Examining Proteasome Assembly with Recombinant Archaeal Proteasomes and Nondenaturing PAGE:  The Case for a Combined Approach

Dilrajkaur Panfair; Andrew R. Kusmierczyk

doi:10.3791/54860

組換え古細菌プロテアソームおよび非変性PAGEでプロテアソームアセンブリを調べる：複合的アプローチの...

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Biochemistry

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Examining Proteasome Assembly with Recombinant Archaeal Proteasomes and Nondenaturing PAGE: The Case for a Combined Approach

組換え古細菌プロテアソームおよび非変性PAGEでプロテアソームアセンブリを調べる：複合的アプローチのためのケースを

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09:57 min

December 17, 2016

DOI: 10.3791/54860-v

Dilrajkaur Panfair¹, Andrew R. Kusmierczyk¹

¹Department of Biology,Indiana University-Purdue University, Indianapolis (IUPUI)

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Summary

このプロトコルは、サブユニットの同時発現および組換えプロテアソームアセンブリのより完全な検査のために混合postlysisサブユニットの両方を使用しています。

Transcript

この実験の全体的な目標は、組換えサブユニットと非変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動(PAGE)を使用して、プロテアソームなどのマルチタンパク質複合体の集合を分析することです。この方法は、このタンパク質複合体の集合経路に沿ってどのような中間種に遭遇するかなど、プロテアソーム分野における重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、2つの並列アプローチによるアセンブリの迅速なスクリーニングを可能にし、オンおよびオフ経路中間体の検出を可能にすることです。この手順は、テキストプロトコルに記載されているように、細菌の発現から始まります。細菌溶解を行うには、プロテアソームサブユニットの所望の組み合わせを共発現する誘導細胞パレットを氷上で5分間解凍します。解凍したら、パレットを600マイクロリットルのLysis Bufferに再懸濁します。