を模倣するために、動物モデルは、多くの場合、外科的処置を介して確立されます。具体的には、横方向または腹部大動脈は、最終的に心臓内の圧負荷につながる左心室に対する抵抗力を高めるために狭窄することができます。この現象は通常、心臓血管系の機能的な要求を満たすために、心臓肥大、心筋細胞の生理学的補償をもたらします。しかし、機能的な需要は、心臓線維症およびcontracにつながる、通常の生理学的代償機構を無効にしますタイルの減損。横方向の大動脈狭窄（TAC）手術は、多くの場合、大動脈弓から開胸、機械換気、および胸腺の分離および脂肪組織を含む複雑な手順を伴います。これとは対照的に、腹部大動脈狭窄は、単純な実験手法6-8を必要とします 。腹部大動脈は、左右の腎動脈との間に、手術中の狭窄です。心肥大およびリモデリングは、数週間腹部大動脈狭窄手術6-8後に観察することができます。彼らは、横大動脈狭窄手術9,10によって生成されたものと同様の堅固な高血圧性心疾患を生じさせます。ここで、我々は、効率的な再現性の高い、かつ低侵襲性の方法を用いて、ラットで腹部大動脈狭窄を行うためのプロトコルを記述します。腎動脈に隣接し、腹部大動脈を4-0絹糸により形成さ0.72ミリメートルループによって絞られます。手術、心臓肥大およびremodelin後10週間gを観察することができます。腹部大動脈狭窄誘発性心肥大のラットモデルは、病気のメカニズムや病態生理学、ならびに潜在的な治療薬の開発を研究するためのプラットフォームを提供します。

<table><tbody><tr><td>22Gシリンジ針&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>&nbsp;&nbsp;BDバイオサイエンス&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td></td><td></td>309572</tr><tr><td>EDTA採血管</td><td>&nbsp;&nbsp;BDバイオサイエンス&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td></td><td></td>REF365974</tr><tr><td>4-0シルク縫合&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>シャーポイント&トレード;製品情報&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>DC-2515N</td><td></td></tr><tr><td>6-0 シルク縫合糸&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>シャーポイント&トレード;製品情報&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>DC-2150N</td><td></td></tr><tr><td>ペントバルビタール&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>シグマ・アルドリッチ&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1507002パラホルムアルデヒド&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>シグマ・アルドリッチ&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td></td><td></td>441244</tr><tr><td>アセトアミノフェン</td><td>Sigma アルドリッチ&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>A7085</td><td></td></tr><tr><td>ピクロシリウス 赤い溶液&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>アブカム&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>ab150681</td><td></td></tr><tr><td>心筋トロポニンキット&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>&nbsp;アブカム&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>ab200016</td><td></td></tr><tr><td>Imagequant</td><td>分子動力学</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Langendorff&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>&nbsp;ADインストゥルメント&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td></td><td></td>ML870B2</tr></tbody></table>

ラットの腹部大動脈の収縮を通じて心臓リモデリングのモデル

A Model of Cardiac Remodeling Through Constriction of the Abdominal Aorta in Rats

心不全は、世界中の主要な死因の一つです。これは、疲労、呼吸困難、運動不耐症、体液貯留などの複雑な臨床症候群です。心不全では、心筋の構造、電気伝導、エネルギー代謝の変化が進行し、収縮性機能障害、不整脈のリスク増加、突然死を引き起こします。高血圧性心疾患は、心不全に関連する心臓リモデリングの主要な要因の1つです。高血圧性心疾患を模倣する最も一般的に使用される動物モデルは、大動脈を狭窄するなどの外科的介入によって作成されます。腹部大動脈収縮は、心不全につながる圧力過負荷を誘発するための有用な実験手法です。手術は、胸部を開いたり、人工呼吸器を通したりすることなく、簡単に行うことができます。腹部大動脈収縮誘発性心臓病理は徐々に進行するため、このモデルは臨床的な高血圧性心不全に関連しています。心臓の損傷とリモデリングは、手術の10週間後に観察できます。ここで説明する方法は、疾患メカニズムの研究や新規治療法の試験に適した高血圧性心疾患動物モデルを作成するためのシンプルで効果的なアプローチを提供します。

10週間の腹部大動脈狭窄、手術後、得られた心臓の病状を分析しました。心臓の組織学は、体重に対する心臓重量の比を計算することによって、心臓におけるコラーゲンの量を検出することによって測定しました。心臓の損傷は、プラズマ心筋トロポニンの濃度を測定することにより確認しました。 図1Aに示すように、より高い心臓重量対体重比（ 図1B）、心肥大の指標によって示されるように、心臓の大きさは、腹部大動脈狭窄、手術後に拡大しました。ピクロシリウス赤染色を使用して、増加したコラーゲン含有量（赤）で染色された線維性心筋は、通常領域（イエロー、 図2）から区別することができます。心臓線維症は、Cと比較して、腹部大動脈狭窄手術（ 図2B）の後に増加しました<html> ontrols（ 図2A）。結果は、...

心肥大とリモデリングを誘発する腹部大動脈収縮のラットモデルが記述されています。効率的で再現性が高く、低侵襲な方法を使用して、心筋肥大および機能障害の研究にシンプルでありながら有用なプラットフォームを提供します。

Heart failure is one of the leading causes of death worldwide. It is a complex clinical syndromethat includes fatigue, dyspnea, exercise intolerance, and ...

この手術手順の全体的な目的は、心筋肥大、リモデリング、および機能不全を研究するための簡便なプラットフォームを提供することです。この手法は、心肥大やリモデリングに関与するシグナル伝達など、心血管分野における重要な疑問への解答に寄与します。また、高血圧性心疾患における新規の治療標的の発見にも役立ちます。この手法の主な利点は、非常に単純な外科的手技で済む低侵襲な方法でありながら、結果の再現性が非常に高いことです。これらの手法の意義は、高血圧性心疾患の治療にまで及びます。腹部大動脈の狭窄は、圧力負荷を誘発し、最終的に心肥大、リモデリング、および心不全を引き起こすためです。まず、ホーニングストーンを使用して22ゲージの注射針の先端を鈍らせ、準備します。次に、プライヤーを用いて針を直角に折り曲げます。回復用ケージを含む必要な手術用資材を準備し、手術器具をオートクレーブで滅菌します。ラットを約200 gに維持し、温度管理された環境下で12時間の明暗サイクルで飼育し、餌と水を自由に摂取できるようにします。体温を維持するため、加熱パッドを備えた手術台の上にラットを仰臥位で配置します。被毛による傷口の汚染を防ぐため、手術部位を完全に剃毛します。次に、ベタジンまたは他の洗浄剤を用いて、除毛した腹部を洗浄します。続いて、メスを用いて腹部正中線に沿って2 cmの切開を加えます。その後、生理食塩水を用いて腹腔内臓器を湿らせ、手術中も臓器が乾燥しないように維持します。綿球を用いて消化器を慎重に脇に寄せ、下大静脈と後腹膜領域を露出させます。次に、下大静脈に隣接し、通常はその左側に位置する腹大動脈を確認します。その後、ピンセットで腹膜を穿刺し、その下にある血管を露出させます。腎動脈に隣接する腹部大動脈を慎重に単離し、左右の腎動脈の起始部間の血管下に、長さ8 cmの4/0シルク縫合糸を通します。縫合糸で緩い二重結びを作り、直径3 mmのループを残します。次に、先端を鈍化させ曲げた22ゲージの針をそのループ内に配置します。大動脈と針の周囲の結紮線を締め、直ちに針を抜去して、直径0.7 mmの狭窄を作成します。6/0縫合糸を用いて腹腔を閉鎖します。その後、単純結紮縫合を用いて筋肉および皮膚の切開部を閉鎖します。感染を防止するため、ヨードチンキを用いて手術部位を洗浄します。術後の疼痛を軽減するため、アセトアミノフェンを投与し、自由な動きや摂食によって示される十分な意識が回復し、胸臥位を維持できるまで動物を注意深く観察します。術後10週目にラットの体重を測定します。動物を麻酔し、麻酔深度を確認した後、ラットをメタルトレー上に置きます。次に、剣状突起の中線付近の胸部領域に5 cmの切開を加えます。鋭尖 forceps を使用して横隔膜を穿刺します。次に、はさみを用いて、心臓を露出させるために両側の鎖骨中線に沿って肋骨を切り取り、除去します。心臓および血管の境界に沿って、慎重に心臓を切り出します。その後、組織を掴まないように注意して、心臓をそっと取り出します。大動脈幹を灌流針に結紮し、心臓を改良ランゲンドルフ灌流装置に固定します。次に、Krebs緩衝液を用いて心臓を灌流し、血液を洗い流します。心臓の重量を測定し、心重量対体重比を算出します。次に、マスクを着用した状態で、器官を4%パラホルムアルデヒドに入れ、氷上で一晩固定します。心臓組織を固定した後、組織切断装置にセットし、厚さ2 mmのスライスに切り分け、切片を埋め込みカセットに入れます。テキストプロトコルに従ってパラフィン埋め込みとさらなる切片作成を行った後、スライドをキシレンが入ったタンクに30分間浸し、脱パラフィン化します。その後、段階的に希釈したアルコール系列、続いて蒸留水を用いて組織を再水和させます。次に、組織切片が完全に浸る十分な量のピクロシリウスレッド溶液を用い、1時間インキュベートします。その後、0.5%酢酸溶液を用いてスライドを2回洗浄します。そして、サンプルを絶対アルコールで2回すすぎます。サンプルを風乾させ、カバーガラスを用いて合成樹脂で封入します。次に、顕微鏡を用いて200倍の可視光でスライドの画像を撮影します。最後に、線維化の程度を示す指標として、全面積に対するpicrosirius red陽性領域の割合を算出します。ここに示されているように、腹部大動脈狭窄術後に心ボリュームが増加しました。これは、心肥大の指標である心重量対体重比の上昇によって実証されています。ピクロシリウスレッド染色を用いることで、コラーゲン含有量が増加した線維化した心筋を正常領域と区別することができます。これらの染色サンプルで示されているように、腹部大動脈狭窄術後には、対照群と比較して心線維化が増加しました。習熟すれば、適切に実施することで手術を30分で完了させることができます。本手順の後、心機能に関するさらなる疑問を解消するために、心エコー検査などの他の手法を実施することができます。この技術の開発により、高血圧性心疾患分野の研究者が、心肥大、リモデリング、および心不全に関与するメカニズムを探索する道が開かれました。このビデオを視聴することで、ラットにおいて心肥大および心筋リモデリングを誘導するための腹部大動脈縮窄術の実施方法を十分に理解できるはずです。

a-model-cardiac-remodeling-through-constriction-abdominal-aorta

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

このビデオは、マウスモデルで心不全への進行を制限するための逆リモデリングにつながる可能性のある大動脈離脱の手法を示しています。デバンディング後、心室後負荷の大幅な減少は、心室肥大と線維症の退行を引き起こし、心機能の回復を引き起こします。...

外科的大動脈脱バンディング:大動脈狭窄のマウスモデルにおける左心室逆リモデリングを研究するための手順

我々は、小さな金属クリップを用いて上行大動脈の狭窄によってWistarラットにおける圧負荷及び左心室肥大を作成するための段階的な手順を記載している。このモデルは、広範囲に心肥大中にリモデリングの変化を研究するためのそのような変更の退行ための戦略を同定および評価するために使用される。...

圧負荷心肥大モデルの作成のためのラットの大動脈狭窄昇順

大動脈内腔と大動脈の縫合結紮にポリウレタン製カテーテル挿入、外栄養血管の血流の低下による慢性的な低酸素症を誘発します。この記事では、人間の AAA のものと同様の特性を持つ腹部大動脈瘤 (AAA)...

外ヴァーサ栄養血管の血流をブロックすることにより腹部の大動脈瘤の齧歯動物モデルの作成

ここでは、大動脈収縮の確立されたマウスモデルにおける外科的大動脈デベンディングのステップバイステッププロトコルについて説明する。この手順は、左心室逆リモデリングと肥大の回帰の基礎となるメカニズムを研究するだけでなく、心筋回復を加速させる可能性のある新しい治療オプションをテストすることができます。...

げっ歯類における大動脈デベンディングによる左心室逆改造の研究

我々は、リモデリングプロセスの開始に関与するシグナル伝達経路が活性化される中程度のリモデリングおよび初期の収縮機能不全を誘発した圧力過負荷のラットモデルの作成について述べている。この動物モデルは、心不全に対する早期治療用抗モデリング戦略を適用するための分子標的の同定に役立つ。...

過圧過負荷のラットモデルは、過小収縮期心不全とは対照的に中程度のリモデリングと収縮期機能不全を誘発した

本プロトコールは、左心疾患に起因する肺高血圧症のラットモデルにおいて上行大動脈バンディングを除去するための外科的処置を記載する。この技術は、肺循環および右心臓における逆リモデリングの内因性メカニズムを研究し、したがって、肺高血圧症および/または右心室機能障害を逆転させるための戦略を知らせる。...

ラットの大動脈剥離による左心疾患による肺高血圧症における逆血管リモデリングのモデル

本プロトコルは、下行大動脈狭窄を使用して駆出率を維持した心不全のミニブタモデルを確立するための段階的な手順を記述する。また、この疾患モデルの心臓の形態、組織型、および機能を評価する方法も紹介します。...

チベットミニブタの駆出率が保たれた心不全の外科的モデル

本プロトコールは、圧力過負荷心肥大を誘発するマウスにおける大動脈バンディングの新しい技術を記載する。バンディングには、内径が固定されたゴムリングが使用されます。この新しい手法は、将来の実験のために分散が少なく、再現性の高いデータを約束します。...

圧力過負荷誘発心肥大をモデル化するためのOリング大動脈バンディングと従来の横大動脈狭窄の比較

この研究は、初心者が学び、実行できるラットでの再現可能な異所性腹部心臓移植技術を示しています。さらに、ラットの新しい大動脈弁閉鎖不全症モデルは、異所性腹部心臓移植を行い、採取後にガイドワイヤーを使用してドナーの大動脈弁を損傷することによって生成されます。...

ラットにおける修正異所性腹部心臓移植と新規大動脈閉鎖不全症モデル

このプロトコルは、ブタの上行大動脈バンディングに対する低侵襲外科的処置について説明しています。...

ブタの大動脈弁狭窄症の低侵襲モデル

右心不全(RHF)は、右側の心臓の拡張と肥大を特徴とし、心室および心房の機能不全を引き起こします。RHFに関連する心肺疾患は、心不整脈のリスクの増加を伴います。この記事では、心室および心房性不整脈形成の亢進に関連する肺動脈バンディング誘発性RHFの標準化されたモデルについて説明します。...

肺動脈バンディングを用いた右側心臓リモデリングと不整脈のラットモデル

学ぶラットの腹部大動脈収縮による心臓肥大・リモデリングモデル。侵襲性が低く再現性の高い手技で、高血圧性心疾患の治療標的探索や心血管シグナル伝達の研究に有用です。

ラットの腹部大動脈の収縮を通じて心臓リモデリングのモデル

さらに動画を探す